10-й Международный научный семинар PRF

Отвечать: Исследования ФК/ФД показали биодоступность 100% в сердце, аорте и почках. Почки были единственной тканью, где было предположение о накоплении на основе гистологического исследования и данных ФК/ФД. Введение однократной дозы SRP-2001 продемонстрировало, что PPMO быстро выводился из сердца (в течение 2 часов), выводился из аорты в течение 4 часов, но сохранялся в почках до временной точки 48 часов. Количественная ddPCR продемонстрировала активность ингибирования скрытого сплайсинга G608G во всех тканях, за исключением кожи, протестированной до сих пор (аорта, сердце, почки, печень, четырехглавая мышца, кость), хотя активность варьировалась в зависимости от ткани.

Фрэнсис, Майк и Уэйн

Отвечать:Что касается вопроса, честно говоря, я не знаю ответа на этот вопрос. Однако у типичного взрослого человека мы не коррелируем степень клапанной кальцификации с потреблением Mg/Ca, более тяжелая кальцификация, вероятно, обусловлена другими факторами.

Доктор Пинак Шах

Отвечать: Я согласен с мнением доктора Шаха. Вероятно, причины кальцификации клапана при HGPS отличаются от тех, что мы наблюдаем у пожилых пациентов. Я также не обладаю знаниями о метаболизме Ca и Mg.

Доктор Франческо Мусумечи

Отвечать: Ламиновый A/C нулевой (Лмна^-/-) мышиная модель развивает ДКМП, сопровождающуюся потерей сердечной функции. Более того, у этих мышей наблюдаются дефекты сердечной проводимости и обширный сердечный фиброз, а также преждевременная смерть в возрасте 5-8 недель (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Однако мышиные модели, в которых отсутствует только ламин А (Fong et al., 2006) или ламин С (Coffinier et al., 2010), не демонстрируют сердечных дефектов и имеют нормальную продолжительность жизни.

Ссылки:
Огюст Г., Гурха П., Ломбарди Р., Коарфа К., Уиллерсон Дж. Т. и Мэриан А. Дж. (2018). Подавление активированных факторов транскрипции FOXO в сердце продлевает выживаемость в мышиной модели ламинопатий. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). Прямой синтез ламина А, минуя процессинг преламина а, вызывает деформацию ядер в фибробластах, но не обнаруживает патологию у мышей. Журнал биологической химии, 285(27), 20818–20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang, SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). Преламин А и ламин А, по-видимому, не являются обязательными в ядерной пластинке. Журнал клинических исследований, 116(3), 743–752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). Специфическая для кардиомиоцитов экспрессия ламина А улучшает сердечную функцию у мышей Lmna-/-. ПЛОС ОДИН, 7(8), 1–9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Салливан, Т. (1999). Потеря экспрессии ламина типа А нарушает целостность ядерной оболочки, что приводит к мышечной дистрофии. Журнал клеточной биологии, 147(5), 913–920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Вопрос: От Тома Мистели: какова продолжительность лечения животных лонафарнибом + тозилизумабом?
Отвечать: Мы провели предварительный эксперимент на гетерозиготных животных, начиная с 22-й по 30-ю неделю. Мы хотели бы сосредоточиться на этом временном интервале, чтобы оценить эффект на набор веса, который ранее наблюдался при применении тоцилизумаба.

Вопрос: От Сгонзало: Прекрасная история Джованны и Сэмми!!! Вы заметили какие-либо побочные эффекты лечения тоцилизумабом? Или какие-либо фенотипы, которые не были улучшены у мышей с прогерией? Доктору Джованне Латтанци: Вопрос: От Тома Мистели: как долго длилось лечение лонафарнибом + тозилизумабом у животных?
Отвечать: Спасибо, Сусана. Нет, мы не увидели никаких побочных эффектов тоцилизумаба. Среди исследованных фенотипов (кифоз, дистрофия жировой ткани, дефекты волос и кожи, двигательная активность, поражения аорты и гипертрофия миокарда) были задержаны/улучшены.

Комментарий: От МАРИ ГЕРХАРД-ХЕРМАН: Также используется в США при ревматологических заболеваниях и васкулите.
Отвечать: Спасибо, Мари, за эту интересную информацию о применении при васкулите.

Комментарий: От ПК Стефано: Тоцилизумаб также одобрен в Японии для лечения болезни Кастлемана без иммунодепрессивного эффекта.
Отвечать: Спасибо, Стефано, за эту информацию.

Вопрос: От Дельфины Ларрье: наблюдаете ли вы какое-либо уменьшение повреждений ДНК при лечении прогеринином в клетках HGPS/мышах HGPS?
Отвечать: Мы наблюдали, что гены, связанные с репарацией ДНК (BRCA1, Rad51 и т. д.), изменились после лечения прогеринином.

Вопрос: От Дельфины Ларье: Как прогеринин действует в Вернере
Синдром, который, насколько мне известно, не экспрессирует прогерин? Имеет ли молекула какие-либо другие цели?
Отвечать: Клетки WS также могут вырабатывать небольшое количество прогерина, как и нормальные стареющие клетки.
Клетки. Мы наблюдали экспрессию прогерина в клетках WS на уровне мРНК.
Мы считаем, что белок WRN может функционировать как ингибитор прогерина. Однако в
в случае пациентов с синдромом Вильсона-Спрингса, поскольку нет белка WRN, экспрессия прогерина
считается, что это происходит в возрасте 20–30 лет, так же как и у людей обычного возраста
люди.

Вопрос: От Боба Бишопа: Определяется ли место связывания прогеринина биохимически или
структурно? Существует ли биохимический анализ для поиска дополнительных соединений
с этим механизмом?
Отвечать: Мы провели анализ осаждения гранул биотина-авидина и наблюдали
специфическое взаимодействие перогеринина с прогерином, но не с ламином А, ламин
B, p53 или эмерин.
Мы также провели анализ ELISA, чтобы найти дополнительные соединения, которые могли бы
быть предполагаемыми ингибиторами связывания прогерина/ламина А. Рекомбинантный белок прогерина был последовательно инкубирован с химической библиотекой и ламином А.
Однако прогеринин оказался самым эффективным химическим веществом в химическом исследовании.
библиотека.

Вопрос: От Джона Кука: Большой прогресс, доктор Ким. Прогеринин уменьшает
секреция цитокинов SASP?
Отвечать: Мы наблюдали, что прогеринин может снижать экспрессию IL6 и IL8 в
Ячейки HGPS.

Вопрос: От Сьюзан Михаэлис: доступен ли прогеринин исследователям?
Отвечать: Конечно, это доступно по вашему запросу.

Вопрос: От Томаса В. Гловера: Я, возможно, пропустил это, но что, по-вашему, является
механизм, ответственный за благоприятные эффекты при синдроме Вернера?
Отвечать: Клетки, полученные от пациентов с синдромом Вольфа-Шейха, также вырабатывают небольшое количество прогерина, как
как и нормальные клетки, полученные от пожилых людей. Прогеринин может быть также
эффективен в клетках WS за счет снижения экспрессии прогерина.

Отвечать: Спасибо за вопрос: Нет, не воспаление как таковое. Частично связанное с воспалением, мы изучали макрофаги в этом проекте и обнаружили, что нокаут Икмт в увеличивает отток холестерина из макрофагов, как базальный, так и стимулированный ApoAI и HDL. Поскольку этот эффект иногда связан с увеличением обратного транспорта холестерина in vivo, мы хотели бы определить, Икмт ингибирование уменьшит развитие атеросклероза.

Вопрос: От vandres: пробовали ли вы проводить коррекцию ДНК в человеческих фибробластах HGPS разного возраста (in vitro) и проверяли нормализацию их фенотипа, чтобы увидеть, снижается ли он по мере старения клеток?
Отвечать: Нет, мы не пробовали проводить коррекцию на фибробластах от пациентов разных возрастов — только от двух разных пациентов, что дало схожие результаты.

Вопрос: От Дельфины Ларрие: Удивительные эффекты! Ожидали бы вы полного нокаута прогерина у гетерозиготных мышей?
Отвечать: В случае мыши с одной копией я бы не стал ожидать существенной разницы в эффективности редактирования по сравнению с тем, что мы наблюдаем в настоящее время, поскольку для каждого прогерина уже должен быть избыток редактирующего агента.

Вопрос: Андре Монтейру да Роча: Считаете ли вы, что перепрограммирование небольшого процента клеток может восстановить функцию стволовых клеток, но может ли это привести к истощению взрослых стволовых клеток?
Отвечать: У нас нет данных, которые могли бы дать ответ на этот вопрос.

Вопрос: От Мэй: Похоже на кардиомиоцит, красивое окрашивание!
От Эбби Бухвалтер: Нарушает ли доминантно-негативная экспрессия Sun1 все комплексы LINC, включая те, которые опосредованы Sun2?
Отвечать: Да, есть доказательства in vitro, что все несприны в NE могут быть замещены DNSUN1.

Вопрос: От Сют Ни Чен: как и каков механизм, с помощью которого AAV9-SunDn способен оказывать долгосрочное воздействие? В каком возрасте вы вводили AAV9-Sun1DN мышам с мутацией LMNA?
Отвечать: Мы ввели DNSUN1 AAV через день после индукции рекомбиназы Cre для удаления ламина А. У нас есть данные, что DNSUN1, доставляемый AAV, продолжает экспрессироваться в кардиомиоцитах через год после инъекции. Мы проводим эксперименты по дозе/времени/реакции теперь, когда мы вернулись в лабораторию и можем производить собственный AAV в достаточных количествах

Вопрос: От Мартина Берго, вице-ордфёрандского комитета по разветвлению: Как вы думаете, каков относительный вклад отсутствующего ламина А по сравнению с ламином С в ваших экспериментах по нокауту Lmna?
Отвечать: Я не уверен в этом, но Sun1 взаимодействует с LaminA, и у мышей HGPS весь вклад должен быть в LaminA (из которого происходит прогерин).

Вопрос: От jcampisi: Какова причина смерти в SUN1 KO или hets?
Отвечать: Хороший вопрос, мы пока не знаем, но в настоящее время подозреваем, что это какая-то группа скелетных мышц. Нам нужно провести приличный гистопатологический анализ умирающих мышей.

Вопрос: От Тома Мистели: Колин, наблюдали ли вы изменения в путях клеточной реакции на стресс у животных Lmna/Sun?
Отвечать: Мы пока не измеряли какие-либо гены/маркеры реакции на стресс у этих мышей.

Вопрос: От Дельфины Ларрье: Предполагаете ли вы, что у пациентов с синдромом ХГПХ можно воздействовать только на сердце с помощью DNSUN1?
Отвечать: Это возможно, учитывая серотип и использование кардиомиоцит-специфического промотора. Эти эксперименты в настоящее время продолжаются.

Вопрос:От Юйся Вана: Почему нокаут SUN1 оказывает меньшее действие на гомозиготных мышей G609G?
Отвечать: Предположительно, потому что гомозиготные мыши экспрессируют больше прогерина. Мы видим эффект реакции гетерозигот против гомозигот в наших генетических экспериментах

Вопрос:От Роланда Фойснера: Привет, Колин, хорошая беседа. Каков негативный эффект повышенной регуляции SUN1 в HGPS. Роланд
Отвечать: Вероятно, повышенная ассоциация сети MT с комплексом LINC. Повышенная экспрессия Sun/Nesprin в культурах клеток влияет на ядерное позиционирование и миграцию клеток

Для меня большая честь познакомиться с семьей Бассо и Перо. Спасибо, что поделились своим путешествием. Вы действительно вдохновляете!

Спасибо семье Сами и Александры за то, что приняли участие в семинаре и поделились своим вдохновляющим опытом борьбы с прогерией!

Фантастический прогресс, Эйгер, одобрение на горизонте.

Можем ли мы продлить эту сессию до конца недели и продолжить обсуждение? (СПАСИБО всем и каждому!) 

Этот семинар был невероятным. Я поздравляю PRF с тем, что они взяли на себя обязательство провести эту замечательную деятельность. Без сомнения, этот семинар наполнил меня множеством знаний для моего будущего. Это было потрясающе. Вместе мы найдем лекарство!

Всегда впечатлялся захватывающей наукой на встречах PRF. Большое спасибо организаторам за сохранение опыта общественных семинаров даже в этом виртуальном формате!

Вы все СУПЕР!!! Спасибо за эту замечательную возможность, вспоминая много лет назад, сейчас это как жить в будущем! Рад быть его частью

Мне не хватает гитары доктора Коллина. Отличная работа!

Огромное спасибо за организацию этого события, это действительно самое яркое событие моей недели!

Спасибо всем и увидимся лично в следующем году в Кембридже!!

 Спасибо всем, что присоединились к нам!