למשלוח של תאים קפואים

תאים קפואים יתקבלו בהתייחסות ל- 1 מ"ל על קרח יבש. שמור על תאים קפואים עד שהופשרו לתרבית תאים או שמים באחסון חנקן נוזלי אם לא מתחילים מייד תרבויות. עם זאת, מומלץ שאם אתה מתכוון לאחסן את התאים לשימוש מאוחר יותר, תגדל מניות טריות והקפיא אמפולות מרובות. התאים שמורים בקריאו בסרום 45% RPMI-1640, בסרום עגל עוברי 50% ו- DMSO ב- 5% (דרגת תרבית רקמות).

1. מניחים 10 מ"ל של RPMI-1640, 15% סרום עגל עוברי (FCS), ± אנטיביוטיקה בבקבוק T-25.
2. אפשר לאמצעי התקשורת לאזן באינקובטור של 37 ° C באוויר 5% CO 2in למשך 30 דקות.
3. יש להפשיר כל אמפולה של תאים קפואים באמבט מים 37 מעלות צלזיוס או כוס מים פושרים, אחד בכל פעם.
4. נקה במהירות את החלק החיצוני של האמפולה בעזרת כרית הכנה איזופרופנול סטרילית, ואז עטוף את כרית ההכנה סביב האמפולה כדי להגן על האצבעות וסדק את החותם על האמפולה בתוך מכסה המגן הביולוגי.
5. הסר את ה- 1 מיליליטר של תאים קפואים עם פיפטה זכוכית סטרילית סטרילית והניח בתוך בקבוק T-25 עם 10 מיליליטר של בינוני. ברור תווית בקבוק כדי לזהות כל שורת תאים.
6. הניחו את התאים בחממה לחות של 37 ° C עם 5% CO 2 באוויר.
7. לאחר 24 שעות הסר 5 מ"ל של מדיום מלמעלה מבלי להפריע לימפוציטים שהתיישבו בתחתית הבקבוק והחלף עם 5 מ"ל של מדיום מחומם מראש.
8. להאכיל את התאים עם 5-6 מיליליטר של מדיום טרי כל 3-4 ימים ולפצל לתרבויות חדשות כנדרש.

למשלוח תרבויות חיות

1. תרבויות לימפוציטים חיות יתקבלו בבקבוקי T-25 המלאים לראש עם RPMI-1640, 15% FCS, 1% פניצילין-סטרפטומיצין (Gibco). הכובעים יהיו הדוקים ואטומים באמצעות פרפילם.
2. הסר פרפילם.
3. מקום תרבויות בחממה לחה 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2 באוויר ולאפשר לתאים להתיישב (20 - 30 דקות).
4. בעזרת פיפטה סטרילית הסר את כל 10 - 15 מיליליטר למעט מדיום וזורק אותו.
5. הנח את הכובעים בחזרה על צלוחיות שהתרופפו מעט כדי לאפשר חילופי דלק (בדוק וודא כי בחוטי הכובעים אין אמצעי מדיה. אם כן, אולי תרצה להעביר לבקבוק חדש.) הניח את התרבויות בחממה עם 5% CO 2in אוויר. הם צריכים להתאושש ביום או יומיים.
6. להאכיל את התאים במדיום טרי כל 3-4 ימים על ידי השעיה מחדש של אגרגטי התא והסרת 50-60% מהנפח והחלפה בתקשורת טרייה. ניתן להשתמש בתאים שהוסרו מהבקבוקון ליזום תרבויות חדשות לפי הצורך.

ונדי נוריס