Risposta: Gli studi PK / PD hanno indicato una biodisponibilità del 100% nel cuore, nell'aorta e nei reni. Il rene era l'unico tessuto in cui c'era un suggerimento di accumulo, sulla base dell'esame istologico e dei dati PK / PD. La somministrazione di una singola dose di SRP-2001 ha dimostrato che la PPMO è stata rapidamente eliminata dal cuore (entro 2 ore), eliminata dall'aorta entro 4 ore, ma mantenuta nei reni fino al tempo di 48 ore. Il ddPCR quantitativo ha dimostrato l'attività di inibizione dello splicing criptico di G608G in tutti i tessuti eccetto la pelle testata finora (aorta, cuore, reni, fegato, quadricipiti, ossa), sebbene l'attività varia a seconda del tessuto.

Francis, Mike e Wayne

Risposta:Per quanto riguarda la domanda, ad essere sincero, non conosco la risposta a questa domanda. In un adulto tipico, tuttavia, non correliamo il grado di calcificazione valvolare con l'assunzione di Mg / Ca, la calcificazione più pesante è probabilmente dovuta ad altri fattori.

Dott. Pinak Shah

Risposta: Sono d'accordo con l'opinione del dottor Shah. Probabilmente le cause della calcificazione valvolare nell'HGPS sono diverse da quella che vediamo nei pazienti anziani. Inoltre non ho alcuna conoscenza del metabolismo di Ca e Mg.

Dott. Francesco Musumeci

Risposta: Il lamin A / C null (Lmna^{- / -}) il modello murino sviluppa DCM accompagnato da perdita della funzione cardiaca. Inoltre, questi topi mostrano difetti nella conduzione cardiaca e fibrosi cardiaca estesa e morte prematura a 5-8 settimane di età (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Tuttavia, i modelli murini privi solo di Lamin A (Fong et al., 2006) o lamin C (Coffinier et al., 2010) non mostrano difetti cardiaci e hanno una durata di vita normale.

Riferimenti:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT e Marian, AJ (2018). La soppressione dei fattori di trascrizione FOXO attivati ​​nel cuore prolunga la sopravvivenza in un modello murino di laminopatie. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG e Young, SG (2010). La sintesi diretta della lamina A, bypassando l'elaborazione della prelamina a, causa nuclei deformi nei fibroblasti ma nessuna patologia rilevabile nei topi. Journal of Biological Chemistry, 285(27), 20818-20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang , SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO e Young, SG (2006). La prelamina A e la lamina A sembrano essere dispensabili nella lamina nucleare. Il Journal of Clinical Investigation, 116(3), 743-752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS e Kennedy, BK (2012). L'espressione specifica per i cardiomiociti della lamina A migliora la funzione cardiaca nei topi Lmna - / -. PLoS ONE, 7(8), 1-9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). La perdita dell'espressione della lamina di tipo A compromette l'integrità dell'involucro nucleare portando alla distrofia muscolare. Il diario di biologia cellulare, 147(5), 913-920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Domanda: Da Tom Misteli: quanto è durato il trattamento con lonafarnib + tozilizumab negli animali?
Risposta: Abbiamo eseguito un esperimento preliminare su animali eterozigoti a partire dalla settimana 22 fino alla settimana 30. Vorremmo concentrarci su questo lasso di tempo per valutare l'effetto sull'aumento di peso precedentemente osservato con tocilizumab.

Domanda: Da Sgonzalo: Bella storia Giovanna e Sammy !!! Hai visto effetti collaterali del trattamento con tocilizumab? O qualche fenotipo che non è stato migliorato nei topi progeria? Alla Dott.ssa Giovanna Lattanzi: Domanda: Da tom misteli: quanto è durato il trattamento con lonafarnib + tozilizumab negli animali?
Risposta: Grazie Susana. No, non abbiamo riscontrato alcun effetto collaterale di tocilizumab. Tra i fenotipi esaminati (cifosi, distrofia del tessuto adiposo, difetti dei capelli e della pelle, attività locomotoria, lesioni dell'aorta e ipertrofia miocardica) sono stati ritardati / migliorati.

Commento: Da MARIE GERHARD-HERMAN: utilizzato anche negli Stati Uniti per malattie reumatologiche e vasculiti
Risposta: Grazie Marie per queste informazioni interessanti sull'uso della vasculite.

Commento: Da pc stefano: Tocilizumab è approvato anche in Giappone per il trattamento della malattia di Castleman senza effetti immunosoppressivi
Risposta: Grazie Stefano per queste informazioni.

Domanda: Da Delphine Larrieu: vede una diminuzione del danno al DNA durante il trattamento con progerina nelle cellule HGPS / modelli murini HGPS?
Risposta: Abbiamo osservato che i geni correlati alla riparazione del DNA (BRCA1, Rad51, ecc.) Erano alterati dopo il trattamento con progerinina.

Domanda: Da Delphine Larrieu: Come funziona la progerina a Werner
Sindrome che - per quanto ne so - non esprime progerina? La molecola ha altri bersagli?
Risposta: Le cellule WS possono anche produrre una piccola quantità di progerina come un normale invecchiamento
cellule. Abbiamo osservato l'espressione della progerina nelle cellule WS a livelli di mRNA.
Pensiamo che la proteina WRN possa funzionare per inibire la progerina. Tuttavia, in
caso di pazienti con WS, poiché non c'è proteina WRN, l'espressione della progerina è
si pensa che si verifichi negli anni '20 e '30, tanto quanto si osserva in età normale
persone.

Domanda: Da Bob Bishop: il sito di legame della progerinina è definito biochimicamente o
strutturalmente? Esiste un test biochimico per trovare composti aggiuntivi
con questo meccanismo?
Risposta: Abbiamo eseguito il saggio di pull-down delle sfere di biotina-avidina e osservato il
interazione specifica della perogerina con progerina ma non con la lamina A, lamina
B, p53 o emerin.
Abbiamo anche eseguito il test Elisa per trovare ulteriori composti che potrebbero
essere putativi inibitori leganti progerina / lamina A La proteina ricombinante della progerina è stata incubata sequenzialmente con una libreria chimica e la lamina A.
Tuttavia, la progerina era la sostanza chimica più efficace nella sostanza chimica
biblioteca.

Domanda: Da John Cooke: Grandi progressi Dr. Kim. Progerinin riduce il
secrezione di citochine SASP?
Risposta: Abbiamo osservato che la progerina potrebbe ridurre l'espressione di IL6 e IL8 in
Cellule HGPS.

Domanda: Di Susan Michaelis: la progerina è disponibile per i ricercatori?
Risposta: Ovviamente è disponibile su richiesta.

Domanda: Da Thomas W Glover: Potrei averlo perso, ma cosa pensi sia il file
meccanismo responsabile degli effetti benefici nella sindrome di Werner?
Risposta: Le cellule derivate dai pazienti WS producono anche una piccola quantità di progerina, come
tanto quanto le cellule normali derivate da persone anziane. La progerinina può essere anche
efficace nelle cellule WS riducendo l'espressione della progerina.

Risposta: Grazie per la domanda: no, non l'infiammazione di per sé. Parzialmente correlato all'infiammazione, abbiamo studiato i macrofagi in questo progetto e abbiamo scoperto che knockout di Icmt aumenta l'efflusso di colesterolo nei macrofagi, sia basale che stimolato da ApoAI e HDL. Poiché questo effetto è talvolta associato ad un aumento del trasporto inverso del colesterolo in vivo, vorremmo determinare se Icmt l'inibizione ridurrebbe lo sviluppo dell'aterosclerosi.

Domanda: Da vandres: hai provato la correzione del DNA in fibroblasti HGPS umani di età diverse (in vitro) e hai testato la normalizzazione del loro fenotipo per vedere se diminuisce con l'invecchiamento delle cellule?
Risposta: No, non abbiamo provato la correzione nei fibroblasti di pazienti di diverse età, solo di due pazienti diversi, che hanno prodotto risultati simili.

Domanda: Da Delphine Larrieu: effetti sorprendenti! Ti aspetteresti un KO completo della progerina nei topi eterozigoti?
Risposta: Nel mouse a copia singola, non mi aspetto necessariamente un'efficienza di modifica molto diversa da quella che osserviamo attualmente, poiché dovrebbe già esserci un eccesso di agente di modifica per ogni progerina.

Domanda: Da Andre Monteiro Da Rocha: Pensi che la riprogrammazione di una bassa percentuale di cellule possa riparare la funzione delle cellule staminali, ma potrebbe portare all'esaurimento delle cellule staminali adulte?
Risposta: Non disponiamo di dati che possano fornire una risposta a questa domanda.

Domanda: Da Mei: sembra cardiomiocita, bellissima colorazione!
Da Abby Buchwalter: L'espressione dominante negativa di Sun1 interrompe tutti i complessi LINC, compresi quelli mediati da Sun2?
Risposta: Sì, ci sono prove di questo in vitro in quanto tutte le Nesprine in NE possono essere sostituite da DNSUN1

Domanda: Da Suet Nee Chen: come e qual è il meccanismo che l'AAV9-SunDn è in grado di avere a lungo termine? a che età hai iniettato l'AAV9-Sun1DN ai topi mutanti LMNA?
Risposta: Abbiamo iniettato l'AAV DNSUN1 un giorno dopo aver indotto la ricombinasi Cre a eliminare la laminA. Abbiamo dati che il DNSUN1 fornito da AAV continua ad essere espresso nei cardiomiociti un anno dopo l'iniezione. Stiamo effettuando esperimenti di dose / tempistica / risposta ora che siamo tornati in laboratorio e possiamo produrre il nostro AAV a quantità sufficienti

Domanda: Da Martin Bergö, Viceordförande Kommittén för forskning: Quale pensi sia il contributo relativo dell'assenza della lamina A rispetto alla lamina C nei tuoi esperimenti ad eliminazione diretta Lmna?
Risposta: Non ne sono sicuro ma Sun1 interagisce con LaminA e nei topi HGPS il contributo deve essere tutto LaminA (da cui deriva la progerina)

Domanda: Da jcampisi: qual è la causa della morte in SUN1 KO o hets?
Risposta: Bella domanda che ancora non sappiamo, ma attualmente sospettiamo che qualche gruppo muscolare scheletrico abbia bisogno di un'analisi istopatologica decente dei topi morenti

Domanda: Da Tom Misteli: Colin: hai visto cambiamenti nei percorsi di risposta allo stress cellulare negli animali Lmna / Sun?
Risposta: Non abbiamo ancora misurato alcun gene / marcatore di risposta allo stress in questi topi

Domanda: Da Delphine Larrieu: penseresti di prendere di mira solo il cuore con DNSUN1 nei pazienti con HGPS?
Risposta: Ciò è possibile dato il sierotipo e l'uso di un promotore specifico per i cardiomiociti. Questi esperimenti sono attualmente in corso

Domanda:Da Yuexia Wang: Perché KO SUN1 ha meno benefici sui topi omozigoti G609G?
Risposta: Presumibilmente perché i topi omozigoti esprimono più progerina. Nei nostri esperimenti genetici vediamo un effetto di risposta degli eterozigoti contro gli omozigoti

Domanda:Da Roland Foisner: Ciao Colin, bella chiacchierata. Qual è l'effetto negativo di SUN1 sovraregolato in HGPS. Roland
Risposta: Probabilmente maggiore associazione della rete MT con il complesso LINC. L'aumentata espressione di Sun / Nesprin nelle colture cellulari influisce sul posizionamento nucleare e sulla migrazione cellulare

Un onore incontrare la famiglia Basso e Peraut. Grazie per aver condiviso il tuo viaggio. Sei veramente un'ispirazione!

Grazie alla famiglia di Sami e Alexandra per aver preso parte al workshop e aver condiviso il tuo viaggio stimolante con la progeria!

Fantastico progresso Eiger con consensi all'orizzonte.

Possiamo prolungare questa sessione fino alla fine della settimana e continuare la discussione? (GRAZIE, a tutti!) 

Questo seminario è stato incredibile. Mi congratulo con la PRF per l'impegno a svolgere questa grande attività. Senza dubbio, questo seminario mi ha riempito di molte conoscenze per il mio futuro. È stato stupefacente. Insieme troveremo la cura!

Sempre impressionato dall'entusiasmante scienza agli incontri della PRF. Tanti complimenti agli organizzatori per aver preservato l'esperienza del workshop comunitario anche in questo formato virtuale!

Siete tutti ROCK !!! Grazie per questa grande opportunità, pensando a tanti anni fa, ora è come vivere nel futuro! Felice di farne parte

Mi manca la chitarra del dottor Collin. Ottimo lavoro!

Grazie mille per aver organizzato questo, davvero il momento clou della mia settimana!

Grazie a tutti e ci vediamo di persona l'anno prossimo a Cambridge !!

 Grazie a tutti per averci seguito!