Respuesta Los estudios de PK / PD indicaron una biodisponibilidad del 100% en corazón, aorta y riñón. El riñón fue el único tejido donde hubo una sugerencia de acumulación, según el examen histológico y los datos de PK / PD. La administración de una sola dosis de SRP-2001 demostró que la PPMO se eliminó rápidamente del corazón (en 2 horas), se eliminó de la aorta en 4 horas, pero se mantuvo en el riñón hasta el punto de 48 horas. El ddPCR cuantitativo demostró actividad inhibidora del empalme críptico de G608G en todos los tejidos excepto en la piel probada hasta ahora (aorta, corazón, riñón, hígado, cuádriceps, hueso), aunque la actividad varió dependiendo del tejido.

Francis, Mike y Wayne

RespuestaCon respecto a la pregunta, para ser honesto, no sé la respuesta a esta pregunta. En un adulto típico, sin embargo, no correlacionamos el grado de calcificación valvular con la ingesta de Mg / Ca; la calcificación más pesada probablemente se deba a otros factores.

Dra. Pinak Shah

Respuesta Estoy de acuerdo con la opinión del Dr. Shah. Probablemente las causas de calcificación valvular en el HGPS sean diferentes a la que vemos en los pacientes ancianos. Tampoco tengo conocimiento sobre el metabolismo del Ca y Mg.

Dr. Francesco Musumeci

Respuesta Lamin A / C null (Lmna^{- / -}) modelo de ratón desarrolla DCM acompañado de pérdida de función cardíaca. Además, estos ratones presentan defectos en la conducción cardíaca y fibrosis cardíaca extensa, y muerte prematura a las 5-8 semanas de edad (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Sin embargo, los modelos de ratón que carecen solo de Lamin A (Fong et al., 2006) o Lamin C (Coffinier et al., 2010) no muestran defectos cardíacos y tienen una vida útil normal.

Referencias:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT y Marian, AJ (2018). La supresión de factores de transcripción FOXO activados en el corazón prolonga la supervivencia en un modelo de ratón de laminopatías. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG y Young, SG (2010). La síntesis directa de lamina A, sin pasar por el procesamiento de la prelamina a, causa núcleos deformes en los fibroblastos, pero ninguna patología detectable en ratones. Revista de Química Biológica, 285(27), 20818-20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang , SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO y Young, SG (2006). La prelamina A y la lamina A parecen ser prescindibles en la lámina nuclear. La revista de investigación clínica, 116(3), 743-752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS y Kennedy, BK (2012). La expresión específica de cardiomiocitos de lamin A mejora la función cardíaca en ratones Lmna - / -. PLoS ONE, 7(8), 1-9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). La pérdida de la expresión de las láminas de tipo A compromete la integridad de la envoltura nuclear y conduce a la distrofia muscular. El diario de biología celular, 147(5), 913-920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Pregunta: De Tom Misteli: ¿cuánto tiempo duró el tratamiento con lonafarnib + tozilizumab en animales?
Respuesta Realizamos un experimento preliminar en animales heterocigotos desde la semana 22 hasta la semana 30. Deseamos centrarnos en este marco de tiempo para evaluar el efecto sobre el aumento de peso que se observó previamente con tocilizumab.

Pregunta: De Sgonzalo: Hermosa historia de Giovanna y Sammy !!! ¿Vio algún efecto secundario del tratamiento con tocilizumab? ¿O algún fenotipo que no haya mejorado en ratones con progeria? A la Dra. Giovanna Lattanzi: Pregunta: De tom misteli: ¿cuánto tiempo duró el tratamiento lonafarnib + tozilizumab en animales?
Respuesta Gracias Susana. No, no vimos ningún efecto secundario del tocilizumab. Entre los fenotipos examinados (cifosis, distrofia del tejido adiposo, defectos del cabello y de la piel, actividad locomotora, lesiones de la aorta e hipertrofia del miocardio) se retrasaron / mejoraron.

Comentario: De MARIE GERHARD-HERMAN: También se usa en EE. UU. Para enfermedades reumatológicas y vasculitis
Respuesta: Gracias Marie por esta interesante información sobre el uso de vasculitis.

Comentario: De pc stefano: el tocilizumab también está aprobado en Japón para tratar la enfermedad de Castleman sin efectos inmunosupresores
Respuesta: Gracias Stefano por estas informaciones.

Pregunta: De Delphine Larrieu: ¿ve alguna disminución del daño del ADN con el tratamiento con progerinina en células HGPS / modelos de ratón HGPS?
Respuesta Observamos que los genes relacionados con la reparación del ADN (BRCA1, Rad51, etc.) se alteraron después del tratamiento con progerinina.

Pregunta: De Delphine Larrieu: ¿Cómo actúa la progerinina en Werner?
¿Síndrome que, hasta donde yo sé, no expresa progerina? ¿Tiene la molécula otros objetivos?
Respuesta Las células de WS también pueden producir una pequeña cantidad de progerina como en las personas de edad normal.
células. Observamos la expresión de progerina en células WS a niveles de ARNm.
Creemos que la proteína WRN puede funcionar para inhibir la progerina. Sin embargo, en el
caso de pacientes con SW, dado que no hay proteína WRN, la expresión de progerina es
Se cree que ocurre en los años 20 y 30, tanto como se ve en personas de edad normal.
a las personas.

Pregunta: De Bob Bishop: ¿El sitio de unión de progerinina se define bioquímicamente o
estructuralmente? ¿Existe un ensayo bioquímico para encontrar compuestos adicionales?
con este mecanismo?
Respuesta Realizamos un ensayo de extracción de perlas de biotina-avidina y observamos la
interacción específica de perogerinina con progerina pero no con lamina A, lamina
B, p53 o emerina.
También realizamos el ensayo Elisa para encontrar compuestos adicionales que pudieran
ser inhibidores putativos de unión a progerina / lamina A. La proteína recombinante de progerina se incubó secuencialmente con una biblioteca química y lamin A.
Sin embargo, la progerinina fue la sustancia química más eficaz en la sustancia química.
biblioteca.

Pregunta: De John Cooke: Gran progreso Dr. Kim. ¿La progerinina reduce la
secreción de citocinas SASP?
Respuesta Observamos que la progerinina podría reducir la expresión de IL6 e IL8 en
Células HGPS.

Pregunta: De Susan Michaelis: ¿la progerinina está disponible para los investigadores?
Respuesta Por supuesto, está disponible si lo solicita.

Pregunta: De Thomas W Glover: Puede que me lo haya perdido, pero ¿cuál crees que es el
mecanismo responsable de los efectos beneficiosos en el síndrome de Werner?
Respuesta Las células derivadas de pacientes con SW también producen una pequeña cantidad de progerina, como
tanto como las células normales derivadas de personas mayores. La progerinina también puede
eficaz en células WS al reducir la expresión de progerina.

Respuesta Gracias por la pregunta: No, no la inflamación en sí. Parcialmente relacionado con la inflamación, hemos estudiado los macrófagos en este proyecto y hemos encontrado que el knockout de icmt en aumenta la salida de colesterol de los macrófagos, tanto basal como estimulado por ApoAI y HDL. Como este efecto se asocia a veces con un aumento del transporte inverso de colesterol in vivo, nos gustaría determinar si icmt la inhibición reduciría el desarrollo de aterosclerosis.

Pregunta: De vandres: ¿ha probado la corrección de ADN en fibroblastos de HGPS humanos de diferentes edades (in vitro) y ha probado la normalización de su fenotipo para ver si disminuye a medida que las células envejecen?
Respuesta No, no hemos probado la corrección en fibroblastos de pacientes de varias edades diferentes, solo de dos pacientes diferentes, que arrojaron resultados similares.

Pregunta: De Delphine Larrieu: ¡Efectos asombrosos! ¿Esperaría una progerina KO completa en ratones heterocigotos?
Respuesta En el mouse de copia única, no necesariamente esperaría eficiencias de edición muy diferentes a las que observamos actualmente, ya que debería haber un exceso de agente de edición para cada progerina.

Pregunta: De Andre Monteiro Da Rocha: ¿Cree que la reprogramación de un bajo porcentaje de células puede reparar la función de las células madre, pero podría conducir al agotamiento de las células madre adultas?
Respuesta No tenemos ningún dato que pueda informar una respuesta a esta pregunta.

Pregunta: De Mei: Parece un cardiomiocito, ¡hermosa tinción!
De Abby Buchwalter: ¿La expresión dominante negativa de Sun1 interrumpe todos los complejos LINC, incluidos los mediados por Sun2?
Respuesta Sí, hay evidencia de esto in vitro en que todas las Nesprins en el NE pueden ser desplazadas por DNSUN1

Pregunta: De Suet Nee Chen: ¿cómo y cuál es el mecanismo por el que el AAV9-SunDn es capaz de tener efectos a largo plazo? ¿A qué edad inyectó AAV9-Sun1DN a los ratones mutantes LMNA?
Respuesta Inyectamos el AAV DNSUN1 un día después de inducir la recombinasa Cre para eliminar laminA. Tenemos datos de que el DNSUN1 entregado por AAV continúa expresándose en los cardiomiocitos un año después de la inyección. Estamos haciendo experimentos de dosis / sincronización / respuesta ahora que estamos de vuelta en el laboratorio y podemos hacer nuestro propio AAV en cantidades suficientes.

Pregunta: De Martin Bergö, Viceordförande Kommittén för forskning: ¿Cuál crees que es la contribución relativa de lamin A ausente frente a lamin C en tus experimentos de eliminación de Lmna?
Respuesta No estoy seguro de esto, pero Sun1 interactúa con LaminA y en los ratones HGPS, la contribución debe ser toda LaminA (de la cual se deriva la progerina)

Pregunta: De jcampisi: ¿Cuál es la causa de muerte en SUN1 KO o hets?
Respuesta Buena pregunta que todavía no sabemos, pero actualmente sospechamos de algún grupo de músculo esquelético Necesitamos un análisis histopatológico decente de los ratones moribundos

Pregunta: De Tom Misteli: Colin: ¿ha visto cambios en las vías de respuesta al estrés celular en los animales Lmna / Sun?
Respuesta Todavía no hemos medido ningún gen / marcador de respuesta al estrés en estos ratones

Pregunta: De Delphine Larrieu: ¿Consideraría apuntar solo al corazón con el DNSUN1 en pacientes con HGPS?
Respuesta Eso es posible dado el serotipo y el uso de un promotor específico de cardiomiocitos. Estos experimentos están actualmente en curso.

Pregunta:De Yuexia Wang: ¿Por qué KO SUN1 tiene menos beneficios en ratones homocigotos G609G?
Respuesta Probablemente porque los ratones homocigotos expresan más progerina. Vemos un efecto de respuesta de heterocigotos frente a homocigotos en nuestros experimentos genéticos

Pregunta:De Roland Foisner: Hola Colin, buena charla. ¿Cuál es el efecto negativo de SUN1 regulado al alza en HGPS? Roland
Respuesta Probablemente una mayor asociación de la red MT con el complejo LINC. El aumento de la expresión de Sun / Nesprin en cultivos de células afecta el posicionamiento nuclear y la migración celular

Un honor conocer a la familia Basso y Peraut. Gracias por compartir su viaje. ¡Eres verdaderamente una inspiración!

¡Gracias a la familia de Sami y Alexandra por ser parte del taller y compartir su viaje inspirador con la progeria!

Eiger progreso fantástico con aprobación en el horizonte.

¿Podemos extender esta sesión hasta el final de la semana y continuar la discusión? (¡Gracias a todos!) 

Este taller fue increíble. Felicito a la PRF por tener el compromiso de realizar esta gran actividad. Sin duda, este taller me llenó de mucho conocimiento para mi futuro. Fue increíble. ¡Juntos encontraremos la cura!

Siempre impresionado por la ciencia apasionante en las reuniones de PRF. ¡Muchas felicitaciones a los organizadores por preservar la experiencia del taller comunitario incluso en este formato virtual!

Todos ustedes ROCA !!! Gracias por esta gran oportunidad, pensando en hace muchos años, ¡ahora es como vivir en el futuro! Feliz de ser parte de ella

Extraño la guitarra del Dr. Collin. ¡Gran trabajo!

¡Muchas gracias por organizar esto, verdaderamente lo más destacado de mi semana!

Gracias a todos y nos vemos el año que viene en Cambridge.

 ¡Gracias a todos por acompañarnos!