ಪುಟ ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ

ಪ್ರಚೋದಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್

ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ಗಳು

 

ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್ ಸೆಲ್ & ಟಿಶ್ಯೂ ಬ್ಯಾಂಕ್ ಹ್ಯೂಮನ್ ಇಂಡ್ಯೂಸ್ಡ್ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ಸ್ (ಐಪಿಎಸ್ಸಿ)

  1. ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಐಪಿಎಸ್ಸಿಗಳು ವಿಜ್ಞಾನೇತರರಿಗೆ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮಾಹಿತಿ 
  2. ಉದ್ದೇಶ ದಿ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್‌ನಿಂದ ಪ್ರಚೋದಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಉತ್ಪಾದನೆ ಮತ್ತು ವಿತರಣೆ  
  3. ಹಚಿನ್ಸನ್-ಗಿಲ್ಫೋರ್ಡ್ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ ಇಂಡ್ಯೂಸ್ಡ್-ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್‌ಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆ (ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿ) 
  4. ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ: ಕ್ರಮಬದ್ಧಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಗುಣಲಕ್ಷಣ 
  5. ಐಪಿಎಸ್ಸಿಗಳನ್ನು ಪಡೆದ ಮೂಲ ಪ್ರಾರಂಭಿಕ ವಸ್ತು
  6. ಭವಿಷ್ಯದ ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ನವೀಕರಣಗಳು ಮತ್ತು ಹೊಸ ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ನಮ್ಮ ಇಮೇಲ್ ಪಟ್ಟಿಗೆ ಸೇರಿ  
  7. ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು? ನಮ್ಮನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ.
  8. ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿ ಲೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಆದೇಶಿಸಲಾಗುತ್ತಿದೆ 
  9. ಎಚ್‌ಜಿಪಿಎಸ್ ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣ ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮ ತಯಾರಿಕೆ 
  10. ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವುದು 
  11. ಥಾವಿಂಗ್ HESC ಗಳು ಮತ್ತು iPSC ಕೋಶಗಳು (ಪ್ರತಿ ಕ್ರಯೋ-ವೈಯಲ್)
  12. ಎಚ್‌ಇಎಸ್‌ಸಿ / ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿಗಾಗಿ ಕೊಯ್ಲು ಮತ್ತು ಆರೈಕೆ 
  13. ಹಾದುಹೋಗುವಿಕೆ hESC/iPSC 
  14. ಘನೀಕರಿಸುವ HESC/iPSC

1. ವಿಜ್ಞಾನಿ ಅಲ್ಲದವರಿಗೆ ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮಾಹಿತಿ

ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್‌ಗಳು “ಅಪಕ್ವ” ಕೋಶಗಳಾಗಿವೆ, ಅದು ಯಾವುದೇ ಒಂದು ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರವಾಗಲು ಇನ್ನೂ ಬದ್ಧವಾಗಿಲ್ಲ. ಹೃದಯ ಅಥವಾ ರಕ್ತನಾಳಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಮತ್ತು ಅಂಗಗಳಂತಹ ದೇಹದಲ್ಲಿನ ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಪ್ರಬುದ್ಧ ಕೋಶಗಳಾಗಿ ಬೆಳೆಯುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಅವು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. 2007 ರಲ್ಲಿ, ಸಂಶೋಧಕರು ನಾವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸಂಶೋಧನಾ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬೆಳೆಯುವ ಪ್ರಬುದ್ಧ ವಯಸ್ಕ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು ರಚಿಸುವ ತಂತ್ರವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದರು.1, 2 . ಕೃತಕವಾಗಿ ರಚಿಸಲಾದ ಈ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು ಇಂಡ್ಯೂಸ್ಡ್ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ಸ್ (“ಐಪಿಎಸ್ಸಿ”) ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕ್ಷೇತ್ರಕ್ಕೆ, ಇದು ಒಂದು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಗತಿಯಾಗಿದೆ. ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ, ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಈಗ ಪ್ರೊಜೀರಿಯಾ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾದಲ್ಲಿ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳು ಹೇಗೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಹೊಂದುತ್ತವೆ ಎಂಬ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳನ್ನು ಕೇಳಬಹುದು. ಈ ಹಿಂದೆ ಮಾನವ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ ಯಾವುದೇ ಮೂಲವಿರಲಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಇಲ್ಲದ ಜನರಿಂದ ಬಂದ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳು ಹೇಗೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂಬ ಮಾಹಿತಿಯ ಅನೂರ್ಜಿತತೆ ಇತ್ತು. ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು ಮರು-ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಮಾಡಬಹುದು, ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ ಪ್ರಬುದ್ಧ ಪ್ರೊಜೀರಿಯಾ ರಕ್ತನಾಳಗಳು, ಹೃದಯ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರಗಳು. ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, ಮಾನವ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಹೃದಯ ಅಥವಾ ರಕ್ತನಾಳಗಳ ಯಾವುದೇ ಮೂಲಗಳು ಇರಲಿಲ್ಲ.  ನಾವು ಈಗ ಕೀಲಿಯನ್ನು ಕೇಳಬಹುದು ಹೃದಯಾಘಾತ ಮತ್ತು ಪಾರ್ಶ್ವವಾಯುಗಳಿಂದ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾದಲ್ಲಿ ಆರಂಭಿಕ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಹೃದ್ರೋಗದ ಬಗ್ಗೆ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು. ಈ ಆವಿಷ್ಕಾರಗಳನ್ನು ನಾವು ಸಾಮಾನ್ಯ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿ ಹೃದ್ರೋಗ ಮತ್ತು ವಯಸ್ಸಾದವರೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ನಮ್ಮೆಲ್ಲರಲ್ಲೂ ವಯಸ್ಸಾದ ಮೇಲೆ ಯಾವ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂಬುದರ ಕುರಿತು ಇನ್ನಷ್ಟು ತಿಳಿದುಕೊಳ್ಳಬಹುದು. ಈಗಾಗಲೇ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹಲವಾರು ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಪ್ರಕಟಗೊಂಡಿವೆ.3-5  ಈ ಅಮೂಲ್ಯವಾದ ಸಾಧನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇನ್ನೂ ಅನೇಕ ಆವಿಷ್ಕಾರಗಳಿಗೆ ಅನುಕೂಲವಾಗುವುದು ದಿ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್‌ನಲ್ಲಿನ ನಮ್ಮ ಗುರಿ. ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ ಪ್ರೈಮರ್ಗಾಗಿ, ದಯವಿಟ್ಟು ಈ ಯುಎಸ್ ಸರ್ಕಾರದ ವೆಬ್‌ಸೈಟ್ ನೋಡಿ: https://stemcells.nih.gov/info/basics.htm

 

    1. ಟಕಹಾಶಿ ಕೆ, ತನಾಬೆ ಕೆ, ಓಹ್ನುಕಿ ಎಂ, ನರಿಟಾ ಎಂ, ಇಚಿಸಾಕಾ ಟಿ, ಟೊಮೊಡಾ ಕೆ, ಯಮನಕ ಎಸ್. ವಯಸ್ಕ ಮಾನವ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳಿಂದ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ಇಂಡಕ್ಷನ್. ಕೋಶ. 2007; 131: 861-872.
    2. ಯು ಜೆ, ವೊಡ್ಯಾನಿಕ್ ಎಮ್ಎ, ಸ್ಮುಗಾ-ಒಟ್ಟೊ ಕೆ, ಆಂಟೋಸಿವಿಕ್ಜ್-ಬೌರ್ಗೆಟ್ ಜೆ, ಫ್ರಾನ್ ಜೆಎಲ್, ಟಿಯಾನ್ ಎಸ್, ನೀ ಜೆ, ಜಾನ್ಸ್‌ಡೊಟ್ಟಿರ್ ಜಿಎ, ರೂಟ್ಟಿ ವಿ, ಸ್ಟೀವರ್ಟ್ ಆರ್, ಸ್ಲುಕ್ವಿನ್, II, ಥಾಮ್ಸನ್ ಜೆಎ. ಮಾನವನ ದೈಹಿಕ ಕೋಶಗಳಿಂದ ಪಡೆದ ಪ್ರಚೋದಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ರೇಖೆಗಳು. ವಿಜ್ಞಾನ. 2007; 318: 1917-1920.
    3. ಲಿಯು ಜಿಹೆಚ್, ಬಾರ್ಖೋ ಬಿಜೆಡ್, ರೂಯಿಜ್ ಎಸ್, ಡೈಪ್ ಡಿ, ಕ್ಯೂ ಜೆ, ಯಾಂಗ್ ಎಸ್ಎಲ್, ಪನೋಪೌಲೋಸ್ ಎಡಿ, ಸುಜುಕಿ ಕೆ, ಕುರಿಯನ್ ಎಲ್, ವಾಲ್ಷ್ ಸಿ, ಥಾಂಪ್ಸನ್ ಜೆ, ಬೌ ಎಸ್, ಫಂಗ್ ಎಚ್ಎಲ್, ಸ್ಯಾಂಚೊ-ಮಾರ್ಟಿನೆಜ್ I, ಜಾಂಗ್ ಕೆ, ಯೇಟ್ಸ್ ಜೆ, 3rd, ಇಜ್ಪಿಸುವಾ ಬೆಲ್ಮಾಂಟೆ ಜೆಸಿ. ಹಚಿನ್ಸನ್-ಗಿಲ್ಫೋರ್ಡ್ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ನಿಂದ ಐಪಿಎಸ್ಸಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಕಾಲಿಕ ವಯಸ್ಸಾದ ಮರುಹಂಚಿಕೆ. ಪ್ರಕೃತಿ. 2011; 472: 221-225.
    4. ಮಿಸ್ಟೇಲಿ ಟಿ. ಎಚ್‌ಜಿಪಿಎಸ್-ಪಡೆದ ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿಗಳು ವಯಸ್ಸಿನವರಿಗೆ. ಸೆಲ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್. 2011; 8: 4-6.

2. ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್‌ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ (ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿ) ಉತ್ಪಾದನೆ ಮತ್ತು ವಿತರಣೆಯ ಉದ್ದೇಶ

ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳು ಮತ್ತು ಹಚಿನ್ಸನ್-ಗಿಲ್ಫೋರ್ಡ್ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ ಮತ್ತು ಅದರ ವಯಸ್ಸಾದ ಸಂಬಂಧಿತ ಕಾಯಿಲೆಗಳಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡುವುದು ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್‌ನ ಧ್ಯೇಯವಾಗಿದೆ. 2009 ನಲ್ಲಿ, ಉತ್ತಮ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಪಿಎಚ್‌ಡಿ, ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್, ಪಿಎಚ್‌ಡಿ ನಿರ್ದೇಶನದ ಮೇರೆಗೆ ಪಿಆರ್‌ಎಫ್ ಕೆನಡಾದ ಟೊರೊಂಟೊ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದ ತಜ್ಞರ ತಜ್ಞರ ಸಹಯೋಗದೊಂದಿಗೆ ಪ್ರವೇಶಿಸಿತು. ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್ ಇಂಟಿಗ್ರೇಟಿವ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ಕೆನಡಾ ಸಂಶೋಧನಾ ಅಧ್ಯಕ್ಷರಾಗಿದ್ದಾರೆ. ಎಕ್ಸ್‌ಎನ್‌ಯುಎಮ್‌ಎಕ್ಸ್‌ನಂತೆ, ಪಿಆರ್‌ಎಫ್ ಕೆನಡಾದ ಒಟ್ಟಾವಾ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದಲ್ಲಿ ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್ ಅವರೊಂದಿಗೆ ಸಹಭಾಗಿತ್ವವನ್ನು ಮುಂದುವರೆಸಿದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಅವರು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಮತ್ತು ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಮೆಡಿಸಿನ್, ಮೆಡಿಸಿನ್ ವಿಭಾಗದ ಪ್ರಾಧ್ಯಾಪಕರಾಗಿದ್ದಾರೆ ಮತ್ತು ಒಟ್ಟಾವಾ ಆಸ್ಪತ್ರೆ ಸಂಶೋಧನಾ ಸಂಸ್ಥೆಯ ಸ್ಪ್ರೊಟ್ ಸೆಂಟರ್ ಫಾರ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ರಿಸರ್ಚ್‌ನ ಹಿರಿಯ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಾಗಿದ್ದಾರೆ.

ಈ ಅಮೂಲ್ಯವಾದ ಸಾಧನವನ್ನು ಪ್ರಪಂಚದಾದ್ಯಂತದ ಸಂಶೋಧಕರಿಗೆ ಒದಗಿಸುವುದು ನಮ್ಮ ಗುರಿ. ಈ ಹೊಸ ಸಂಶೋಧನಾ ಸಾಧನವನ್ನು ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾದಲ್ಲಿ ಹೊಸ ಮತ್ತು ನವೀನ ಸಂಶೋಧನೆಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಜೊತೆಗೆ ಹೃದ್ರೋಗ ಮತ್ತು ವಯಸ್ಸಾದ ಸಂಬಂಧ.  

3. ಹಚಿನ್ಸನ್-ಗಿಲ್ಫೋರ್ಡ್ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ ಇಂಡ್ಯೂಸ್ಡ್-ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್‌ಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆ (ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿ)

ಇಂಡ್ಯೂಸ್ಡ್-ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್‌ಗಳನ್ನು (ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿ) ನಾಲ್ಕು ಮಾನವ ಅಂಶಗಳ ವಿಎಸ್ವಿಜಿ-ಸ್ಯೂಡೋಟೈಪ್ಡ್ ರೆಟ್ರೊವೈರಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಡಕ್ಷನ್ ಬಳಸಿ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ, ಅಕ್ಟೋಬರ್ 4, ಸಾಕ್ಸ್ 2, ಕೆಎಲ್ಎಫ್ 4, ಮತ್ತು ಸಿ-ಮೈಕ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳಾಗಿ. ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ವಸಾಹತುಗಳನ್ನು ಮೌಸ್-ಭ್ರೂಣದ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (ಎಂಇಎಫ್) ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. ಬಳಸಿದ ವಿಧಾನವು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಈ ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಆದರೆ ಇಒಎಸ್ ವರದಿಗಾರನ ಬಳಕೆಯಿಲ್ಲದೆ (ನೇಚರ್ ಪ್ರೊಟೊಕಾಲ್ 4: 1828-1844, 2009). 

4. ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ: ಕ್ರಮಬದ್ಧಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಗುಣಲಕ್ಷಣ

ಪ್ರಸ್ತುತ ಲಭ್ಯವಿರುವ ಸಾಲುಗಳು ಹಲವಾರು ation ರ್ಜಿತಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಹಂತಗಳಿಗೆ ಒಳಪಟ್ಟಿವೆ (ಡೌನ್‌ಲೋಡ್ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಪಿಡಿಎಫ್‌ಗಳನ್ನು ಕೆಳಗೆ ನೋಡಿ):

 

    1. ಪ್ರತಿ ಸಾಲಿಗೆ ಮೈಕೋಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಪರೀಕ್ಷೆ: ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್ ಲ್ಯಾಬ್ ಪ್ರತಿ ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗೆ ಪಿಸಿಆರ್‌ನಿಂದ ಮೈಕೋಪ್ಲಾಸ್ಮಾಅನಾಲಿಸಿಸ್ ಮಾಡಿದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ವಿಸ್ತರಣೆಯ ನಂತರ ಮತ್ತು ಶಿಪ್ಪಿಂಗ್ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಮೊದಲು, ಮೈಕೋಪ್ಲಾಸ್ಮಾಗಾಗಿ ರೇಖೆಗಳನ್ನು ಮರುಪರಿಶೀಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
    2. ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆನ್ಸಿ ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳಿಗೆ ಇಮ್ಯುನೊಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಟ್ರಾ-ಎಕ್ಸ್‌ಎನ್‌ಯುಎಮ್ಎಕ್ಸ್-ಎಕ್ಸ್‌ಎನ್‌ಯುಎಮ್ಎಕ್ಸ್, ಟ್ರಾ-ಎಕ್ಸ್‌ನ್ಯೂಎಮ್ಎಕ್ಸ್-ಎಕ್ಸ್‌ಎನ್‌ಯುಎಮ್ಎಕ್ಸ್, ಮತ್ತು ಎಸ್‌ಎಸ್‌ಎಎಕ್ಸ್‌ನಮ್ಎಕ್ಸ್.
    3. ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆನ್ಸಿಯ ಸೂಚಕವಾಗಿ ಕ್ಷಾರೀಯ ಫಾಸ್ಫಟೇಸ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್
    4. ಮೂರು ಜೀವಾಣು-ಪದರಗಳ ಗುರುತುಗಳಿಗಾಗಿ ಭ್ರೂಣದ ದೇಹದ ರಚನೆ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಇಮ್ಯುನೊಸ್ಟೈನಿಂಗ್. ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ ಗುರುತುಗಳು βIII- ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ (ಎಕ್ಟೊಡರ್ಮ್), ಸ್ಮೂತ್-ಮಸಲ್ ಆಕ್ಟಿನ್ (ಮೆಸೊಡರ್ಮ್), ಮತ್ತು ಗಟಾಕ್ಸ್ನ್ಯೂಮ್ಎಕ್ಸ್ ಅಥವಾ ಎಎಫ್‌ಪಿ (ಎಂಡೋಡರ್ಮ್)
    5. ಕ್ಯಾರಿಯೋಟೈಪ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.
    6. ವಿಭಿನ್ನ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಮಿನ್ ಎ ಯ ಮರು ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ
    7. ಟೆರಾಟೋಮಾ ಅಸ್ಸೇಸ್

ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ation ರ್ಜಿತಗೊಳಿಸುವಿಕೆ:
ಪೋಷಕ ದತ್ತಾಂಶದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ ಕೆಲವು ಸಾಲುಗಳು ಟೆರಾಟೋಮಾ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನಗಳನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಿವೆ. ಎಲ್ಲಾ ಇತರ ಸಾಲುಗಳಿಗೆ, ಟೆರಾಟೋಮಾ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನಗಳು ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿವೆ ಮತ್ತು ಈ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನಗಳು ಪೂರ್ಣಗೊಂಡಂತೆ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ನವೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

5. ಈ ಐಪಿಎಸ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪಡೆದ ಮೂಲ ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತು

ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿಗಳನ್ನು ಪಿಆರ್‌ಎಫ್ ಸೆಲ್ ಮತ್ತು ಟಿಶ್ಯೂ ಬ್ಯಾಂಕ್ ರೂಪಾಂತರಗೊಳ್ಳದ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ ಸೆಲ್ ರೇಖೆಗಳಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.

ಎಲ್ಲಾ ಐಪಿಎಸ್ ಸಾಲುಗಳಿಗೆ ಬಳಸುವ ಸಂವಹನ ವಿಧಾನವೆಂದರೆ ರೆಟ್ರೊವೈರಸ್ ಎಂಕೆಒಎಸ್.

ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ಲೈನ್ ಐಡಿಪರಿವರ್ತನೆಲಿಂಗ ಮತ್ತು ದೇಣಿಗೆ ವಯಸ್ಸುಸೆಲ್ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ಹುಟ್ಟುಹಾಕಲಾಗುತ್ತಿದೆ ಇಲ್ಲಿ ಒತ್ತಿ.ಡೇಟಾವನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುವುದು
HGADFN003 iPS 1B LMNAExon 11,
1824 ಸಿ> ಟಿ
ಪುರುಷ 2yr 0mo ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು
HGADFN003
003 iPS1B
HGADFN003 iPS 1C LMNA ಎಕ್ಸಾನ್ 11,
1824 ಸಿ> ಟಿ
ಪುರುಷ 2yr 0mo ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು
HGADFN003
003 iPS1C
HGDFN003
iPS 1D
LMNA ಎಕ್ಸಾನ್ 11,
1824 ಸಿ> ಟಿ
ಪುರುಷ 2yr 0mo ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು
HGADFN003
003 iPS1D
HGADFN167 iPS 1J LMNA ಎಕ್ಸಾನ್ 11, 1824 C> ಟಿಪುರುಷ 8yr 5moಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು HGADFN167167 PS 1J
HGADFN167 iPS 1Q LMNA ಎಕ್ಸಾನ್ 11, 1824 C> ಟಿಪುರುಷ 8yr 5moಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು HGADFN167167 iPS1Q
HGMDFN090 iPS 1B HGADFN167 ನ ತಾಯಿ (ಬಾಧಿತ)ಸ್ತ್ರೀ 37yr 10moಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು
HGMDFN090
090 iPS1B
HGMDFN090 iPS 1C HGADFN167 ನ ತಾಯಿ (ಬಾಧಿತ)ಸ್ತ್ರೀ 37yr 10moಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು
HGMDFN090
090 iPS1C
HGFDFN168 iPS1 D2HGADFN167 ನ ತಂದೆ (ಬಾಧಿತ)ಪುರುಷ 40yr
5mo
ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು HGFDFN168168 iPS1 D2
HGFDFN168 iPS1PHGADFN167 ನ ತಂದೆ (ಬಾಧಿತ)ಪುರುಷ 40yr
5mo
ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು
HGFDFN168
168 iPS1P

6. ಭವಿಷ್ಯದ ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ನವೀಕರಣಗಳು ಮತ್ತು ಹೊಸ ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ನಮ್ಮ ಇಮೇಲ್ ಪಟ್ಟಿಗೆ ಸೇರಿ

ನಾವು ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ರೇಖೆಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವುದನ್ನು ಮುಂದುವರಿಸುತ್ತಿದ್ದೇವೆ. ಪಿಆರ್ಎಫ್ ಸೆಲ್ ಮತ್ತು ಟಿಶ್ಯೂ ಬ್ಯಾಂಕಿನಲ್ಲಿರುವ ಐಪಿಎಸ್ಸಿಗಳ ಆವರ್ತಕ ನವೀಕರಣಗಳನ್ನು ನೀವು ಬಯಸಿದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಕ್ಲಿಕ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ನಮ್ಮ ಇಮೇಲ್ ಪಟ್ಟಿಗೆ ಸೇರಿಕೊಳ್ಳಿ ಇಲ್ಲಿ

7. ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು?

ಯಾವುದೇ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು ಅಥವಾ ಅಗತ್ಯತೆಗಳೊಂದಿಗೆ ದಯವಿಟ್ಟು ಲೆಸ್ಲಿ ಗಾರ್ಡನ್, ಎಂಡಿ, ಪಿಎಚ್‌ಡಿ, ವೈದ್ಯಕೀಯ ನಿರ್ದೇಶಕರನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ lgordon@progeriaresearch.org ಅಥವಾ 978-535-2594

8. ಐಪಿಎಸ್ ಸೆಲ್ ರೇಖೆಗಳನ್ನು ಆದೇಶಿಸುವುದು

2014 ನಲ್ಲಿ, ಪಿಆರ್ಎಫ್ ನಮ್ಮ ಎಂಟಿಎಗೆ ಯಾವುದೇ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಲ್ಲದ ನೀತಿಯನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿತು. 12 ದೇಶಗಳಲ್ಲಿನ ಸಂಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡುವ 70 ಸಂಶೋಧನಾ ತಂಡಗಳೊಂದಿಗೆ 14 ವರ್ಷಗಳ ಒಪ್ಪಂದದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳ ಫಲಿತಾಂಶ ಇದು. ಪಿಆರ್‌ಎಫ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಸಲಹೆಗಾರರು ಆ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ಉದ್ಭವಿಸಿರುವ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಗಣನೆಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಅದಕ್ಕೆ ತಕ್ಕಂತೆ ಒಪ್ಪಂದವನ್ನು ಸಂಪಾದಿಸಿದ್ದಾರೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ನಾವು ನ್ಯಾಯಯುತ ಮತ್ತು ಸಮಂಜಸವಾದ ಪದಗಳೆಂದು ಭಾವಿಸುತ್ತೇವೆ.

ಯುಎಸ್ ಫೆಡರಲ್ ಸರ್ಕಾರಿ ಸಂಸ್ಥೆಗಳು ಅಥವಾ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳಿಗೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ವೆಂಡಿ ನಾರ್ರಿಸ್ ಅವರನ್ನು ಇಲ್ಲಿ ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ: wnorris@lifespan.org or 401-274-1122 x 48063.

ಹಂತ 1: ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಮತ್ತು ವಸ್ತು ವರ್ಗಾವಣೆ ಒಪ್ಪಂದವನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಿ

ಸರ್ಕಾರೇತರ ಸಂಸ್ಥೆಗಳಿಗೆ ಅರ್ಜಿ ಮತ್ತು ಒಪ್ಪಂದ

ಸರ್ಕಾರೇತರ ಸಂಸ್ಥೆಗಳಿಗೆ ವಸ್ತು ವರ್ಗಾವಣೆ ಒಪ್ಪಂದ

ಹಂತ 2: ಪೂರ್ಣಗೊಂಡ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಮತ್ತು ವಸ್ತು ವರ್ಗಾವಣೆ ಒಪ್ಪಂದವನ್ನು ವೆಂಡಿ ನಾರ್ರಿಸ್‌ಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿಸಿ wnorris@lifespan.org. ಅನುಮೋದನೆ ಪಡೆದ ನಂತರ, ನಿಮ್ಮ ಆದೇಶ ಮತ್ತು ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಹಡಗು ದಿನಾಂಕವನ್ನು ದೃ ming ೀಕರಿಸುವ ಇಮೇಲ್ ಅನ್ನು ನೀವು ಸ್ವೀಕರಿಸುತ್ತೀರಿ. 

ಹಂತ 3: ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್‌ನ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ಪ್ರಸ್ತುತ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಕ್ರಯೋವಿಯಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಲುಗಳನ್ನು ವಿತರಿಸುತ್ತಿದೆ. ಸಾಗಣೆ ಮತ್ತು ಟ್ರ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಮಾಹಿತಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು ರವಾನಿಸಿದಾಗ ಅವರ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ನಿಮಗೆ ಇಮೇಲ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಅನನುಭವಿ ಸಂಶೋಧಕರಿಗೆ ಮಾನವ ಭ್ರೂಣದ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ / ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ಕೆಲಸಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಾದ ವಿಶೇಷ ಕೋರ್ಸ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ತರಬೇತಿ ಪಡೆಯಲು ನಿರ್ದೇಶಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಒಟ್ಟಾವಾ ಹಾಸ್ಪಿಟಲ್ ರಿಸರ್ಚ್ ಇನ್‌ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಹ್ಯೂಮನ್ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಫೆಸಿಲಿಟಿ (ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್ ನಿರ್ದೇಶನ) ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿ ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳಿಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಐಪಿಎಸ್‌ಸಿ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ತಂತ್ರಗಳ ಮೂಲಗಳ ಮೇಲೆ ವರ್ಚುವಲ್ ಒನ್-ಒನ್ ತರಬೇತಿಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳ ಅನುಭವದ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ತರಬೇತಿ ಆಯ್ಕೆಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ವರೂಪವು ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.  ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಾಹಿತಿಗಾಗಿ, ದಯವಿಟ್ಟು ಇಮೇಲ್ ಮಾಡಿ hpscf@ohri.ca.

ಹಂತ 4: ಒಟ್ಟಾವಾ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯವು ಪ್ರತಿ ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ಲೈನ್ ಮತ್ತು ಕೊರಿಯರ್ ವೆಚ್ಚಗಳಿಗೆ ಯಾವುದಾದರೂ ಇದ್ದರೆ ನೇರವಾಗಿ ನಿಮಗೆ ಸರಕುಪಟ್ಟಿ ನೀಡುತ್ತದೆ.

9. ಎಚ್‌ಜಿಪಿಎಸ್ ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣ ಐಪಿಎಸ್ ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಮೀಡಿಯಾ ತಯಾರಿ

IPSC ಮತ್ತು ESC ಗಳಿಗೆ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್ (ಬೆಕ್ಕು# 5825) ನಿಂದ mTeSR ಪ್ಲಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಆಹಾರವನ್ನು ನೀಡಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ. ಸಂಗ್ರಹಣೆಗಾಗಿ ಪೂರೈಕೆದಾರರ ಶಿಫಾರಸುಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ.

10. ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವುದು

ಸೂಚನೆ: ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಒಳಗೊಂಡ ಎಲ್ಲಾ ಹಂತಗಳನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಬೇಗ ಮಾಡಬೇಕು ಮತ್ತು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಶೀತಲವಾಗಿರಬೇಕು.

  1. 4 ಕ್ಕೆ ಕರಗಿದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಬಾಟಲ್°C. ಅದರ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಅದರ ಮೇಲೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಮಾಣಪತ್ರವನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ.
  2. 12mg/mL ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ತಲುಪಲು ಕರಗಿದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್‌ಗೆ ಸಾಕಷ್ಟು ಶೀತ DMEM/F5 ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.
  3. ಪೂರ್ವ ಶೀತಲವಾಗಿರುವ 1mL ಫಾಲ್ಕನ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಹಂತ 2 ರಿಂದ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್‌ನ 15mL ಆಲ್ಕೋಟ್‌ಗಳನ್ನು ಮಾಡಿ.
  4. -20 ನಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ಆಲ್ಕೋಟ್‌ಗಳನ್ನು ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ°C.
  5. ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ಮಾಡಲು, -1 ರಿಂದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ (20mL) ನ ಒಂದು ಆಲ್ಕೋಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ°C ಮತ್ತು 10mL ಕೋಲ್ಡ್ DMEM/F12 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ಕರಗಿಸುವವರೆಗೆ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ (ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ರಚಿಸದೆ, ಮತ್ತು ಯಾವಾಗಲೂ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತಣ್ಣಗಾಗಿಸಿ).
  6. 50mL ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ, ನಂತರ 20mL ಕೋಲ್ಡ್ DMEM/F12 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (1mL ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಆಲ್ಕೋಟ್ ಅನ್ನು 30mL ನ DMEM/F12 ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ), ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.
  7. ಪ್ಲೇಟ್ (1 ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 6mL/ವೆಲ್, 0.5 ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 12mL/ವೆಲ್, 0.25 ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 24mL/ವೆಲ್). ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಅಲುಗಾಡಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪರಿಹಾರವು ಸಂಪೂರ್ಣ ಮೇಲ್ಮೈ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಆವರಿಸಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ. ಉಳಿದಿರುವ ಯಾವುದೇ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಮರು-ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಬೇಡಿ.
  8. ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತಕ್ಷಣವೇ ಬಳಸಿದರೆ, ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆ (ಅಥವಾ 30 ನಿಮಿಷಗಳು 37 ಕ್ಕೆ ಕುಳಿತುಕೊಳ್ಳಿ°ಸಿ), ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಗಮನಿಸಿ. ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಹರಡಿರಬೇಕು ಮತ್ತು "ಗುಂಪಾಗಿ" ಅಲ್ಲ.
  9. ಇನ್ನೊಂದು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತಿದ್ದರೆ, ಪ್ಯಾರಾಫಿಲ್ಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಅಂಚನ್ನು ಸುತ್ತಿ 4 ರಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ°2 ವಾರಗಳವರೆಗೆ ಸಿ.

ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ - ಬಿಡಿ / ಫಿಶರ್, ಬೆಕ್ಕು # ಸಿಬಿ-ಎಕ್ಸ್‌ಎನ್‌ಯುಎಂಎಕ್ಸ್

DMEM / F12 - ಲೈಫ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, ಬೆಕ್ಕು # 11330-057

ಡಾ. ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್- 2022

11. ಥಾವಿಂಗ್ ಇಎಸ್ ಅಥವಾ ಐಪಿಎಸ್ ಕೋಶಗಳು (ಪ್ರತಿ ಕ್ರಯೋ-ವೈಲ್)

  1. 4 ° C ನಿಂದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಒಂದು ಗಂಟೆ ಬೆಚ್ಚಗಾಗಿಸಿ ಅಥವಾ ತಾಜಾ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ (ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸುವುದನ್ನು ನೋಡಿ).
  2. 4mL ಫಾಲ್ಕನ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ 15mL mTeSR ಪ್ಲಸ್ ಅನ್ನು ಬೆಚ್ಚಗಾಗಿಸಿ.
  3. ದ್ರವ ಸಾರಜನಕ ತೊಟ್ಟಿಯಿಂದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 37 ° C ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಸಣ್ಣ ಐಸ್ ತುಂಡು ಮಾತ್ರ ಉಳಿಯುವವರೆಗೆ ಸುತ್ತಿಕೊಳ್ಳಿ. ಸೀಸೆ 1-2 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಕರಗಬೇಕು. ಈ ಹಂತವನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮಾಡಬೇಕು.
  4. ಎಥೆನಾಲ್ ಸೆಲ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮತ್ತು ಫಾಲ್ಕನ್ ಮೀಡಿಯಾ ಟ್ಯೂಬ್ ಮತ್ತು ಹುಡ್ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.
  5. 1 ಮಿಲಿ ಬಳಸಿ ಅಗಲವಾದ ಬಾಯಿಯ ತುದಿ ನಿಧಾನವಾಗಿ 4mL ಪೂರ್ವ-ಬೆಚ್ಚಗಿನ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (ಸೆಲ್ ಅಮಾನತು ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ).
  6. 130 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 5 ಆರ್‌ಸಿಎಫ್‌ನಲ್ಲಿ ಸ್ಪಿನ್ ಮಾಡಿ.
  7. ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ.
  8. 2mL PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಮತ್ತು ಅಗಲವಾದ ಬಾಯಿಯ ತುದಿಯೊಂದಿಗೆ ಕ್ಲಂಪ್ಗಳನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಒಡೆಯಿರಿ. 6 ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಒಂದು ಬಾವಿಗೆ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ವರ್ಗಾಯಿಸಿ 2uL ROCK ಪ್ರತಿರೋಧಕವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (Y27632, 10uM ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆ). ಚೆನ್ನಾಗಿ ಲೇಪಿತವಾದ ಒಂದು ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ಲೇಟ್ ಮಾಡಿ (6 ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ನ).
  9. ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಮವಾಗಿ ವಿತರಿಸಲು ರಾಕ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮತ್ತು ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ (5%O2, 10% CO2) ಬಿತ್ತನೆಯ ನಂತರ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಪ್ಲೇಟ್ ಅಡಚಣೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.

    ಗಮನಿಸಿ: ಕ್ಲಂಪ್‌ಗಳ ಅತಿಯಾದ ಒಡೆಯುವಿಕೆ ಅಥವಾ ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ಪೈಪೆಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುವುದು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯ. ಇದು ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಬೀಜದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳು 100-300 ಕೋಶಗಳ ದೊಡ್ಡ ತುಂಡುಗಳಾಗಿ ಉಳಿಯಬೇಕು. ಸೌಮ್ಯವಾಗಿರುವಾಗ, ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕರಗಿಸಿದ ನಂತರ ಅವು ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕದಲ್ಲಿರುವ ಸಮಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.

  10. 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 2mL PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (6 ಬಾವಿಗೆ 1mL, 12 ಬಾವಿಗೆ 0.5mL ಮತ್ತು 24 ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ XNUMXmL). HESC/iPSC ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಾಗಿ ಕೊಯ್ಲು ಮತ್ತು ಆರೈಕೆಯನ್ನು ನೋಡಿ.

    ಪಿಎಸ್ಸಿ ಮಾಧ್ಯಮ

    ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್ ನಿಂದ mTeSR ಪ್ಲಸ್ (ಬೆಕ್ಕು# 5825). ಸಂಗ್ರಹಣೆಗಾಗಿ ಪೂರೈಕೆದಾರರ ಶಿಫಾರಸುಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ.

    ರಾಕ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ Y27632 ಎಂದರೇನು?

    ROCK ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ Y27632 Rho ಸಂಬಂಧಿತ ಕೈನೇಸ್ p160 ROCK ನ ಆಯ್ದ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದೆ. ROCK ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ Y27632 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಮಾನವ ಭ್ರೂಣದ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ (HESC) ಮತ್ತು ಮಾನವ ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ (iPSC) ವಿಘಟನೆಯ ಪ್ರೇರಿತ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ, ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು HESC ಗಳು ಮತ್ತು hiPSC ಗಳ ಉಪಕೃಷಿ ಮತ್ತು ಕರಗಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆನ್ಸಿಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ರಾಕ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ Y27632 ಕ್ರಯೋಪ್ರೆಸರ್ವೇಶನ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ರಾಕ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ ಆಲ್ಕೋಟ್‌ಗಳು ಬೆಳಕು ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್ ಕರಗುವ ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಿ. ಪೂರೈಕೆದಾರರ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಿದ ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವಿತಾವಧಿಯಲ್ಲಿ ಈ ಆಲ್ಕೋಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

    ಡಾ. ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್- 2022

    12. HESC/ iPSC ಗಾಗಿ ಕೊಯ್ಲು ಮತ್ತು ಆರೈಕೆ

    1. ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಕರಗಿಸಿದ ಮರುದಿನ, ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಅವುಗಳನ್ನು ನೋಡೋಣ. ಸೂಚನೆ: ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಲಗತ್ತಿಸದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸುವುದು ಸಹಜ. ಕೆಲವು ಜೀವಕೋಶಗಳು ಲಗತ್ತಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುವವರೆಗೆ, ಅವುಗಳಿಂದ 3 - 7 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ವಸಾಹತುಗಳು ಉದ್ಭವಿಸಬಹುದು.
    2. ಬಾವಿಗಳಿಂದ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ ತಾಜಾ ಮತ್ತು ಬೆಚ್ಚಗಿನ PSC ಮಾಧ್ಯಮದ 2 mL (6 ಬಾವಿಗೆ 1mL, 12 ಬಾವಿಗೆ 0.5mL ಮತ್ತು 24 ಬಾವಿಗಳ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ XNUMXmL) ಪೈಪೆಟ್ ಮಾಡಿ. ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿ.
    3. ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ 60-70% ಸಂಗಮವಾಗುವವರೆಗೆ ಆಹಾರವನ್ನು ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆ (ಪೂರೈಕೆದಾರರ ಶಿಫಾರಸುಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ).
    4. 2 ನೇ ದಿನದಿಂದ, ಬೆಳೆಯುತ್ತಿರುವ ಯಾವುದೇ ವಿಭಿನ್ನ ಕೋಶಗಳ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಬೇಕು.
    5. ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಲು, ಪಿಕ್ಕಿಂಗ್ ಹುಡ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ ಮತ್ತು ಪೈಪೆಟ್ ತುದಿಯಿಂದ ವಿಭಿನ್ನ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಉಜ್ಜಿಕೊಳ್ಳಿ.
    6. ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ಮೇಲಿನ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಮಾಡಿದಂತೆ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿ.

    (ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟುವಿಕೆ hESC/iPSC ಅಥವಾ ಉತ್ತೀರ್ಣ hESC/iPSC ನೋಡಿ)

    ಗಮನಿಸಿ:

    ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ PSC ಮಾಧ್ಯಮವು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿರಲು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು. ನಾರ್ಮೋಕ್ಸಿಕ್ ವಿರುದ್ಧ ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಿದಾಗ ಕಡಿಮೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಕೊನೆಯದಾಗಿ, ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ ಬಳಸುವಾಗ ಬೀಜದ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಉತ್ತಮ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.

    ನಾರ್ಮೋಕ್ಸಿಕ್: 37°C, 21% O2, 5% CO2

    ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್: 37°C, 5% O2, 10% CO2

    ಡಾ. ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್- 2022

    13. HESC/iPSC ಉತ್ತೀರ್ಣ

    1. 2 ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಲೇಪಿತ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ 6mL PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪಕ್ಕಕ್ಕೆ ಇರಿಸಿ.
    2. ಪ್ಯಾಸೇಜ್ ಮಾಡಲು ತಟ್ಟೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಬಾವಿಯಿಂದ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 1mL PBS(-/-) ನೊಂದಿಗೆ ಒಮ್ಮೆ ತೊಳೆಯಿರಿ.
    3. ಬಾವಿಗೆ 1mL EDTA ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 3-4 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಡಿ. ಕೋಶಗಳು ಬೇರ್ಪಡುವುದನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುವುದರಿಂದ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಸರಿಸಬೇಡಿ.
    4. EDTA ಪರಿಹಾರವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 1mL PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. 4 ನಿಮಿಷಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಸೆಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ EDTA ಅನ್ನು ಬಿಡಬೇಡಿ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಎತ್ತುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
    5. ಸೆಲ್ ಸ್ಕ್ರಾಪರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸ್ಕ್ರ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನಿಮ್ಮ ಪ್ಲೇಟ್‌ನ 6 ಬಾವಿಗಳ ನಡುವೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ವಿಭಜಿಸಿ. ವಸಾಹತು ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಅತಿಯಾಗಿ ಒಡೆಯುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ ಮತ್ತು ಸ್ಕ್ರ್ಯಾಪಿಂಗ್ನೊಂದಿಗೆ ಮೃದುವಾಗಿರಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ. ಕೋಶಗಳನ್ನು ದೊಡ್ಡ ತುಂಡುಗಳಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ. ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ ಕ್ಲಂಪ್‌ಗಳನ್ನು ಒಡೆಯಲು ಅಗಲವಾದ ಬಾಯಿಯ ಪೈಪೆಟ್ ತುದಿಯನ್ನು ಬಳಸಿ. ಜೀವಕೋಶಗಳ ಅತಿಯಾದ ವಿಘಟನೆಯು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವು ಅಥವಾ ಅಂಗೀಕಾರದ ನಂತರ ಅತಿಯಾದ ಸ್ವಾಭಾವಿಕ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು.
    6. 37 ರಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ°ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಯಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಮವಾಗಿ ವಿತರಿಸಿದ ನಂತರ ಸಿ (8 ಫಿಗರ್ ಅಥವಾ ಎಲ್ ಆಕಾರ ಅಲುಗಾಡುವಿಕೆ). ಪ್ಯಾಸೇಜಿಂಗ್ ನಂತರ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಪ್ಲೇಟ್ ಅಡಚಣೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.

    ಸೂಚನೆ: ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸ್ಕ್ರ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಿದ ನಂತರ ನೀವು ಅವುಗಳನ್ನು ಆದಷ್ಟು ಬೇಗ ಹೊಸ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲು ಬಯಸುತ್ತೀರಿ ಏಕೆಂದರೆ ಜೀವಕೋಶಗಳು ತ್ವರಿತವಾಗಿ (5 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ) ಮರುಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ.

    4 ನಿಮಿಷಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಸೆಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ EDTA ಬಿಟ್ಟರೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳು ಬೇರ್ಪಡಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಬಹುದು. ಇದು ಸಂಭವಿಸಿದಲ್ಲಿ, 15mL PSC ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ 4mL ಫಾಲ್ಕನ್‌ನಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ. 130 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 5 ಆರ್‌ಸಿಎಫ್‌ನಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತಿರುಗಿಸಿ. 1mL ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಗುಳಿಗೆಯನ್ನು ಮತ್ತೆ ಜೋಡಿಸಿ ಮತ್ತು 6 ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಲೇಪಿತ ಪ್ಲೇಟ್ (ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 160uL) ನಡುವೆ ಸಮವಾಗಿ ಭಾಗಿಸಿ.

    EDTA ಪರಿಹಾರ: 500mL DPBS (-/-) ಗೆ 0.5M EDTA (pH 8.0) ನ 500uL ಸೇರಿಸಿ. NaCl ನ 0.9g ಸೇರಿಸಿ. ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಗೊಳಿಸಲು ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು 4 ° C ನಲ್ಲಿ 6 ತಿಂಗಳವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.

    ಕಾಗದದಿಂದ:

    ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾದ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವ-ಮುಕ್ತ ವಿಘಟನೆಯಿಂದ ಮಾನವ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್‌ಗಳ ಅಂಗೀಕಾರ ಮತ್ತು ವಸಾಹತು ವಿಸ್ತರಣೆ

    ಜೀನೆಟ್ ಬಿಯರ್ಸ್,1 ಡೇನಿಯಲ್ ಆರ್. ಗುಲ್ಬ್ರಾನ್ಸನ್,2,3 ನಿಕೋಲ್ ಜಾರ್ಜ್,4ಲಾರೆನ್ I. ಸಿನಿಸ್ಕಲ್ಚಿ,1 ಜೆಫ್ರಿ ಜೋನ್ಸ್,4,5 ಜೇಮ್ಸ್ ಎ. ಥಾಮ್ಸನ್,2,3,6 ಮತ್ತು ಗುವಾಕೈ ಚೆನ್1,2

    14. ಘನೀಕರಿಸುವ HESC/iPSC

    1. ಬಯೋ-ಕೂಲ್ (ನಿಯಂತ್ರಿತ ದರ ಫ್ರೀಜರ್) ಅನ್ನು ಆನ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನವನ್ನು -7 ° C ಗೆ ಹೊಂದಿಸಿ.
    2. ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಿಂದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಗಮ ಮತ್ತು ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ಗಮನಿಸಿ.
    3. ಬಾವಿಗಳು 70% ಸಂಗಮವಾಗಿದ್ದರೆ, ಹಳೆಯ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು PBS(-/-) ನೊಂದಿಗೆ ಒಮ್ಮೆ ತೊಳೆಯಿರಿ ನಂತರ ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 1 mL EDTA ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (ಇಡಿಟಿಎ ಪರಿಹಾರದೊಂದಿಗೆ ಹಾದುಹೋಗುವುದನ್ನು ನೋಡಿ).
    4. 3-4 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ.
    5. EDTA ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಆಸ್ಪಿರೇಟ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 1 mL ಕೋಲ್ಡ್ mFreSR ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (cat#05855, ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್).
    6. ಕೋಶಗಳನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮೇಲಕ್ಕೆತ್ತಲು ಸೆಲ್ ಸ್ಕ್ರಾಪರ್ ಬಳಸಿ. ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ದೊಡ್ಡ ತುಂಡುಗಳಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಮೇಲೆ ಮತ್ತು ಕೆಳಕ್ಕೆ ಪೈಪ್ ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
    7. ವಿಶಾಲವಾದ ಬಾಯಿಯ ತುದಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕೋಶಗಳು/mFreSR ಅನ್ನು ಕ್ರೈಯೊಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ. ಹಂತ 8 ಕ್ಕೆ ಸಿದ್ಧವಾಗುವವರೆಗೆ ಬಾಟಲಿಗಳನ್ನು ಐಸ್ ಮೇಲೆ ಇರಿಸಿ.
    8. ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ಬಯೋ-ಕೂಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.
    9. ದ್ರವ ಸಾರಜನಕವನ್ನು ಪಡೆಯಿರಿ.
    10. 10 ನಿಮಿಷಗಳ ನಂತರ, ಒಂದು ಸ್ಪಾಟುಲಾವನ್ನು ದ್ರವರೂಪದ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ಅದ್ದಿ ಮತ್ತು ಸುಮಾರು 10-30 ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಕಾಲ ಕ್ರಯೋ-ವೈಲ್‌ನ ಬದಿಯನ್ನು ಸ್ಪರ್ಶಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅಥವಾ ಕ್ರಯೋ-ವೈಲ್‌ನ ಬದಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಫಟಿಕ ರೂಪವನ್ನು ನೀವು ನೋಡುವವರೆಗೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೀಜ ಮಾಡಿ.
    11. "PROG" ಗುಂಡಿಯನ್ನು ಒತ್ತುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ 1 ಅನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿ ಮತ್ತು ಬಟನ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತೊಮ್ಮೆ ಒತ್ತುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಮೂಲಕ ಹೋಗಿ ಮತ್ತು ನೀವು 0.5 ° C/min ದರವನ್ನು ನೋಡಬೇಕು. , ನಂತರ "RUN" ಒತ್ತಿರಿ.
    12. ತಾಪಮಾನ -65 ° C ತಲುಪಿದ ನಂತರ ಕ್ರಯೋ-ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ವರ್ಗಾಯಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.

    ಪರ್ಯಾಯಗಳು

    ಕ್ರಯೋ-ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ಘನೀಕರಿಸುವ ಧಾರಕದಲ್ಲಿ (ಬಯೋಸಿಶನ್-ಕೂಲ್‌ಸೆಲ್) ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ -80 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸುವುದು ಮತ್ತೊಂದು ಆಯ್ಕೆಯಾಗಿದೆ. ಮರುದಿನ ಕ್ರಯೋ-ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ದ್ರವ ಸಾರಜನಕಕ್ಕೆ (ದ್ರವ ಅಥವಾ ಆವಿ ಹಂತ) ಸರಿಸಿ.

    ಡಾ. ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್‌ಫೋರ್ಡ್- 2022