ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೋಟೆಂಟ್
ಕಾಂಡಕೋಶಗಳು
ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್ ಸೆಲ್ ಮತ್ತು ಟಿಶ್ಯೂ ಬ್ಯಾಂಕ್
ಮಾನವ ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳು (iPSC)
- ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ iPSC ಗಳು ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಲ್ಲದವರಿಗೆ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮಾಹಿತಿ
- ಉದ್ದೇಶ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಉತ್ಪಾದನೆ ಮತ್ತು ವಿತರಣೆ
- ಹಚಿನ್ಸನ್-ಗಿಲ್ಫೋರ್ಡ್ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ ಪ್ರೇರಿತ-ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ಸ್ (iPSC ಗಳು)
- ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ: ಮೌಲ್ಯೀಕರಣ ಮತ್ತು ಗುಣಲಕ್ಷಣ
- iPSC ಗಳನ್ನು ಪಡೆದ ಮೂಲ ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತು
- ಭವಿಷ್ಯದ iPSC ನವೀಕರಣಗಳು ಮತ್ತು ಹೊಸ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ಗಳಿಗಾಗಿ ನಮ್ಮ ಇಮೇಲ್ ಪಟ್ಟಿಗೆ ಸೇರಿ
- ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು? ನಮ್ಮನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ.
- iPSC ಲೈನ್ಗಳನ್ನು ಆರ್ಡರ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತಿದೆ
- HGPS ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣ iPSC ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮ ತಯಾರಿ
- ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವುದು
- ಥಾವಿಂಗ್ HESC ಗಳು ಮತ್ತು iPSC ಕೋಶಗಳು (ಪ್ರತಿ ಕ್ರಯೋ-ವೈಯಲ್)
- HESC/iPSC ಗಾಗಿ ಕೊಯ್ಲು ಮತ್ತು ಆರೈಕೆ
- ಹಾದುಹೋಗುವಿಕೆ hESC/iPSC
- ಘನೀಕರಿಸುವ HESC/iPSC
1. ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಲ್ಲದವರಿಗೆ iPSC ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮಾಹಿತಿ
ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ಗಳು "ಅಪಕ್ವವಾದ" ಕೋಶಗಳಾಗಿವೆ, ಅದು ಯಾವುದೇ ಒಂದು ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರವಾಗಲು ಇನ್ನೂ ಬದ್ಧವಾಗಿಲ್ಲ. ಹೃದಯ ಅಥವಾ ರಕ್ತನಾಳಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಮತ್ತು ಅಂಗಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಕೋಶಗಳಂತಹ ದೇಹದಲ್ಲಿನ ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಪ್ರೌಢ ಕೋಶಗಳಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಹೊಂದುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕಾರಣ ಅವು ಬಗ್ಗುತ್ತವೆ. 2007 ರಲ್ಲಿ, ಸಂಶೋಧಕರು ನಾವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸಂಶೋಧನಾ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬೆಳೆಯುವ ಪ್ರೌಢ ವಯಸ್ಕ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು ರಚಿಸುವ ತಂತ್ರವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದರು.1, 2 . ಈ ಕೃತಕವಾಗಿ ರಚಿಸಲಾದ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳು ("iPSC ಗಳು") ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕ್ಷೇತ್ರಕ್ಕೆ, ಇದು ಒಂದು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಗತಿಯಾಗಿದೆ. ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ, ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಈಗ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾದಲ್ಲಿ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳು ಹೇಗೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಹೊಂದುತ್ತವೆ ಎಂಬುದರ ಕುರಿತು ಪ್ರಶ್ನೆಗಳನ್ನು ಕೇಳಬಹುದು. ಈ ಹಿಂದೆ ಮಾನವ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ ಯಾವುದೇ ಮೂಲವಿರಲಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಇಲ್ಲದ ಜನರ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳು ಹೇಗೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂಬುದರ ಕುರಿತು ಮಾಹಿತಿಯ ಅನೂರ್ಜಿತತೆ ಇತ್ತು. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ ಪ್ರಬುದ್ಧ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಕ್ತನಾಳಗಳು, ಹೃದಯ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಮರು-ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಮಾಡಬಹುದು. ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, ಮಾನವ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಹೃದಯ ಅಥವಾ ರಕ್ತನಾಳದ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಯಾವುದೇ ಮೂಲವಿರಲಿಲ್ಲ. ನಾವು ಈಗ ಕೀಲಿಯನ್ನು ಕೇಳಬಹುದು ಹೃದಯಾಘಾತ ಮತ್ತು ಪಾರ್ಶ್ವವಾಯುಗಳಿಂದ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾದಲ್ಲಿ ಆರಂಭಿಕ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಹೃದ್ರೋಗದ ಬಗ್ಗೆ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು. ನಾವು ಈ ಆವಿಷ್ಕಾರಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿ ಹೃದ್ರೋಗ ಮತ್ತು ವಯಸ್ಸಾದ ಜೊತೆ ಹೋಲಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ನಮ್ಮೆಲ್ಲರಲ್ಲಿ ವಯಸ್ಸಾದ ಮೇಲೆ ಏನು ಪ್ರಭಾವ ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂಬುದರ ಕುರಿತು ಹೆಚ್ಚಿನದನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು. ಈಗಾಗಲೇ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹಲವಾರು ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಅಧ್ಯಯನಗಳನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಲಾಗಿದೆ.3-5 ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್ನಲ್ಲಿ ನಮ್ಮ ಗುರಿಯು ಈ ಅಮೂಲ್ಯವಾದ ಸಾಧನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೆಚ್ಚಿನ ಆವಿಷ್ಕಾರಗಳನ್ನು ಸುಲಭಗೊಳಿಸುವುದು. ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ಗಳ ಮೇಲಿನ ಪ್ರೈಮರ್ಗಾಗಿ, ದಯವಿಟ್ಟು ಈ US ಸರ್ಕಾರದ ವೆಬ್ಸೈಟ್ ನೋಡಿ: https://stemcells.nih.gov/info/basics.htm
-
- ತಕಹಶಿ ಕೆ, ತನಬೆ ಕೆ, ಓಹ್ನುಕಿ ಎಂ, ನರಿಟಾ ಎಂ, ಇಚಿಸಾಕ ಟಿ, ಟೊಮೊಡಾ ಕೆ, ಯಮನಕಾ ಎಸ್. ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾದ ಅಂಶಗಳಿಂದ ವಯಸ್ಕ ಮಾನವ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳಿಂದ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ ಇಂಡಕ್ಷನ್. ಕೋಶ. 2007;131:861-872.
- ಯು ಜೆ, ವೊಡಿಯಾನಿಕ್ ಎಂಎ, ಸ್ಮುಗಾ-ಒಟ್ಟೊ ಕೆ, ಆಂಟೊಸಿವಿಕ್ಜ್-ಬೋರ್ಗೆಟ್ ಜೆ, ಫ್ರೇನ್ ಜೆಎಲ್, ಟಿಯಾನ್ ಎಸ್, ನೀ ಜೆ, ಜೋನ್ಸ್ಡೋಟ್ಟಿರ್ ಜಿಎ, ರುವೊಟ್ಟಿ ವಿ, ಸ್ಟೀವರ್ಟ್ ಆರ್, ಸ್ಲುಕ್ವಿನ್, II, ಥಾಮ್ಸನ್ ಜೆಎ. ಮಾನವನ ದೈಹಿಕ ಕೋಶಗಳಿಂದ ಪಡೆದ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ಗಳು ಪ್ರೇರಿತವಾಗಿವೆ. ವಿಜ್ಞಾನ. 2007;318:1917-1920.
- ಲಿಯು GH, ಬಾರ್ಖೋ BZ, ರೂಯಿಜ್ S, ಡೈಪ್ D, Qu J, ಯಾಂಗ್ SL, Panopoulos AD, ಸುಜುಕಿ K, ಕುರಿಯನ್ L, ವಾಲ್ಷ್ C, ಥಾಂಪ್ಸನ್ J, Boue S, Fung HL, Sancho-Martinez I, ಜಾಂಗ್ K, ಯೇಟ್ಸ್ J, 3 ನೇ, ಇಜ್ಪಿಸುವಾ ಬೆಲ್ಮಾಂಟೆ ಜೆಸಿ. ಹಚಿನ್ಸನ್-ಗಿಲ್ಫೋರ್ಡ್ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ನಿಂದ iPSC ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಕಾಲಿಕ ವಯಸ್ಸಾದ ಪುನರಾವರ್ತನೆ. ಪ್ರಕೃತಿ. 2011;472:221-225.
- Misteli T. HGPS-ಪಡೆದ iPSCಗಳು ವಯಸ್ಸಿನವರಿಗೆ. ಕೋಶ ಕಾಂಡಕೋಶ. 2011;8:4-6.
2. ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ (iPSC) ಉತ್ಪಾದನೆ ಮತ್ತು ವಿತರಣೆಯ ಉದ್ದೇಶ
ಹಚಿನ್ಸನ್-ಗಿಲ್ಫೋರ್ಡ್ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ ಮತ್ತು ಅದರ ವಯಸ್ಸಾದ-ಸಂಬಂಧಿತ ಅಸ್ವಸ್ಥತೆಗಳಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯುವುದು ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ರಿಸರ್ಚ್ ಫೌಂಡೇಶನ್ನ ಉದ್ದೇಶವಾಗಿದೆ. 2009 ರಲ್ಲಿ, PRF ಉತ್ತಮ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ iPSC ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್, ಪಿಎಚ್ಡಿ ನಿರ್ದೇಶನದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಕೆನಡಾದ ಟೊರೊಂಟೊ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳ ಪರಿಣಿತ ತಂಡದೊಂದಿಗೆ ಸಹಯೋಗವನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸಿತು. ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್ ಅವರು ಇಂಟಿಗ್ರೇಟಿವ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಬಯಾಲಜಿಯಲ್ಲಿ ಕೆನಡಾ ಸಂಶೋಧನಾ ಅಧ್ಯಕ್ಷರಾಗಿದ್ದಾರೆ. 2011 ರ ಹೊತ್ತಿಗೆ, PRF ಕೆನಡಾದ ಒಟ್ಟಾವಾ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದಲ್ಲಿ ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್ ಅವರೊಂದಿಗೆ ಸಹಯೋಗವನ್ನು ಮುಂದುವರೆಸಿದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಅವರು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಮತ್ತು ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಮೆಡಿಸಿನ್ ಪ್ರೊಫೆಸರ್, ಮೆಡಿಸಿನ್ ಫ್ಯಾಕಲ್ಟಿ ಮತ್ತು ಒಟ್ಟಾವಾ ಹಾಸ್ಪಿಟಲ್ ರಿಸರ್ಚ್ ಇನ್ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ನ ಸ್ಪ್ರಾಟ್ ಸೆಂಟರ್ ಫಾರ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ರಿಸರ್ಚ್ನಲ್ಲಿ ಹಿರಿಯ ವಿಜ್ಞಾನಿ.
ಪ್ರಪಂಚದಾದ್ಯಂತದ ಸಂಶೋಧಕರಿಗೆ ಈ ಅಮೂಲ್ಯ ಸಾಧನವನ್ನು ಒದಗಿಸುವುದು ನಮ್ಮ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ. ಈ ಹೊಸ ಸಂಶೋಧನಾ ಸಾಧನವನ್ನು ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾದಲ್ಲಿ ಹೊಸ ಮತ್ತು ನವೀನ ಸಂಶೋಧನೆಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಜೊತೆಗೆ ಹೃದ್ರೋಗ ಮತ್ತು ವಯಸ್ಸಾದೊಂದಿಗಿನ ಅದರ ಸಂಬಂಧ.
3. ಹಚಿನ್ಸನ್-ಗಿಲ್ಫೋರ್ಡ್ ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ ಪ್ರೇರಿತ-ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ಸ್ (iPSC ಗಳು)
ಪ್ರಚೋದಿತ-ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ಗಳನ್ನು (iPSC ಗಳು) VSVG-ಸೂಡೋಟೈಪ್ಡ್ ರೆಟ್ರೊವೈರಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಡಕ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಾಲ್ಕು ಮಾನವ ಅಂಶಗಳಾದ ಅಕ್ಟೋಬರ್ 4, Sox2, Klf4 ಮತ್ತು c-Myc ಅನ್ನು ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳಾಗಿ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. iPSC ವಸಾಹತುಗಳನ್ನು ಮೌಸ್-ಎಂಬ್ರಿಯೋನಿಕ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳಲ್ಲಿ (MEFs) ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. ಬಳಸಿದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಆದರೆ EOS ವರದಿಗಾರನ ಬಳಕೆಯಿಲ್ಲದೆ (ನೇಚರ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ಗಳು 4: 1828-1844, 2009).
4. ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ: ಮೌಲ್ಯೀಕರಣ ಮತ್ತು ಗುಣಲಕ್ಷಣ
ಪ್ರಸ್ತುತ ಲಭ್ಯವಿರುವ ಸಾಲುಗಳು ಹಲವಾರು ಮೌಲ್ಯೀಕರಣ ಹಂತಗಳಿಗೆ ಒಳಗಾಗಿವೆ (ಕೆಳಗಿನ ಡೌನ್ಲೋಡ್ ಮಾಡಬಹುದಾದ PDF ಗಳನ್ನು ನೋಡಿ):
-
- ಪ್ರತಿ ಸಾಲಿಗೆ ಮೈಕೋಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಪರೀಕ್ಷೆ: ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್ನ ಲ್ಯಾಬ್ ಪ್ರತಿ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ಗೆ PCR ಮೂಲಕ ಮೈಕೋಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಮಾಡಿದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ವಿಸ್ತರಣೆಯ ನಂತರ ಮತ್ತು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಾಗಿಸುವ ಮೊದಲು, ಮೈಕೋಪ್ಲಾಸ್ಮಾಗಾಗಿ ಸಾಲುಗಳನ್ನು ಮರುಪರೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.
- ಟ್ರಾ-1-60, ಟ್ರಾ-1-81, ಮತ್ತು SSEA4 ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆನ್ಸಿ ಮಾರ್ಕರ್ಗಳಿಗೆ ಇಮ್ಯುನೊಸ್ಟೈನಿಂಗ್.
- ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆನ್ಸಿಯ ಸೂಚಕವಾಗಿ ಕ್ಷಾರೀಯ ಫಾಸ್ಫಟೇಸ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್
- ಮೂರು ಸೂಕ್ಷ್ಮಾಣು-ಪದರಗಳ ಗುರುತುಗಳಿಗೆ ಭ್ರೂಣದ ದೇಹ ರಚನೆ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಇಮ್ಯುನೊಸ್ಟೈನಿಂಗ್. ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ ಗುರುತುಗಳು βIII-ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ (ಎಕ್ಟೋಡರ್ಮ್), ಸ್ಮೂತ್-ಸ್ನಾಯು ಆಕ್ಟಿನ್ (ಮೆಸೋಡರ್ಮ್), ಮತ್ತು ಗಟಾ4 ಅಥವಾ ಎಎಫ್ಪಿ (ಎಂಡೋಡರ್ಮ್)
- ಕ್ಯಾರಿಯೋಟೈಪ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.
- ವಿಭಿನ್ನ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಮಿನ್ A ನ ಮರು-ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ
- ಟೆರಾಟೋಮಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು
ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಮೌಲ್ಯೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿದೆ:
ಪೋಷಕ ಡೇಟಾದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ ಕೆಲವು ಸಾಲುಗಳು ಟೆರಾಟೋಮಾ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಿವೆ. ಎಲ್ಲಾ ಇತರ ಸಾಲುಗಳಿಗೆ, ಟೆರಾಟೋಮಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿವೆ ಮತ್ತು ಈ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು ಪೂರ್ಣಗೊಂಡಂತೆ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ನವೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
5. ಈ iPS ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪಡೆದ ಮೂಲ ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತು
iPSC ಗಳನ್ನು PRF ಸೆಲ್ ಮತ್ತು ಟಿಶ್ಯೂ ಬ್ಯಾಂಕ್ ರೂಪಾಂತರಗೊಳ್ಳದ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ಗಳಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.
ಎಲ್ಲಾ iPS ಲೈನ್ಗಳಿಗೆ ಬಳಸಲಾದ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಡಕ್ಷನ್ ವಿಧಾನವು ರೆಟ್ರೋವೈರಸ್ MKOS ಆಗಿತ್ತು.
iPSC ಲೈನ್ ಐಡಿ | ರೂಪಾಂತರ | ಲಿಂಗ ಮತ್ತು ದಾನ ವಯಸ್ಸು | ಮೂಲ ಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರ ಇಲ್ಲಿ ಕ್ಲಿಕ್ ಮಾಡಿ. | ಪೋಷಕ ಡೇಟಾ |
---|---|---|---|---|
HGADFN003 iPS 1B | LMNAExon 11, 1824 ಸಿ>ಟಿ | ಪುರುಷ 2 ವರ್ಷ 0 ತಿಂಗಳು | ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳು HGADFN003 | 003 iPS1B |
HGADFN003 iPS 1C | LMNA ಎಕ್ಸಾನ್ 11, 1824 ಸಿ>ಟಿ | ಪುರುಷ 2 ವರ್ಷ 0 ತಿಂಗಳು | ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳು HGADFN003 | 003 iPS1C |
HGDFN003 iPS 1D | LMNA ಎಕ್ಸಾನ್ 11, 1824 ಸಿ>ಟಿ | ಪುರುಷ 2 ವರ್ಷ 0 ತಿಂಗಳು | ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳು HGADFN003 | 003 iPS1D |
HGADFN167 iPS 1J | LMNA ಎಕ್ಸಾನ್ 11, 1824 C>T | ಪುರುಷ 8 ವರ್ಷ 5 ತಿಂಗಳು | ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳು HGADFN167 | 167 ಪಿಎಸ್ 1ಜೆ |
HGADFN167 iPS 1Q | LMNA ಎಕ್ಸಾನ್ 11, 1824 C>T | ಪುರುಷ 8 ವರ್ಷ 5 ತಿಂಗಳು | ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳು HGADFN167 | 167 iPS1Q |
HGMDFN090 iPS 1B | HGADFN167 ನ ತಾಯಿ (ಬಾಧಿತವಾಗಿಲ್ಲ) | ಮಹಿಳೆ 37 ವರ್ಷ 10 ತಿಂಗಳು | ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳು HGMDFN090 | 090 iPS1B |
HGMDFN090 iPS 1C | HGADFN167 ನ ತಾಯಿ (ಬಾಧಿತವಾಗಿಲ್ಲ) | ಮಹಿಳೆ 37 ವರ್ಷ 10 ತಿಂಗಳು | ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳು HGMDFN090 | 090 iPS1C |
HGFDFN168 iPS1 D2 | HGADFN167 ನ ತಂದೆ (ಬಾಧಿತವಾಗಿಲ್ಲ) | ಪುರುಷ 40 ವರ್ಷ 5 ತಿಂಗಳು | ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳು HGFDFN168 | 168 iPS1 D2 |
HGFDFN168 iPS1P | HGADFN167 ನ ತಂದೆ (ಬಾಧಿತವಾಗಿಲ್ಲ) | ಪುರುಷ 40 ವರ್ಷ 5 ತಿಂಗಳು | ಡರ್ಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳು HGFDFN168 | 168 iPS1P |
6. ಭವಿಷ್ಯದ iPSC ನವೀಕರಣಗಳು ಮತ್ತು ಹೊಸ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ಗಳಿಗಾಗಿ ನಮ್ಮ ಇಮೇಲ್ ಪಟ್ಟಿಗೆ ಸೇರಿ
ನಾವು iPSC ಲೈನ್ಗಳನ್ನು ರಚಿಸುವುದನ್ನು ಮುಂದುವರಿಸುತ್ತಿದ್ದೇವೆ. PRF ಸೆಲ್ ಮತ್ತು ಟಿಶ್ಯೂ ಬ್ಯಾಂಕ್ನಲ್ಲಿರುವ iPSC ಗಳ ಕುರಿತು ನೀವು ಆವರ್ತಕ ನವೀಕರಣಗಳನ್ನು ಬಯಸಿದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಕ್ಲಿಕ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ನಮ್ಮ ಇಮೇಲ್ ಪಟ್ಟಿಗೆ ಸೇರಿಕೊಳ್ಳಿ ಇಲ್ಲಿ
7. ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು?
ದಯವಿಟ್ಟು ಲೆಸ್ಲಿ ಗಾರ್ಡನ್, MD, PhD, ವೈದ್ಯಕೀಯ ನಿರ್ದೇಶಕರನ್ನು ಯಾವುದೇ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು ಅಥವಾ ಅಗತ್ಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ lgordon@progeriaresearch.org ಅಥವಾ 978-535-2594
8. ಐಪಿಎಸ್ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ಗಳನ್ನು ಆರ್ಡರ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತಿದೆ
2014 ರಲ್ಲಿ, PRF ನಮ್ಮ MTA ಗೆ ಯಾವುದೇ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಲ್ಲದ ನೀತಿಯನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿತು. ಇದು 14 ದೇಶಗಳಲ್ಲಿನ ಸಂಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡುವ 70 ಸಂಶೋಧನಾ ತಂಡಗಳೊಂದಿಗೆ 12 ವರ್ಷಗಳ ಒಪ್ಪಂದದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳ ಫಲಿತಾಂಶವಾಗಿದೆ. PRF ಮತ್ತು ಅದರ ಸಲಹೆಗಾರರು ಆ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ಉದ್ಭವಿಸಿದ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಪರಿಗಣನೆಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡಿದ್ದಾರೆ ಮತ್ತು ಅದಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಒಪ್ಪಂದವನ್ನು ಸಂಪಾದಿಸಿದ್ದಾರೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ನಾವು ನ್ಯಾಯಯುತ ಮತ್ತು ಸಮಂಜಸವಾದ ನಿಯಮಗಳು ಎಂದು ಭಾವಿಸುತ್ತೇವೆ.
US ಫೆಡರಲ್ ಸರ್ಕಾರಿ ಸಂಸ್ಥೆಗಳು ಅಥವಾ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳಿಗಾಗಿ, ದಯವಿಟ್ಟು ವೆಂಡಿ ನಾರ್ರಿಸ್ ಅನ್ನು ಇಲ್ಲಿ ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ: wnorris@brownhealth.org ಅಥವಾ 401
ಹಂತ 1: ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಮತ್ತು ವಸ್ತು ವರ್ಗಾವಣೆ ಒಪ್ಪಂದವನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಿ
ಸರ್ಕಾರೇತರ ಸಂಸ್ಥೆಗಳಿಗೆ ಅರ್ಜಿ ಮತ್ತು ಒಪ್ಪಂದ
ಸರ್ಕಾರೇತರ ಸಂಸ್ಥೆಗಳಿಗೆ ವಸ್ತು ವರ್ಗಾವಣೆ ಒಪ್ಪಂದ
ಹಂತ 2: ಪೂರ್ಣಗೊಂಡ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಮತ್ತು ವಸ್ತು ವರ್ಗಾವಣೆ ಒಪ್ಪಂದವನ್ನು ವೆಂಡಿ ನಾರ್ರಿಸ್ಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿಸಿ wnorris@brownhealth.org. ಒಮ್ಮೆ ಅನುಮೋದಿಸಿದ ನಂತರ, ನಿಮ್ಮ ಆದೇಶ ಮತ್ತು ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಶಿಪ್ಪಿಂಗ್ ದಿನಾಂಕವನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸುವ ಇಮೇಲ್ ಅನ್ನು ನೀವು ಸ್ವೀಕರಿಸುತ್ತೀರಿ.
ಹಂತ 3: ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್ನ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ಪ್ರಸ್ತುತ ಘನೀಕೃತ ಕ್ರಯೋವಿಯಲ್ಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಲುಗಳನ್ನು ವಿತರಿಸುತ್ತಿದೆ. ಶಿಪ್ಪಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಟ್ರ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಮಾಹಿತಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು ರವಾನಿಸಿದಾಗ ಅವರ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ನಿಮಗೆ ಇಮೇಲ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಅನನುಭವಿ ಸಂಶೋಧಕರು ಮಾನವನ ಭ್ರೂಣದ ಕಾಂಡಕೋಶ/iPSC ಗಳ ಕೆಲಸಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಾದ ವಿಶೇಷ ಕೋರ್ಸ್ಗಳಲ್ಲಿ ತರಬೇತಿಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು ನಿರ್ದೇಶಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಒಟ್ಟಾವಾ ಹಾಸ್ಪಿಟಲ್ ರಿಸರ್ಚ್ ಇನ್ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ನಲ್ಲಿರುವ ಹ್ಯೂಮನ್ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಫೆಸಿಲಿಟಿ (ಡಾ. ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್ ನಿರ್ದೇಶನ) ಪ್ರೊಜೆರಿಯಾ ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ಗಳಿಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಐಪಿಎಸ್ಸಿ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ತಂತ್ರಗಳ ಮೂಲಗಳ ಮೇಲೆ ವರ್ಚುವಲ್ ಒನ್-ಒನ್ ತರಬೇತಿಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳ ಅನುಭವದ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ತರಬೇತಿ ಆಯ್ಕೆಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ವರೂಪವು ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಾಹಿತಿಗಾಗಿ, ದಯವಿಟ್ಟು ಇಮೇಲ್ ಮಾಡಿ hpscf@ohri.ca.
ಹಂತ 4: ಒಟ್ಟಾವಾ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾನಿಲಯವು ಪ್ರತಿ iPSC ಲೈನ್ ಜೊತೆಗೆ ಕೊರಿಯರ್ ವೆಚ್ಚಗಳು ಯಾವುದಾದರೂ ಇದ್ದರೆ ನೇರವಾಗಿ ನಿಮಗೆ ಇನ್ವಾಯ್ಸ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
9. HGPS ಮತ್ತು ಕಂಟ್ರೋಲ್ iPS ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಮೀಡಿಯಾ ತಯಾರಿ
iPSC ಮತ್ತು ESC ಗಳನ್ನು ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್ (cat# 5825) ನಿಂದ mTeSR ಪ್ಲಸ್ನೊಂದಿಗೆ ನೀಡಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ. ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ ದಯವಿಟ್ಟು ಪೂರೈಕೆದಾರರ ಶಿಫಾರಸುಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ.
10. ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವುದು
ಗಮನಿಸಿ: ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಎಲ್ಲಾ ಹಂತಗಳನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಬೇಗ ಮಾಡಬೇಕು ಮತ್ತು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ತಂಪಾಗಿರಬೇಕು.
- 4 ಕ್ಕೆ ಕರಗಿದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಬಾಟಲ್°C. ಅದರ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಅದರ ಮೇಲೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಮಾಣಪತ್ರವನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ.
- 5mg/mL ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ತಲುಪಲು ಕರಗಿದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ಗೆ ಸಾಕಷ್ಟು ಶೀತ DMEM/F12 ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.
- ಪೂರ್ವ ಶೀತಲವಾಗಿರುವ 15mL ಫಾಲ್ಕನ್ ಟ್ಯೂಬ್ಗಳಲ್ಲಿ ಹಂತ 2 ರಿಂದ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ನ 1mL ಆಲ್ಕೋಟ್ಗಳನ್ನು ಮಾಡಿ.
- -20 ನಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ಆಲ್ಕೋಟ್ಗಳನ್ನು ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ°ಸಿ.
- ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ಗಳನ್ನು ಮಾಡಲು, -20 ರಿಂದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ (1mL) ನ ಒಂದು ಆಲ್ಕೋಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ°C ಮತ್ತು 10mL ಕೋಲ್ಡ್ DMEM/F12 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ಕರಗಿಸುವವರೆಗೆ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ (ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ರಚಿಸದೆ, ಮತ್ತು ಯಾವಾಗಲೂ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತಣ್ಣಗಾಗಿಸಿ).
- 50mL ಟ್ಯೂಬ್ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ, ನಂತರ 20mL ಕೋಲ್ಡ್ DMEM/F12 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (1mL ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಆಲ್ಕೋಟ್ ಅನ್ನು 30mL ನ DMEM/F12 ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ), ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.
- ಪ್ಲೇಟ್ (6 ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ಗೆ 1mL/ವೆಲ್, 12 ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ಗೆ 0.5mL/ವೆಲ್, 24 ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ಗೆ 0.25mL/ವೆಲ್). ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಅಲುಗಾಡಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪರಿಹಾರವು ಸಂಪೂರ್ಣ ಮೇಲ್ಮೈ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಆವರಿಸಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ. ಉಳಿದಿರುವ ಯಾವುದೇ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಮರು-ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಬೇಡಿ.
- ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತಕ್ಷಣವೇ ಬಳಸುತ್ತಿದ್ದರೆ, ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆ (ಅಥವಾ 30 ನಿಮಿಷಗಳು 37 ಕ್ಕೆ ಕುಳಿತುಕೊಳ್ಳಿ°ಸಿ), ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಗಮನಿಸಿ. ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಹರಡಿರಬೇಕು ಮತ್ತು "ಗುಂಪಾಗಿ" ಅಲ್ಲ.
- ಇನ್ನೊಂದು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ಲೇಟ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತಿದ್ದರೆ, ಪ್ಯಾರಾಫಿಲ್ಮ್ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲೇಟ್ನ ಅಂಚನ್ನು ಸುತ್ತಿ 4 ರಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ°2 ವಾರಗಳವರೆಗೆ ಸಿ.
ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ - ಬಿಡಿ/ಫಿಶರ್, cat#CB-40230
DMEM/F12 – ಲೈಫ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, cat#11330-057
ಡಾ. ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್-2022
11. ಕರಗಿಸುವ ES ಅಥವಾ iPS ಕೋಶಗಳು (ಪ್ರತಿ ಕ್ರಯೋ-ವಿಯಲ್)
- 4 ° C ನಿಂದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಒಂದು ಗಂಟೆ ಬೆಚ್ಚಗಾಗಿಸಿ ಅಥವಾ ತಾಜಾ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ (ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸುವುದನ್ನು ನೋಡಿ).
- 15mL ಫಾಲ್ಕನ್ ಟ್ಯೂಬ್ನಲ್ಲಿ 4mL mTeSR ಪ್ಲಸ್ ಅನ್ನು ಬೆಚ್ಚಗಾಗಿಸಿ.
- ದ್ರವ ಸಾರಜನಕ ತೊಟ್ಟಿಯಿಂದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 37 ° C ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಸಣ್ಣ ಐಸ್ ತುಂಡು ಮಾತ್ರ ಉಳಿಯುವವರೆಗೆ ಸುತ್ತಿಕೊಳ್ಳಿ. ಸೀಸೆ 1-2 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಕರಗಬೇಕು. ಈ ಹಂತವನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮಾಡಬೇಕು.
- ಎಥೆನಾಲ್ ಸೆಲ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮತ್ತು ಫಾಲ್ಕನ್ ಮೀಡಿಯಾ ಟ್ಯೂಬ್ ಮತ್ತು ಹುಡ್ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.
- 1 ಮಿಲಿ ಬಳಸಿ ನಿಧಾನವಾಗಿ ಅಗಲವಾದ ಬಾಯಿಯ ತುದಿ 4mL ಪೂರ್ವ-ಬೆಚ್ಚಗಿನ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (ಸೆಲ್ ಅಮಾನತು ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ).
- 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 130 ಆರ್ಸಿಎಫ್ನಲ್ಲಿ ಸ್ಪಿನ್ ಮಾಡಿ.
- ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ.
- 2mL PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಮತ್ತು ಅಗಲವಾದ ಬಾಯಿಯ ತುದಿಯೊಂದಿಗೆ ಕ್ಲಂಪ್ಗಳನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಒಡೆಯಿರಿ. 6 ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್ನ ಒಂದು ಬಾವಿಗೆ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ವರ್ಗಾಯಿಸಿ 2uL ROCK ಪ್ರತಿರೋಧಕವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (Y27632, 10uM ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆ). ಚೆನ್ನಾಗಿ ಲೇಪಿತವಾದ ಒಂದು ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ಗೆ ಪ್ಲೇಟ್ ಮಾಡಿ (6 ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್ನ).
- ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಮವಾಗಿ ವಿತರಿಸಲು ರಾಕ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮತ್ತು ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ (5%O2, 10% CO2) ಬಿತ್ತನೆಯ ನಂತರ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಪ್ಲೇಟ್ ಅಡಚಣೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಸೂಚನೆ: ಕ್ಲಂಪ್ಗಳ ಅತಿಯಾದ ಒಡೆಯುವಿಕೆ ಅಥವಾ ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ಪೈಪೆಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುವುದು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯ. ಇದು ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಬೀಜದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳು 100-300 ಕೋಶಗಳ ದೊಡ್ಡ ತುಂಡುಗಳಾಗಿ ಉಳಿಯಬೇಕು. ಸೌಮ್ಯವಾಗಿರುವಾಗ, ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕರಗಿಸಿದ ನಂತರ ಅವು ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕದಲ್ಲಿರುವ ಸಮಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.
- 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 2mL PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (6 ಬಾವಿಗೆ 1mL, 12 ಬಾವಿಗೆ 1mL ಮತ್ತು 24 ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್ಗೆ 0.5mL). HESC/iPSC ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ಗಾಗಿ ಕೊಯ್ಲು ಮತ್ತು ಆರೈಕೆಯನ್ನು ನೋಡಿ.
PSC ಮಾಧ್ಯಮ
ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್ (cat# 5825) ನಿಂದ mTeSR ಪ್ಲಸ್. ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ ದಯವಿಟ್ಟು ಪೂರೈಕೆದಾರರ ಶಿಫಾರಸುಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ.
ROCK ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ Y27632 ಎಂದರೇನು?
ROCK ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ Y27632 Rho ಸಂಬಂಧಿತ ಕೈನೇಸ್ p160 ROCK ನ ಆಯ್ದ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದೆ. ROCK ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ Y27632 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಮಾನವ ಭ್ರೂಣದ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ (HESC) ಮತ್ತು ಮಾನವ ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ (iPSC) ವಿಘಟನೆ-ಪ್ರೇರಿತ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ, ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು HESCಗಳು ಮತ್ತು hiPSC ಗಳ ಉಪಕೃಷಿ ಮತ್ತು ಕರಗಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆನ್ಸಿಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ರಾಕ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ Y27632 ಕ್ರಯೋಪ್ರೆಸರ್ವೇಶನ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ರಾಕ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ ಆಲ್ಕೋಟ್ಗಳು ಬೆಳಕು ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್ ಕರಗುವ ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಿ. ಪೂರೈಕೆದಾರರ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಿದ ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವಿತಾವಧಿಯಲ್ಲಿ ಈ ಆಲ್ಕೋಟ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.
ಡಾ. ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್-2022
12. HESC/ iPSC ಗಾಗಿ ಕೊಯ್ಲು ಮತ್ತು ಆರೈಕೆ
- ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಕರಗಿಸಿದ ಮರುದಿನ, ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಅವುಗಳನ್ನು ನೋಡೋಣ. ಸೂಚನೆ: ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಲಗತ್ತಿಸದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸುವುದು ಸಹಜ. ಕೆಲವು ಜೀವಕೋಶಗಳು ಲಗತ್ತಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುವವರೆಗೆ, ಅವುಗಳಿಂದ 3 - 7 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ವಸಾಹತುಗಳು ಉದ್ಭವಿಸಬಹುದು.
- ಬಾವಿಗಳಿಂದ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ ತಾಜಾ ಮತ್ತು ಬೆಚ್ಚಗಿನ PSC ಮಾಧ್ಯಮದ 2 mL (6 ಬಾವಿಗೆ, 1mL 12 ಬಾವಿ ಮತ್ತು 0.5mL 24 ಬಾವಿಗಳಿಗೆ 0.5mL) ಪೈಪ್ಟ್ ಮಾಡಿ. ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿ.
- 60-70% ಸಂಗಮವಾಗುವವರೆಗೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆ (ಪೂರೈಕೆದಾರರ ಶಿಫಾರಸುಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ).
- 2 ನೇ ದಿನದಂದು, ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಬೆಳೆಯುತ್ತಿರುವ ಯಾವುದೇ ವಿಭಿನ್ನ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಬೇಕು.
- ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಲು, ಪಿಕ್ಕಿಂಗ್ ಹುಡ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ ಮತ್ತು ಪೈಪೆಟ್ ತುದಿಯಿಂದ ವಿಭಿನ್ನ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಉಜ್ಜಿಕೊಳ್ಳಿ.
- ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ಮೇಲಿನ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಮಾಡಿದಂತೆ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿ.
(ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟುವಿಕೆ hESC/iPSC ಅಥವಾ ಉತ್ತೀರ್ಣ hESC/iPSC ನೋಡಿ)
ಸೂಚನೆ:
ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ PSC ಮಾಧ್ಯಮವು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿರಲು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು. ನಾರ್ಮೋಕ್ಸಿಕ್ ವಿರುದ್ಧ ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಿದಾಗ ಕಡಿಮೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಕೊನೆಯದಾಗಿ, ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ ಬಳಸುವಾಗ ಬೀಜದ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಉತ್ತಮ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.
ನಾರ್ಮೋಕ್ಸಿಕ್: 37°C, 21% O2, 5% CO2
ಹೈಪೋಕ್ಸಿಕ್: 37°C, 5%O2, 10% CO2
ಡಾ. ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್-2022
13. HESC/iPSC ಉತ್ತೀರ್ಣ
- 6 ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಲೇಪಿತ ಪ್ಲೇಟ್ಗೆ 2mL PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪಕ್ಕಕ್ಕೆ ಇರಿಸಿ.
- ಪ್ಯಾಸೇಜ್ ಮಾಡಲು ತಟ್ಟೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಬಾವಿಯಿಂದ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 1mL PBS(-/-) ನೊಂದಿಗೆ ಒಮ್ಮೆ ತೊಳೆಯಿರಿ.
- ಬಾವಿಗೆ 1mL EDTA ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 3-4 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಡಿ. ಕೋಶಗಳು ಬೇರ್ಪಡುವುದನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುವುದರಿಂದ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಸರಿಸಬೇಡಿ.
- EDTA ಪರಿಹಾರವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 1mL PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. 4 ನಿಮಿಷಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಸೆಲ್ಗಳ ಮೇಲೆ EDTA ಅನ್ನು ಬಿಡಬೇಡಿ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಎತ್ತುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
- ಸೆಲ್ ಸ್ಕ್ರಾಪರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸ್ಕ್ರ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು PSC ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನಿಮ್ಮ ಪ್ಲೇಟ್ನ 6 ಬಾವಿಗಳ ನಡುವೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ವಿಭಜಿಸಿ. ವಸಾಹತು ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಅತಿಯಾಗಿ ಒಡೆಯುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ ಮತ್ತು ಸ್ಕ್ರ್ಯಾಪಿಂಗ್ನೊಂದಿಗೆ ಮೃದುವಾಗಿರಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ. ಕೋಶಗಳನ್ನು ದೊಡ್ಡ ತುಂಡುಗಳಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ. ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ ಕ್ಲಂಪ್ಗಳನ್ನು ಒಡೆಯಲು ಅಗಲವಾದ ಬಾಯಿಯ ಪೈಪೆಟ್ ತುದಿಯನ್ನು ಬಳಸಿ. ಜೀವಕೋಶಗಳ ಅತಿಯಾದ ವಿಘಟನೆಯು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವು ಅಥವಾ ಅಂಗೀಕಾರದ ನಂತರ ಅತಿಯಾದ ಸ್ವಾಭಾವಿಕ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು.
- 37 ರಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ°ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಯಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಮವಾಗಿ ವಿತರಿಸಿದ ನಂತರ ಸಿ (8 ಫಿಗರ್ ಅಥವಾ ಎಲ್ ಆಕಾರ ಅಲುಗಾಡುವಿಕೆ). ಪ್ಯಾಸೇಜಿಂಗ್ ನಂತರ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಪ್ಲೇಟ್ ಅಡಚಣೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಗಮನಿಸಿ: ಒಮ್ಮೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸ್ಕ್ರ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಿದ ನಂತರ ನೀವು ಅವುಗಳನ್ನು ಆದಷ್ಟು ಬೇಗ ಹೊಸ ಪ್ಲೇಟ್ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲು ಬಯಸುತ್ತೀರಿ ಏಕೆಂದರೆ ಜೀವಕೋಶಗಳು ತ್ವರಿತವಾಗಿ (5 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ) ಮರುಜೋಡಿಸುತ್ತವೆ.
4 ನಿಮಿಷಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಸೆಲ್ಗಳ ಮೇಲೆ EDTA ಬಿಟ್ಟರೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳು ಬೇರ್ಪಡಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಬಹುದು. ಇದು ಸಂಭವಿಸಿದಲ್ಲಿ, 4mL PSC ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ 15mL ಫಾಲ್ಕನ್ನಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ. 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 130 ಆರ್ಸಿಎಫ್ನಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತಿರುಗಿಸಿ. 1mL ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಗುಳಿಗೆಯನ್ನು ಮತ್ತೆ ಜೋಡಿಸಿ ಮತ್ತು 6 ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಲೇಪಿತ ಪ್ಲೇಟ್ (ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 160uL) ನಡುವೆ ಸಮವಾಗಿ ಭಾಗಿಸಿ.
EDTA ಪರಿಹಾರ: 500mL DPBS (-/-) ಗೆ 0.5M EDTA (pH 8.0) ನ 500uL ಸೇರಿಸಿ. NaCl ನ 0.9g ಸೇರಿಸಿ. ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಗೊಳಿಸಲು ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು 4 ° C ನಲ್ಲಿ 6 ತಿಂಗಳವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.
ಕಾಗದದಿಂದ:
ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವ-ಮುಕ್ತ ವಿಘಟನೆಯಿಂದ ಮಾನವ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ ಸಾಗಣೆ ಮತ್ತು ವಸಾಹತು ವಿಸ್ತರಣೆ
ಜೀನೆಟ್ ಬೀರ್ಸ್,1 ಡೇನಿಯಲ್ ಆರ್. ಗುಲ್ಬ್ರಾನ್ಸನ್,2,3 ನಿಕೋಲ್ ಜಾರ್ಜ್,4ಲಾರೆನ್ I. ಸಿನಿಸ್ಕಾಲ್ಚಿ,1 ಜೆಫ್ರಿ ಜೋನ್ಸ್,4,5 ಜೇಮ್ಸ್ A. ಥಾಮ್ಸನ್,2,3,6 ಮತ್ತು ಗುವೊಕೈ ಚೆನ್1,2
14. ಘನೀಕರಿಸುವ HESC/iPSC
- ಬಯೋ-ಕೂಲ್ (ನಿಯಂತ್ರಿತ ದರ ಫ್ರೀಜರ್) ಅನ್ನು ಆನ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನವನ್ನು -7 ° C ಗೆ ಹೊಂದಿಸಿ.
- ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ನಿಂದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಗಮ ಮತ್ತು ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ಗಮನಿಸಿ.
- ಬಾವಿಗಳು 70% ಸಂಗಮವಾಗಿದ್ದರೆ, ಹಳೆಯ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು PBS(-/-) ನೊಂದಿಗೆ ಒಮ್ಮೆ ತೊಳೆಯಿರಿ ನಂತರ ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 1 mL EDTA ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (EDTA ಪರಿಹಾರದೊಂದಿಗೆ ಹಾದುಹೋಗುವುದನ್ನು ನೋಡಿ).
- ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 3-4 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.
- EDTA ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಆಸ್ಪಿರೇಟ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 1 mL ಕೋಲ್ಡ್ mFreSR ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (cat#05855, ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್).
- ಕೋಶಗಳನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮೇಲಕ್ಕೆತ್ತಲು ಸೆಲ್ ಸ್ಕ್ರಾಪರ್ ಬಳಸಿ. ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ದೊಡ್ಡ ತುಂಡುಗಳಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಮೇಲೆ ಮತ್ತು ಕೆಳಕ್ಕೆ ಪೈಪ್ ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
- ವಿಶಾಲವಾದ ಬಾಯಿಯ ತುದಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕೋಶಗಳು/mFreSR ಅನ್ನು ಕ್ರೈಯೊಟ್ಯೂಬ್ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ. ಹಂತ 8 ಕ್ಕೆ ಸಿದ್ಧವಾಗುವವರೆಗೆ ಬಾಟಲಿಗಳನ್ನು ಐಸ್ ಮೇಲೆ ಇರಿಸಿ.
- ಟ್ಯೂಬ್ಗಳನ್ನು ಬಯೋ-ಕೂಲ್ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.
- ದ್ರವ ಸಾರಜನಕವನ್ನು ಪಡೆಯಿರಿ.
- 10 ನಿಮಿಷಗಳ ನಂತರ, ಒಂದು ಸ್ಪಾಟುಲಾವನ್ನು ದ್ರವರೂಪದ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ಅದ್ದಿ ಮತ್ತು ಸುಮಾರು 10-30 ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಕಾಲ ಕ್ರಯೋ-ವೈಲ್ನ ಬದಿಯನ್ನು ಸ್ಪರ್ಶಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅಥವಾ ಕ್ರಯೋ-ವೈಲ್ನ ಬದಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಫಟಿಕ ರೂಪವನ್ನು ನೀವು ನೋಡುವವರೆಗೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೀಜ ಮಾಡಿ.
- "PROG" ಬಟನ್ ಅನ್ನು ಒತ್ತುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ 1 ಅನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿ ಮತ್ತು ಬಟನ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತೊಮ್ಮೆ ಒತ್ತುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಮೂಲಕ ಹೋಗಿ ಮತ್ತು ನೀವು 0.5 ° C/min ದರವನ್ನು ನೋಡಬೇಕು. , ನಂತರ "RUN" ಒತ್ತಿರಿ.
- ತಾಪಮಾನ -65 ° C ತಲುಪಿದ ನಂತರ ಕ್ರಯೋ-ಟ್ಯೂಬ್ಗಳನ್ನು ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ವರ್ಗಾಯಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.
ಪರ್ಯಾಯಗಳು
ಕ್ರಯೋ-ಟ್ಯೂಬ್ಗಳನ್ನು ಘನೀಕರಿಸುವ ಧಾರಕದಲ್ಲಿ (ಬಯೋಸಿಶನ್-ಕೂಲ್ಸೆಲ್) ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ -80 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸುವುದು ಮತ್ತೊಂದು ಆಯ್ಕೆಯಾಗಿದೆ. ಮರುದಿನ ಕ್ರಯೋ-ಟ್ಯೂಬ್ಗಳನ್ನು ದ್ರವ ಸಾರಜನಕಕ್ಕೆ (ದ್ರವ ಅಥವಾ ಆವಿ ಹಂತ) ಸರಿಸಿ.
ಡಾ. ವಿಲಿಯಂ ಸ್ಟ್ಯಾನ್ಫೋರ್ಡ್-2022