Відповідь: Дослідження ФК / ФД показали 100% біодоступність серця, аорти та нирок. Нирки були єдиною тканиною, де існувало припущення про накопичення, на основі гістологічного дослідження та даних ФК / ФД. Введення одноразової дози SRP-2001 продемонструвало, що PPMO швидко очищається від серця (протягом 2 годин), очищається від аорти протягом 4 годин, але підтримується в нирках до 48 годинного часу. Кількісний ddPCR продемонстрував активність інгібування криптичного зрощування G608G у всіх тканинах, крім випробуваних дотепер шкіри (аорта, серце, нирки, печінка, квадрицепси, кістки), хоча активність варіювала залежно від тканини.

Френсіс, Майк та Уейн

Відповідь:Щодо питання, чесно кажучи, я не знаю відповіді на це питання. Однак у типової дорослої людини ми не співвідносимо ступінь кальцифікації клапана із споживанням Mg / Ca, більш сильна кальцифікація, ймовірно, зумовлена ​​іншими факторами.

Доктор Пінак Шах

Відповідь: Я згоден з думкою доктора Шаха. Ймовірно, причини кальцифікації клапана при HGPS відрізняються від тих, які ми спостерігаємо у пацієнтів літнього віку. Я також не знаю про метаболізм Са та Mg.

Доктор Франческо Мусумечі

Відповідь: Нульовий ламінований кондиціонер (Lmna^{- / -}) модель миші розвиває DCM, що супроводжується втратою серцевої функції. Більше того, у цих мишей спостерігаються дефекти серцевої провідності та великий фіброз серця, а також передчасна смерть у віці 5-8 тижнів (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Однак у моделей мишей, у яких бракує лише ламіну A (Fong et al., 2006) або ламіна C (Coffinier et al., 2010), не виявлено серцевих вад і нормальна тривалість життя.

Список використаної літератури:
Огюст, Г., Гурга, П., Ломбарді, Р., Коарфа, К., Віллерсон, Дж. Т., і Маріан, AJ (2018). Придушення активованих факторів транскрипції FOXO у серці продовжує виживання у мишачої моделі ламінопатій. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). Прямий синтез ламіна А, минаючи обробку преламіну, спричиняє деформацію ядер у фібробластах, але відсутність виявленої патології у мишей. Журнал біологічної хімії, 285(27), 20818-20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang , SY, Young, SR, Ян, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). Преламін А і ламін А, як видається, не потрібні в ядерній пластині. Журнал клінічного дослідження, 116(3), 743-752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). Специфічна для кардіоміоцитів експресія ламіна А покращує серцеву функцію у мишей Lmna - / -. PLoS ONE, 7(8), 1-9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Салліван, Т. (1999). Втрата експресії ламіна типу А порушує цілісність ядерної оболонки, що веде до м’язової дистрофії. Журнал клітинної біології, 147(5), 913-920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Питання: Від Тома Містелі: скільки часу тривало лікування лонафарнібом + тозілізумабом у тварин?
Відповідь: Ми провели попередній експеримент на гетерозиготних тваринах, починаючи з 22-го по 30-й тиждень. Ми хочемо зосередитись на цьому часовому періоді, щоб оцінити вплив на збільшення ваги, який раніше спостерігався з тоцилізумабом.

Питання: Від Сгонзало: Прекрасна історія Джованна та Семмі !!! Ви бачили якісь побічні ефекти лікування тоцилізумабом? Або будь-які фенотипи, які не були покращені у мишей прогерії? Доктору Джованні Латтанці: Питання: Від Тома Містелі: скільки часу тривало лікування лонафарнібом + тозілізумабом у тварин?
Відповідь: Дякую Сусана. Ні, ми не побачили жодного побічного ефекту тоцилізумабу. Серед досліджуваних фенотипів (кіфоз, дистрофія жирової тканини, дефекти волосся та шкіри, рухова активність, ураження аорти та гіпертрофія міокарда) були відстроченими / покращеними.

Коментар: Від MARIE GERHARD-HERMAN: Також використовується в США при хворобах ревматолога та васкуліті
Відповісти: Дякую Марі за цю цікаву інформацію про використання при васкуліті.

Коментар: З ПК Стефано: Тоцилізумаб також схвалений в Японії для лікування хвороби Каслмана без імуносупресивних ефектів
Відповісти: Дякую Стефано за ці відомості.

Питання: Від Дельфіни Ларріє: чи бачите ви зменшення пошкодження ДНК при лікуванні прогериніном у клітинах HGPS / мишах HGPS?
Відповідь: Ми спостерігали, що гени, пов'язані з відновленням ДНК (BRCA1, Rad51 та ін.), Були змінені після лікування прогериніном.

Питання: Від Дельфіни Ларріє: Як діє прогеринін у Вернера
Синдром, який - наскільки мені відомо - не експресує прогерин? Чи має молекула якісь інші мішені?
Відповідь: Клітини WS також можуть виробляти невелику кількість прогерину, як у звичайному віці
клітин. Ми спостерігали експресію прогерину в клітинах WS на рівні мРНК.
Ми вважаємо, що білок WRN може функціонувати як інгібітор прогерину. Однак у
У випадку пацієнтів із ЖС, оскільки білка WRN немає, експресія прогерину є
вважається, що це відбудеться в 20-30-х роках, стільки, скільки це спостерігається у нормально вікових
чоловік.

Питання: Від Боба Бішопа: Чи визначено місце зв'язування прогериніну біохімічно або
структурно? Чи існує біохімічний аналіз для пошуку додаткових сполук
з цим механізмом?
Відповідь: Ми провели аналіз біттин-авідинового бісеру і спостерігали
специфічна взаємодія перогериніну з прогерином, але не з ламіном А, ламіном
B, p53 або emerin.
Ми також провели аналіз Elisa, щоб знайти додаткові сполуки, які могли б
бути передбачуваними інгібіторами зв’язування прогерину / ламіну А. Прогериновий рекомбінантний білок інкубували послідовно з хімічною бібліотекою та ламіном А.
Однак прогеринін був найефективнішою хімічною речовиною в цій хімічній речовині
бібліотека

Питання: Від Джона Кука: Великий прогрес, доктор Кім. Чи зменшує прогеринін
секреція цитокінів SASP?
Відповідь: Ми спостерігали, що прогеринін може зменшити експресію IL6 та IL8 у
Клітини HGPS.

Питання: Від Сьюзен Майкеліс: чи доступний прогеринін дослідникам?
Відповідь: Звичайно, він доступний, якщо Ви запитуєте.

Питання: Від Томаса В. Гловера: Можливо, я це пропустив, але що, на вашу думку, є
механізм, відповідальний за сприятливий вплив при синдромі Вернера?
Відповідь: Виведені пацієнтами клітини WS також виробляють невелику кількість прогерину, як
як і нормальні клітини, отримані від людей похилого віку. Прогеринін також може бути
ефективний у клітинах WS за рахунок зменшення експресії прогерину.

Відповідь: Дякую за питання: Ні, не запалення як таке. Частково пов'язане із запаленням, ми вивчали макрофаги в цьому проекті і виявили, що нокаут Icmt збільшує відтік холестерину в макрофагах, як базальний, так і стимульований ApoAI- та HDL. Оскільки цей ефект іноді пов'язаний із збільшенням зворотного транспорту холестерину in vivo, ми хотіли б визначити, чи Icmt гальмування зменшило б розвиток атеросклерозу.

Питання: Від Вандреса: ви пробували корекцію ДНК у фібробластах HGPS людини різного віку (in vitro) та перевіряли нормалізацію їх фенотипу, щоб побачити, чи зменшується він із віком клітин?
Відповідь: Ні, ми не пробували корекції фібробластів у пацієнтів різного віку - лише у двох різних пацієнтів, що дало подібні результати.

Питання: Від Дельфіни Ларріє: Дивовижні ефекти! Чи очікуєте ви повного прогерину KO у гетерозиготних мишей?
Відповідь: В одній копії миші я б не обов'язково очікував значно більшої ефективності редагування, ніж те, що ми спостерігаємо в даний час, оскільки вже має бути надлишок редагуючого агента для кожного прогеріну.

Питання: Від Андре Монтейро Да Роша: Чи вважаєте Ви, що перепрограмування низького відсотка клітин може відновити роботу стовбурових клітин, але може призвести до виснаження дорослих стовбурових клітин?
Відповідь: У нас немає даних, які могли б дати відповідь на це запитання.

Питання: Від Мей: Схоже на кардіоміоцити, гарне фарбування!
Від Еббі Бухвальтер: Чи домінуюча негативна експресія Sun1 порушує всі комплекси LINC, включаючи ті, що опосередковані Sun2?
Відповідь: Так, існують докази цього in vitro, згідно з якими всі неспріни в СВ можуть бути витіснені DNSUN1

Питання: Від Сует Ні Чен: як і який механізм AAV9-SunDn здатний мати довгострокові ефекти? у якому віці ви вводили AAV9-Sun1DN мишам-мутантам LMNA?
Відповідь: Ми вводили DNSUN1 AAV через добу після індукції Cre-рекомбінази для видалення laminA. Ми маємо дані про те, що DNSUN1, поставлений AAV, продовжує експресуватися в кардіоміоцитах через рік після ін’єкції. Зараз ми проводимо експерименти з дозою / синхронізацією / реагуванням, коли ми повернулися в лабораторію і можемо зробити власний AAV за достатньої кількості.

Питання: Від Мартіна Бергьо, заступника комітету з питань розвитку: як ви вважаєте, яким є відносний внесок відсутнього ламіна А проти ламіна С у ваших експериментах на вибування Лмна?
Відповідь: Я не впевнений у цьому, але Sun1 взаємодіє з LaminA, і у мишей HGPS внесок повинен бути весь LaminA (з якого походить прогерин)

Питання: З jcampisi: Що є причиною смерті в SUN1 KO або hets?
Відповідь: Хороше питання, якого ми досі не знаємо, але наразі підозрюємо певну групу скелетних м’язів. Нам потрібен гідний аналіз гістопатології вмираючих мишей

Питання: Від Тома Містелі: Колін: Ви бачили зміни в клітинних шляхах реакції на стрес у тварин Lmna / Sun?
Відповідь: Ми ще не виміряли жодних генів / маркерів реакції на стрес у цих мишей

Запитання: Від Дельфіни Ларріє: Чи могли б ви передбачити націлювання на серце лише за допомогою DNSUN1 у пацієнтів з HGPS?
Відповідь: Це можливо, враховуючи серотип і використання кардіоміоцитарного промотору. Наразі ці експерименти тривають

Питання:Від Юексії Ван: Чому KO SUN1 має менші переваги для гомозиготних мишей G609G?
Відповідь: Імовірно тому, що миші-гомозиги експресують більше прогерину. У наших генетичних експериментах ми бачимо ефект реакції гетерозигот на гомозигот

Питання:Від Роланда Фойснера: Привіт Колін, приємна розмова. Який негативний вплив регульованого SUN1 в HGPS. Роланд
Відповідь: Можливо, посилена асоціація мережі МТ із комплексом LINC. Підвищена експресія Сонця / Неспріна в клітинах культур впливає на позиціонування ядер та міграцію клітин

Честь познайомитися з родиною Бассо та Перо. Дякуємо, що поділилися своєю подорожжю. Ви справді та натхнення!

Дякуємо родині Самі та Олександри за те, що ви були частиною семінару та поділились своєю натхненною подорожжю з прогерією!

Фантастичний прогрес Айгер із схваленням на горизонті.

Чи можемо ми продовжити цю сесію до кінця тижня та продовжити обговорення? (ДЯКУЮ, всі і всі!) 

Цей семінар був неймовірним. Я вітаю PRF за те, що він зобов'язався зробити цю велику діяльність. Без сумніву, ця майстерня наповнила мене багатьма знаннями про моє майбутнє. Це було чудово. Разом ми знайдемо ліки!

Завжди вражала захоплююча наука на засіданнях PRF. Багато похвал організаторам за збереження досвіду спільноти семінару навіть у цьому віртуальному форматі!

Ви всі РОК !!! Дякую за цю чудову можливість, замислюючись про багато років тому, тепер це схоже на життя в майбутньому! Щасливий бути частиною цього

Я сумую за гітарою доктора Колліна. Чудова робота!

Щиро дякую вам за організацію цього, справді головного моменту мого тижня!

Дякуємо всім і побачимось особисто наступного року в Кембриджі !!

 Дякуємо всім, що приєдналися до нас!