Responda: Os estudos PK / PD indicaram 100% de biodisponibilidade no coração, aorta e rins. O rim foi o único tecido onde houve uma sugestão de acúmulo, com base no exame histológico e dados de PK / PD. A administração de uma dose única de SRP-2001 demonstrou que o PPMO foi eliminado rapidamente do coração (em 2 horas), eliminado da aorta em 4 horas, mas mantido no rim até o ponto de tempo de 48 horas. O ddPCR quantitativo demonstrou atividade de inibição de splice críptico G608G em todos os tecidos, exceto a pele testada até agora (aorta, coração, rim, fígado, quadríceps, osso), embora a atividade varie dependendo do tecido.

Francis, Mike e Wayne

Responda:Em relação à pergunta, para ser sincero, não sei a resposta para essa pergunta. Em um adulto típico, entretanto, não correlacionamos o grau de calcificação valvar com a ingestão de Mg / Ca, a calcificação mais pesada provavelmente se deve a outros fatores.

Dr.

Responda: Eu concordo com a opinião do Dr. Shah. Provavelmente, as causas da calcificação da válvula no HGPS são diferentes da que vemos em pacientes idosos. Também não tenho conhecimento sobre o metabolismo de Ca e Mg.

Dr. Francesco Musumeci

Responda: A lamina A / C nula (Lmna^{- / -}) modelo de camundongo desenvolve DCM acompanhado de perda da função cardíaca. Além disso, esses ratos exibem defeitos na condução cardíaca e fibrose cardíaca extensa e morte prematura em 5-8 semanas de idade (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). No entanto, modelos de camundongos sem apenas Lamina A (Fong et al., 2006) ou lamina C (Coffinier et al., 2010) não apresentam defeitos cardíacos e têm uma vida útil normal.

Referências:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT, & Marian, AJ (2018). A supressão dos fatores de transcrição FOXO ativados no coração prolonga a sobrevivência em um modelo de laminopatias em camundongo. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). A síntese direta da lâmina A, ignorando o processamento da pré-lâmina a, causa núcleos deformados em fibroblastos, mas nenhuma patologia detectável em camundongos. Revista de Química Biológica, 285(27), 20818-20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang , SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). A Prelamina A e a lâmina A parecem ser dispensáveis ​​na lâmina nuclear. O Jornal de Investigação Clínica, 116(3), 743-752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). A expressão específica dos cardiomiócitos da lâmina A melhora a função cardíaca em camundongos Lmna - / -. PLoS ONE, 7(8), 1-9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). A perda da expressão da lamina do tipo A compromete a integridade do envelope nuclear levando à distrofia muscular. O Jornal de Biologia Celular, 147(5), 913-920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Questão: De Tom Misteli: quanto tempo durou o tratamento com lonafarnibe + tozilizumabe em animais?
Responda: Realizamos um experimento preliminar em animais heterozigotos a partir da semana 22 até a semana 30. Queremos nos concentrar neste período de tempo para avaliar o efeito no ganho de peso que foi observado anteriormente com tocilizumab.

Questão: De Sgonzalo: Bela história Giovanna e Sammy !!! Você viu algum efeito colateral do tratamento com tocilizumabe? Ou algum fenótipo que não foi melhorado em camundongos com progéria? À Dra. Giovanna Lattanzi: Pergunta: De tom misteli: quanto tempo durou o tratamento com lonafarnibe + tozilizumabe em animais?
Responda: Obrigada Susana. Não, não observamos nenhum efeito colateral do tocilizumabe. Entre os fenótipos examinados (cifose, distrofia do tecido adiposo, defeitos capilares e cutâneos, atividade locomotora, lesões aórticas e hipertrofia miocárdica) foram retardados / melhorados.

Comente: De MARIE GERHARD-HERMAN: Também usado nos EUA para doenças reumatologistas e vasculite
Resposta: Obrigado Marie por esta informação interessante sobre o uso de vasculite.

Comente: Do pc stefano: Tocilizumab também é aprovado no Japão para o tratamento da doença de Castleman sem efeitos imunossoppressores
Resposta: Obrigado Stefano por essas informações.

Questão: Delphine Larrieu: você vê alguma redução no dano ao DNA com o tratamento com progerinina em células HGPS / modelos de camundongos HGPS?
Responda: Observamos que genes relacionados ao reparo de DNA (BRCA1, Rad51, etc) foram alterados após o tratamento com progerinina.

Questão: De Delphine Larrieu: Como funciona a progerinina em Werner
Síndrome que - tanto quanto eu sei - não expressa progerina? A molécula tem outros alvos?
Responda: As células WS também podem produzir uma pequena quantidade de progerina como uma idade normal
células. Observamos a expressão de progerina em células WS em níveis de mRNA.
Achamos que a proteína WRN pode funcionar para inibir a progerina. No entanto, no
caso de pacientes com WS, uma vez que não há proteína WRN, a expressão de progerina é
pensado para ocorrer entre 20 e 30 anos, tanto quanto é visto em pessoas normalmente idosas
pessoas.

Questão: De Bob Bishop: O sítio de ligação da progerinina é definido bioquimicamente ou
estruturalmente? Existe um ensaio bioquímico para encontrar compostos adicionais
com este mecanismo?
Responda: Realizamos o ensaio de redução do grânulo de biotina-avidina e observamos o
interação específica de perogerinina com progerina, mas não com lamina A, lamina
B, p53 ou emerin.
Também realizamos o ensaio Elisa para encontrar compostos adicionais que poderiam
ser inibidores putativos de ligação de progerina / lamina A. A proteína recombinante de progerina foi incubada sequencialmente com uma biblioteca química e lamina A.
No entanto, a progerinina foi o produto químico mais eficaz na química
biblioteca.

Questão: De John Cooke: Grande progresso, Dr. Kim. A Progerinina reduz o
secreção de citocinas SASP?
Responda: Observamos que a progerinina pode reduzir a expressão de IL6 e IL8 em
Células HGPS.

Questão: De Susan Michaelis: a progerinina está disponível para pesquisadores?
Responda: Claro, está disponível se você solicitar.

Questão: De Thomas W Glover: Posso ter perdido, mas o que você acha que é o
mecanismo responsável pelos efeitos benéficos na síndrome de Werner?
Responda: As células derivadas de pacientes com WS também produzem uma pequena quantidade de progerina, como
tanto quanto células normais derivadas de pessoas idosas. A progerinina também pode ser
eficaz em células WS, reduzindo a expressão de progerina.

Responda: Obrigado pela pergunta: Não, não é a inflamação em si. Parcialmente relacionado à inflamação, estudamos macrófagos neste projeto e descobrimos que o nocaute de ICMT em aumenta o efluxo de colesterol dos macrófagos, tanto basal quanto estimulado por ApoAI e HDL. Como esse efeito às vezes está associado ao aumento do transporte reverso de colesterol in vivo, gostaríamos de determinar se ICMT a inibição reduziria o desenvolvimento da aterosclerose.

Questão: De Vandres: você já experimentou a correção de DNA em fibroblastos HGPS humanos de diferentes idades (in vitro) e testou a normalização do fenótipo para ver se diminui com o envelhecimento das células?
Responda: Não, não tentamos correção em fibroblastos de pacientes de várias idades diferentes - apenas de dois pacientes diferentes, que produziram resultados semelhantes.

Questão: De Delphine Larrieu: Efeitos incríveis! Você esperaria uma progerina KO completa em camundongos heterozigotos?
Responda: No mouse de cópia única, eu não esperaria necessariamente eficiências de edição muito diferentes das que observamos atualmente, uma vez que já deve haver um excesso de agente de edição para cada progerin.

Questão: De Andre Monteiro Da Rocha: Você acha que a reprogramação de uma baixa porcentagem de células pode reparar a função das células-tronco, mas pode levar à exaustão das células-tronco adultas?
Responda: Não temos quaisquer dados que possam fornecer uma resposta a esta pergunta.

Questão: De Mei: Parece cardiomiócito, bela coloração!
De Abby Buchwalter: A expressão dominante negativa Sun1 interrompe todos os complexos LINC, incluindo aqueles mediados por Sun2?
Responda: Sim, há evidências para isso in vitro em que todos os Nesprins no NE podem ser substituídos por DNSUN1

Questão: De Suet Nee Chen: como e qual é o mecanismo que o AAV9-SunDn é capaz de ter efeitos a longo prazo? com que idade você injetou o AAV9-Sun1DN nos camundongos mutantes LMNA?
Responda: Injetamos o DNSUN1 AAV um dia após induzir a Cre recombinase para deletar laminaA. Temos dados de que o DNSUN1 fornecido pelo AAV continua a ser expresso nos cardiomiócitos um ano após a injeção. Estamos fazendo experimentos de dose / tempo / resposta agora que estamos de volta ao laboratório e podemos fazer nosso próprio AAV em quantidades suficientes

Questão: De Martin Bergö, Viceordförande Kommittén för forskning: Qual você acha que é a contribuição relativa da lâmina A ausente em relação à lâmina C em seus experimentos de nocaute do Lmna?
Responda: Não tenho certeza sobre isso, mas Sun1 interage com LaminaA e nos camundongos HGPS a contribuição deve ser toda Lamina (da qual a progerina é derivada)

Questão: De jcampisi: Qual é a causa da morte em SUN1 KO ou hets?
Responda: Boa pergunta que ainda não sabemos, mas atualmente suspeitamos de algum grupo de músculo esquelético. Precisamos de uma análise histo-patológica decente dos ratos moribundos

Questão: De Tom Misteli: Colin: você viu mudanças nas vias de resposta ao estresse celular nos animais Lmna / Sun?
Responda: Ainda não medimos quaisquer genes / marcadores de resposta ao estresse nesses camundongos

Pergunta: De Delphine Larrieu: Você consideraria almejar apenas o coração com o DNSUN1 em pacientes com HGPS?
Responda: Isso é possível devido ao sorotipo e ao uso de um promotor específico dos cardiomiócitos. Esses experimentos estão em andamento

Questão:De Yuexia Wang: Por que KO SUN1 tem menos benefícios em camundongos G609G homozigotos?
Responda: Presumivelmente porque os camundongos homozigotos estão expressando mais Progerin. Vemos um efeito de resposta de heterozigotos versus homozigotos em nossos experimentos genéticos

Questão:De Roland Foisner: Oi Colin, boa conversa. Qual é o efeito negativo do SUN1 regulado positivamente no HGPS. Roland
Responda: Provavelmente aumentou a associação da rede MT com o complexo LINC. A expressão aumentada de Sol / Nesprina em células de cultura afeta o posicionamento nuclear e a migração celular

Uma honra conhecer a família Basso e Peraut. Obrigado por compartilhar sua jornada. Você é verdadeiramente e inspiração!

Obrigado à família de Sami e Alexandra por fazer parte do workshop e por compartilhar sua jornada inspiradora com a progeria!

Progresso fantástico do Eiger com aprovação no horizonte.

Podemos estender esta sessão até o final da semana e continuar com a discussão? (OBRIGADO, todos!) 

Este workshop foi incrível. Parabenizo a PRF pelo compromisso de realizar esta grande atividade. Sem dúvida, esse workshop me trouxe muito conhecimento para o meu futuro. Foi fantástico. Juntos encontraremos a cura!

Sempre impressionado com a ciência empolgante nas reuniões da PRF. Muitos parabéns aos organizadores por preservarem a experiência da oficina da comunidade, mesmo neste formato virtual!

Vocês todos ROCK !!! Obrigado por esta grande oportunidade, pensando há muitos anos, agora é como viver no futuro! Feliz por fazer parte disso

Sinto falta da guitarra do Dr. Collin. Bom trabalho!

Muito obrigado por organizar isso, realmente o ponto alto da minha semana!

Obrigado a todos e nos vemos pessoalmente no próximo ano em Cambridge !!

 Obrigado a todos por se juntarem a nós!