Ответ: Исследования PK / PD показали 100% биодоступность в сердце, аорте и почках. Почки были единственной тканью, в которой было предположение о скоплении, на основании гистологического исследования и данных PK / PD. Введение однократной дозы SRP-2001 продемонстрировало, что PPMO быстро выводится из сердца (в течение 2 часов), выводится из аорты в течение 4 часов, но сохраняется в почках до 48 часов. Количественная ддПЦР продемонстрировала активность ингибирования криптического сплайсинга G608G во всех протестированных тканях, кроме кожи (аорта, сердце, почки, печень, четырехглавые мышцы, кость), хотя активность варьировалась в зависимости от ткани.

Фрэнсис, Майк и Уэйн

Ответ:Что касается вопроса, честно говоря, я не знаю ответа на этот вопрос. Однако у типичного взрослого человека мы не коррелируем степень кальцификации клапанов с потреблением Mg / Ca, более тяжелая кальцификация, вероятно, связана с другими факторами.

Доктор Пинак Шах

Ответ: Я согласен с мнением доктора Шаха. Вероятно, причины кальцификации клапана при HGPS отличаются от тех, которые мы наблюдаем у пожилых пациентов. Я также ничего не знаю о метаболизме Ca и Mg.

Доктор Франческо Мусумечи

Ответ: Лампа A / C null (LMNA^{- / -}) на мышиной модели развивается DCM, сопровождающаяся потерей сердечной функции. Более того, у этих мышей обнаруживаются дефекты сердечной проводимости и обширный кардиальный фиброз, а также преждевременная смерть в возрасте 5-8 недель (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Однако модели мышей, лишенные только Lamin A (Fong et al., 2006) или ламина C (Coffinier et al., 2010), не обнаруживают сердечных дефектов и имеют нормальную продолжительность жизни.

Ссылки:
Огюст, Г., Гура, П., Ломбарди, Р., Коарфа, К., Виллерсон, Дж. Т., и Мэриан, А. Дж. (2018). Подавление активированных факторов транскрипции FOXO в увеличении выживаемости сердца на мышиной модели ламинопатий. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Коффинье, К., Юнг, Х.Дж., Ли, З., Нобумори, К., Юн, У.Д., Фарбер, Э.А., Дэвис, Б.С., Вайнштейн, М.М., Ян, Ш., Ламмердинг, Дж., Фарахани, Дж., Бентолила, Лос-Анджелес, Фонг, LG, и Янг, С.Г. (2010). Прямой синтез ламина A, минуя процессинг prelamin A, вызывает деформированные ядра в фибробластах, но не обнаруживает патологий у мышей. Журнал биологической химии, 285(27), 20818-20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Фонг, Л.Г., Берго, МО, Янг, С.Г., Фонг, Л.Г., Нг, Дж. К., Ламмердинг, Дж., Викерс, Т.А., Мета, М., Кот, Н., Гавино, Б., Цяо, X., Чанг , С.Ю., Янг, С.Р., Ян, С.Х., Стюарт, К.Л., Ли, Р.Т., Беннет, С.Ф., Берго, Миссури, и Янг, С.Г. (2006). Преламин А и ламин А, по-видимому, не обязательны в ядерной ламине. Журнал клинического исследования, 116(3), 743-752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Фрок, Р.Л., Чен, С.К., Да, Д., Фретт, Э., Лау, К., Браун, К., Пак, Д.Н., Ван, Ю., Мучир, А., Ворман, Х.Дж., Сантана, Л.Ф., Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). Специфическая для кардиомиоцитов экспрессия ламина А улучшает сердечную функцию у мышей Lmna - / -. PLoS ONE, 7(8), 1-9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Салливан, Т. (1999). Потеря экспрессии ламина А-типа нарушает целостность ядерной оболочки, что приводит к мышечной дистрофии. Журнал клеточной биологии, 147(5), 913-920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Вопрос: От Тома Мистели: как долго длилось лечение животных лонафарнибом + тозилизумабом?
Ответ: Мы провели предварительный эксперимент на гетерозиготных животных, начиная с 22-й по 30-ю неделю. Мы хотим сосредоточить внимание на этих временных рамках, чтобы оценить влияние тоцилизумаба на увеличение веса, которое ранее наблюдалось.

Вопрос: От Сгонзало: Прекрасная история Джованна и Сэмми !!! Вы видели какие-либо побочные эффекты от лечения тоцилизумабом? Или какие-либо фенотипы, которые не были улучшены у мышей с прогерией? Доктору Джованне Латтанци: Вопрос: От тома мистели: как долго длилось лечение животных лонафарнибом + тозилизумабом?
Ответ: Спасибо, Сюзана. Нет, мы не наблюдали побочных эффектов тоцилизумаба. Среди исследованных фенотипов (кифоз, дистрофия жировой ткани, дефекты волос и кожи, двигательная активность, поражения аорты и гипертрофия миокарда) имели место замедленное / улучшение.

Комментарий: От MARIE GERHARD-HERMAN: Также используется в США при ревматологических заболеваниях и васкулитах.
Ответить: Спасибо, Мари, за эту интересную информацию о применении при васкулите.

Комментарий: От ПК Стефано: Тоцилизумаб также одобрен в Японии для лечения болезни Кастлемана без иммуносупрессивных эффектов.
Ответить: Спасибо Стефано за эту информацию.

Вопрос: От Дельфин Ларье: видите ли вы какое-либо уменьшение повреждений ДНК при лечении прогеринином в моделях клеток HGPS / мышей HGPS?
Ответ: Мы наблюдали, что гены, связанные с репарацией ДНК (BRCA1, Rad51 и др.), Были изменены после обработки прогеринином.

Вопрос: От Дельфины Ларье: Как прогеринин работает у Вернера
Синдром, который - насколько я знаю - не выражает прогерин? Есть ли у молекулы другие мишени?
Ответ: Клетки WS также могут продуцировать небольшое количество прогерина, как и нормальные пожилые люди.
клетки. Мы наблюдали экспрессию прогерина в клетках WS на уровне мРНК.
Мы думаем, что белок WRN может подавлять прогерин. Однако в
В случае пациентов с WS, поскольку нет белка WRN, экспрессия прогерина
Считается, что это происходит в возрасте 20-30 лет, так же как и у людей нормального возраста
человек.

Вопрос: От Боба Бишопа: Определен ли сайт связывания прогеринина биохимически или
конструктивно? Есть ли биохимический анализ для поиска дополнительных соединений
с этим механизмом?
Ответ: Мы выполнили анализ биотин-авидиновых гранул и наблюдали
специфическое взаимодействие перогеринина с прогерином, но не с ламином А, ламином
В, р53 или эмерин.
Мы также провели анализ Elisa, чтобы найти дополнительные соединения, которые могут
быть предполагаемыми ингибиторами связывания прогерина / ламина А. Рекомбинантный белок прогерина инкубировали последовательно с химической библиотекой и ламином А.
Однако прогеринин был наиболее эффективным химическим веществом.
библиотека.

Вопрос: От Джона Кука: Большой прогресс, доктор Ким. Снижает ли Прогеринин
секреция цитокинов SASP?
Ответ: Мы заметили, что прогеринин может снизить экспрессию IL6 и IL8 в
Клетки HGPS.

Вопрос: От Сьюзан Михаэлис: доступен ли прогеринин исследователям?
Ответ: Конечно, он доступен по запросу.

Вопрос: От Томаса В. Гловера: Возможно, я пропустил это, но как вы думаете,
механизм, ответственный за благотворные эффекты при синдроме Вернера?
Ответ: Клетки, полученные от пациентов с WS, также производят небольшое количество прогерина, так как
столько же, сколько нормальные клетки, полученные от пожилых людей. Прогеринин также может быть
эффективен в клетках WS за счет снижения экспрессии прогерина.

Ответ: Спасибо за вопрос: Нет, не воспаление как таковое. Частично связанные с воспалением, мы изучили макрофаги в этом проекте и обнаружили, что нокаут ICMT увеличивает отток холестерина из макрофагов, как базальный, так и стимулируемый ApoAI и HDL. Поскольку этот эффект иногда связан с повышенным обратным транспортом холестерина in vivo, мы хотели бы определить, ICMT торможение уменьшит развитие атеросклероза.

Вопрос: От vandres: пробовали ли вы коррекцию ДНК в человеческих фибробластах HGPS разного возраста (in vitro) и проверяли нормализацию их фенотипа, чтобы увидеть, уменьшается ли он по мере старения клеток?
Ответ: Нет, мы не пробовали коррекцию фибробластов у пациентов разного возраста - только у двух разных пациентов, которые дали аналогичные результаты.

Вопрос: От Дельфины Ларье: Потрясающие эффекты! Можно ли ожидать полного KO прогерина у гетерозиготных мышей?
Ответ: В однокопии мыши я бы не ожидал, что эффективность редактирования будет сильно отличаться от того, что мы наблюдаем сейчас, поскольку для каждого прогерина уже должен быть избыток редактирующего агента.

Вопрос: От Андре Монтейро да Роча: Считаете ли вы, что перепрограммирование небольшого процента клеток может восстановить функцию стволовых клеток, но может привести к истощению стволовых клеток у взрослых?
Ответ: У нас нет данных, которые могли бы дать ответ на этот вопрос.

Вопрос: От Мэй: Похоже на кардиомиоциты, красивое окрашивание!
От Эбби Бухвалтер: Нарушает ли доминирующая отрицательная экспрессия Sun1 все комплексы LINC, включая те, которые опосредуются Sun2?
Ответ: Да, есть доказательства этого in vitro в том, что все Nesprins в NE могут быть замещены DNSUN1.

Вопрос: От Сует Ни Чен: как и какой механизм AAV9-SunDn способен оказывать долгосрочное воздействие? в каком возрасте вы вводили AAV9-Sun1DN мышам с мутантами LMNA?
Ответ: Мы вводили DNSUN1 AAV через день после индукции рекомбиназы Cre для удаления ламина A. У нас есть данные, что DNSUN1, доставляемый AAV, продолжает экспрессироваться в кардиомиоцитах через год после инъекции. Мы проводим эксперименты по дозе / времени / реакции сейчас, когда мы вернулись в лабораторию и можем сделать собственный AAV в достаточном количестве.

Вопрос: От Мартина Бергё, Viceordförande Kommittén forskning: Как вы думаете, каков относительный вклад отсутствующего ламина А по сравнению с ламином С в ваших экспериментах с нокаутом Lmna?
Ответ: Я не уверен в этом, но Sun1 взаимодействует с LaminA, и у мышей HGPS вклад должен быть весь LaminA (из которого происходит прогерин)

Вопрос: От jcampisi: Какова причина смерти в SUN1 KO или хетс?
Ответ: Хороший вопрос, который мы до сих пор не знаем, но в настоящее время подозреваем некоторую группу скелетных мышц. Нам нужен достойный гистопатологический анализ умирающих мышей.

Вопрос: От Тома Мистели: Колин: видели ли вы изменения в путях клеточной реакции на стресс у животных Lmna / Sun?
Ответ: Мы еще не измерили гены / маркеры стрессовой реакции у этих мышей.

Вопрос: от Дельфин Ларье: Вы бы предусмотрели возможность нацеливания DNSUN1 только на сердце у пациентов с HGPS?
Ответ: Это возможно с учетом серотипа и использования промотора, специфичного для кардиомиоцитов. Эти эксперименты в настоящее время продолжаются

Вопрос:От Yuexia Wang: Почему KO SUN1 оказывает меньшее влияние на гомозиготных мышей G609G?
Ответ: Предположительно потому, что мыши-гомозиготные мыши экспрессируют больше прогерина. В наших генетических экспериментах мы видим эффект реакции гетерозигот против гомозигот.

Вопрос:От Роланда Фойснера: Привет, Колин, хороший разговор. Каков отрицательный эффект активации SUN1 в HGPS. Роланд
Ответ: Возможно усиление ассоциации сети МТ с комплексом LINC. Повышенная экспрессия Sun / Nesprin в культурах клеток влияет на расположение ядра и миграцию клеток

Для меня большая честь познакомиться с семьей Бассо и Перо. Спасибо, что поделились своим путешествием. Вы воистину и вдохновение!

Спасибо семье Сами и Александры за то, что они приняли участие в семинаре и поделились своим вдохновляющим путешествием с прогерией!

Фантастический прогресс Эйгера с одобрением на горизонте.

Можем ли мы продлить эту сессию до конца недели и продолжить обсуждение? (СПАСИБО, всем и каждому!) 

Этот семинар был невероятным. Я поздравляю PRF с приверженностью к этой великой деятельности. Без сомнения, этот семинар наполнил меня большим количеством знаний для моего будущего. Это было потрясающе. Вместе мы найдем лекарство!

Всегда впечатлен захватывающей наукой на встречах PRF. Большое спасибо организаторам за сохранение опыта семинаров сообщества даже в этом виртуальном формате!

Вы все РОК !!! Спасибо за эту прекрасную возможность, подумав много лет назад, теперь это похоже на жизнь в будущем! Счастлив быть частью этого

Я скучаю по гитаре доктора Коллина. Прекрасная работа!

Большое спасибо за организацию этого, поистине самого яркого момента моей недели!

Спасибо всем и до встречи в следующем году в Кембридже !!

 Спасибо всем, что присоединились к нам!