Van verzending van bevroren cellen

Bevroren cellen worden ontvangen in aliquots van 1 ml op droogijs. Houd cellen bevroren totdat ze ontdooid zijn voor celkweek of plaats ze in vloeibare stikstofopslag als ze niet meteen beginnen met kweken. Het wordt echter aanbevolen om, als u de cellen gaat bewaren voor later gebruik, verse voorraden op te kweken en meerdere ampullen in te vriezen. De cellen worden ingevroren in 45% RPMI-1640, 50% foetaal kalfsserum en 5% DMSO (weefselkweekkwaliteit).

1. Doe 10 ml RPMI-1640, 15% foetaal kalfsserum (FCS), ±antibiotica in een T-25 kolf.
2. Laat de media gedurende 37 minuten equilibreren in een bevochtigde incubator van 5°C met 2% CO 30 in lucht.
3. Ontdooi elke ampul met bevroren cellen één voor één in een waterbad van 37°C of een beker lauw water.
4. Maak de buitenkant van de ampul snel schoon met een steriel isopropanolpreppad en wikkel het preppad vervolgens om de ampul om de vingers te beschermen en de verzegeling van de ampul in een biologische veiligheidskap te verbreken.
5. Verwijder de 1 ml bevroren cellen met een steriele glazen pasteurpipet en plaats ze in een T-25 kolf met 10 ml medium. Label de kolf duidelijk om elke cellijn te identificeren.
6. Plaats de cellen in een bevochtigde incubator van 37°C met 5% CO 2 in de lucht.
7. Verwijder na 24 uur 5 ml medium van de bovenkant zonder de lymfocyten op de bodem van de kolf te verstoren en vervang door 5 ml voorverwarmd medium.
8. Voed de cellen elke 5 - 6 dagen met 3 - 4 ml vers medium en splits indien nodig in nieuwe culturen.

Van verzending van levende culturen

1. Levende lymfocytenculturen worden ontvangen in T-25-kolven die tot de rand zijn gevuld met RPMI-1640, 15% FCS, 1% penicilline-streptomycine (Gibco). De doppen worden strak en verzegeld met parafilm.
2. Parafilm verwijderen.
3. Plaats de culturen in een bevochtigde incubator van 37°C met 5% CO2 in lucht en laat de cellen bezinken (20 – 30 minuten).
4. Verwijder met behulp van een steriele pipet alles behalve 10 - 15 ml medium en gooi het weg.
5. Plaats de doppen terug op de kolven, iets losgedraaid om gasuitwisseling mogelijk te maken (Controleer of de schroefdraden van de dop geen media bevatten. Als dit het geval is, kunt u deze overhevelen naar een nieuwe kolf.) Plaats de culturen terug in de incubator met 5% CO 2in lucht. Ze zouden binnen een dag of twee moeten herstellen.
6. Voed de cellen elke 3 - 4 dagen met vers medium door de celaggregaten opnieuw te suspenderen en 50-60% van het volume te verwijderen en te vervangen door vers medium. Cellen die uit de kolf zijn verwijderd, kunnen worden gebruikt om zo nodig nieuwe culturen te initiëren.

Wendy Norris