从冷冻细胞的装运

冷冻的细胞将以1 ml等分试样放在干冰上。 保持细胞冷冻直至融化以进行细胞培养，如果不立即开始培养，则将其置于液氮储存中。 但是，建议您如果要储存细胞以备后用，请长大新鲜的储存液并冷冻多个安瓿瓶。 将细胞冷冻保存在45％RPMI-1640，50％胎牛血清和5％DMSO（组织培养级）中。

1. 将10毫升RPMI-1640，15％胎牛血清（FCS），±抗生素放入T-25烧瓶中。
2. 在37％C 5空气中的2°C加湿培养箱中，使培养基平衡30分钟。
3. 在37°C水浴或温水烧杯中解冻每个安瓿瓶中的冷冻细胞，一次一次。
4. 用无菌异丙醇制备垫快速清洁安瓿的外部，然后将制备垫包裹在安瓿周围，以保护手指并破坏生物安全罩内部安瓿的密封。
5. 用无菌巴斯德移液器移去1 ml冷冻细胞，并将其放入装有25 ml培养基的T-10烧瓶中。 清楚地标记烧瓶以识别每个细胞系。
6. 将细胞放入37°C湿润培养箱中，空气中5％CO 2。
7. 24小时后，从顶部移出5 ml培养基，而不会干扰沉淀在烧瓶底部的淋巴细胞，并替换为5 ml预热的培养基。
8. 每5 – 6天向细胞中注入3 – 4 ml新鲜培养基，并根据需要分成新的培养物。

从现场文化的运送

1. 将活细胞培养物放入装有RPMI-25，1640％FCS，15％青霉素-链霉素（Gibco）的T-1烧瓶中。 瓶盖将拧紧并用石蜡膜密封。
2. 取出封口膜。
3. 将培养物置于空气中含37％CO5的2°C加湿培养箱中，并使细胞沉降（20 – 30分钟）。
4. 用无菌移液器除去10 – 15 ml培养基，然后弃去。
5. 将瓶盖放回稍微松动的烧瓶中以允许气体交换（检查以确保瓶盖螺纹上没有培养基。如果这样，则您可能希望转移到新的瓶中。）将培养物放回带有5％CO 2in的培养箱中空气。 他们应该在一两天内恢复。
6. 通过重新悬浮细胞聚集体并除去3 -4％的体积并用新鲜培养基代替，每50-60天用新鲜培养基喂入细胞。 从烧瓶中取出的细胞可根据需要用于启动新的培养。

温迪·诺里斯（Wendy Norris）