انتخاب Page

هڅول شوی Pluripotent

د تنې حجرې

 

د پروجیریا څیړنیز بنسټ سیل او نسج بانک د انسان هڅول شوي Pluripotent ډډ حجرې (iPSC)

  1. پروجیریا iPSCs د غیر ساینس پوه لپاره د شالید معلومات 
  2. د د پروجیریا ریسرچ فاؤنڈیشن لخوا هڅول شوی Pluripotent سټیم سیل تولید او توزیع  
  3. د هچینسن - ګیلفورډ پروجیریا سنډروم هڅول شوي پلوریپوتینټ سټیم حجرو (آی پي ایس سي) تولید 
  4. د کیفیت کنټرول: اعتبار او ځانګړتیا 
  5. اصلي پیل کولو توکی له کوم ځای څخه چې آی پي ایس سي ترلاسه شوي
  6. د راتلونکي iPSC تازه او نوي سیل لینونو لپاره زموږ د بریښنالیک لیست کې ګډون وکړئ  
  7. پوښتنې؟ موږ سره اړیکه ونیسئ.
  8. د آی پي ایس سي لاینونو تنظیم کول 
  9. د HGPS او کنټرول iPSC کلتور میډیا چمتو کول 
  10. د میتریجیل پلیټونو چمتو کول 
  11. د HESCs او iPSCs حجرو تودوخه کول (په هر کریو ویال کې)
  12. د HESC / iPSC لپاره د حاصلاتو راټولول او ساتنه 
  13. تېرېدل hESC/iPSC 
  14. د hESC/iPSC کنګل کول

1. د غیر ساینس پوه لپاره د iPSC شالید معلومات

د تنې حجرې یې "ناپاکه" حجرې دي چې تر اوسه پورې د هیڅ یوه حجرو ډول کیدو ته ژمن ندي. دوی د نرموالي وړ دي ځکه چې دوی د دې وړتیا لري چې په بدن کې ډیری مختلف ډوله بالغ حجرو ته وده ورکړي ، لکه حجرې چې د زړه یا وینې رګونو جوړوي ، او نور نسجونه او غړي لري. په 2007 کې ، څیړونکو په لوی لابراتوار کې د بالغ بالغ حجرو بیا خپرولو سره د سټیم حجرو رامینځته کولو لپاره یوه ستراتیژي کشف کړه چې موږ یې د څیړنې موخو لپاره معمولا وده کوو.1، 2 . دا مصنوعي جوړ شوي ډډ حجرې د انډوزډ Pluripotent سټیم حجرو ("iPSCs") په نوم یادیږي. د پروجیریا ساحې لپاره ، دا یو لوی پرمختګ دی. د لومړي ځل لپاره ، ساینس پوهان کولی شي اوس د پروجیریا سټیم حجرې رامینځته کړي او په پروګریا کې د سټیم حجرو فعالیت او وده کولو په اړه پوښتنې وکړي. مخکې د انسان پروجیریا سټیم حجرو کومه سرچینه نه درلوده ، او له همدې امله د پروجیریا سټیم حجرو فعالیت کولو څرنګوالي په اړه هیڅ ډول معلومات شتون نلري د پروجیریا پرته خلکو سټ حجرو سره پرتله کول. سربیره پردې ، ساینس پوهان کولی شي د لومړي ځل لپاره ، د پروجیریا د وینې رګونو ، د زړه حجرې ، او د حجرو نور ډولونه رامینځته کولو لپاره د پروجیریا سټیم حجرو بیا برنامه کړي. تر دې دمه ، د انساني پروجیریا زړه یا د وینې رګونو حجرو کومه سرچینه نه وه.  موږ کولی شو اوس کلید وغواړو د زړه ناروغۍ په اړه پوښتنې چې په پروجیریا کې د زړه له ضربې او ضربې څخه د مړینې لامل کیږي. موږ دا کشفونه د زړه ناروغۍ او په عمومي نفوس کې عمر سره پرتله کولی شو او پدې اړه نور څه موندلو چې په ټول عمر کې د عمر تاثیر کولو باندې څه اغیزه کوي. دمخه د پروجیریا سټیم حجرو په کارولو سره ډیری عالي مطالعات خپاره شوي.3-5  د پروجیریا ریسرچ فاؤنڈیشن کې زموږ هدف د دې ارزښت لرونکي وسیلې په کارولو سره ډیری ډیرو موندنو اسانه کول دي. د سټیم حجرو د لومړي برخې لپاره ، مهرباني وکړئ د متحده ایالاتو حکومت ویب پا websiteه وګورئ: https://stemcells.nih.gov/info/basics.htm

 

    1. تاکاهاشي K ، تنابي K ، اوهنوکي M ، نریټا M ، Ichisaka T ، Tomoda K ، Yamanaka S. د ټاکل شوي فاکتورونو لخوا د بالغ انسان fibroblasts څخه pluripotent سټیم حجرو کې شاملول. حج. 2007؛ 131: 861-872.
    2. یو ج ، وودیانیک MA ، سمګا اوټو K ، انټوسیوزیکز - بورجټ J ، فرانسي JL ، تیان ایس ، نی J ، جونسډوتیر GA ، روټي V ، سټوارټ آر ، سلواکین ، II ، تامسن JA. د هڅوونکي pluripotent سټم حجری لیکې د انسان somat حجرو څخه اخیستل شوي. ساینس. 2007؛ 318: 1917-1920.
    3. لیو GH ، بارخونو BZ ، رویز ایس ، ډیپ ډي ، کو J J ، یانګ SL ، پانپوولوس AD ، سوزوکي K ، کورین L ، والش C ، تامپسن J ، بوئ ایس ، فنګ ایچ ایل ، سانچو - مارتینز I ، جانګ K ، یاټس J ، 3rd ، Izpisua Belmonte JC. د هچسنسن - ګیلفورډ پروجیریا سنډروم څخه د آی پي ایس سي سره د وخت دمخه عمر ضایع کول. فطرت. 2011؛ 472: 221-225.
    4. د عمر لپاره د Misteli T. HGPS څخه اخیستل شوي iPSCs. د حجرو ډډ سیل. 2011؛ 8: 4-6.

2. د پروجیریا ریسرچ فاؤنڈیشن لخوا د هڅول شوي pluripotent سټیم حجرو (iPSC) نسل او توزیع هدف

د پروجیریا څیړنیز بنسټ دنده د هچینسن - ګیلفورډ پروجیریا سنډروم او د دې عمر لرونکي اختلالاتو درملنې او درملنې موندل دي. په 2009 کې ، PRF د کاناډا ټورنټو پوهنتون کې د ساینس پوهانو د متخصص ټیم سره همکارۍ ته د ولیم سټینفورډ ، پی ایچ ډی تر لارښوونې لاندې د لوړ کیفیت پروجیریا آی.پی.سی.س جوړولو ته ننوتل. ډاکټر سټینفورډ د مدغم سټم سیل بیولوژي کې د کاناډا ریسرچ رییس دی. د 2011 په توګه ، PRF د کاناډا په اوټاوا پوهنتون کې د ډاکټر سټینفورډ سره همکارۍ ته دوام ورکوي چیرې چې هغه د سیلولر او مالیکولر طب پروفیسور دی ، د طب پوهنځی ، او د اوټاوا روغتون ریسرچ انسټیټیوټ د سټیم حجرو تحقیق لپاره سپروټ مرکز کې پوهاند دی.

زموږ هدف په ټوله نړۍ کې څیړونکو ته دا ارزښتمنه وسیله چمتو کول دي. دا د څیړنې نوې وسیله به په پروجیریا کې د نوي او نوښتګر تحقیق رامینځته کولو لپاره وکارول شي ، او همدارنګه د زړه ناروغۍ او عمر سره د دې اړیکې.  

3. د هچینسن - ګیلفورډ پروجیریا سنډروم هڅول شوي پلوریپوتینټ سټیم حجرو (آی پي ایس سي) تولید

هڅول شوي - پلورپوتینټ سټیم حجرې (iPSCs) د VSVG-pseudotyped retroviral لیږد په کارولو سره د څلورو انساني فکتورونو ، اکتوبر 4 ، Sox2 ، Klf4 ، او c-Myc په فایبروبلاسټونو کې ترلاسه شوي. د آی.پی.سی. کالونیو د ماوس - جنینیک فایبروبلاټونو (MEFs) اخیستل شوی. کارول شوې پروسه په لازمي ډول لکه څنګه چې دمخه بیان شوي وه مګر د EOS خبریال څخه کار اخیستو پرته (د فطرت پروتوکول 4: 1828-1844 ، 2009). 

4. د کیفیت کنټرول: اعتبار او ځانګړتیا

هغه لینونه چې دا مهال شتون لري ډیری د اعتبار مرحلې څخه تیر شوي (لاندې د پی ډی اف ډاونلوډ پی ډی ایف وګورئ):

 

    1. د هرې کرښې لپاره د مایکوپلازما ازموینه: د ډاکټر سټینفورډ لابراتوار د هر حجرو کرښې لپاره د PCR لخوا مایکوپلازماینازیز ترسره کړی. سربیره پردې ، د توسع کولو او د لیږد حجرو څخه دمخه ، لینونه به د مایکوپلازما لپاره تکرار شي.
    2. د Pluripotency مارکرونو لپاره امیونوسټینینګ ټرا - 1-60 ، ټرا-ایکس اینومکس-ایکس اینوم ایکس ، او SSEA1.
    3. الکلین فاسفاسټینګ د Pluripotency د شاخص په توګه
    4. جنينايډ د بدن جوړښت او ورپسې د درې جراثيم طبقو نښه کونکو لپاره معافيتي ځواک. مارکر ازمیښت شوي - III-Tubulin (ایکټوډرم) ، د قوي عضلاتو ایکټین (میسوډرم) ، او Gata4 یا AFP (Endoderm) وو
    5. د Karyotype تحلیل.
    6. په بیلابیلو حجرو کې د لامین A بیا څرګندونه
    7. د Teratoma assays

اضافي اعتبار په پروسه کې:
ځینې ​​لینونو لکه د ملاتړ ډیټا کې ښودل شوي د ټیراتومې آسونه بشپړ کړي. د نورو ټولو لینکونو لپاره ، د ټیراتومې مرستې په جریان کې دي او وضعیت به تازه شي ځکه چې دا اسونه بشپړ شوي.

5. د پیل کولو اصلي ماده چې له دې څخه د دې آی پي ایس حجرې ترلاسه شوي

iPSCs د PRF سیل او ټیسو بانک نه بدلېدونکي فایبروبلاست حجرو لاینونو څخه اخیستل شوي.

د ټولو آی پي ایس لینونو لپاره د ترانزیت میتود کارول شوی retrovirus MKOS و.

د آی پي ایس سي لاین IDاوښتونجنډر او ډونج ایجد حجرو ډول ایستل دلته زور ورکړی.ملاتړ کونکي ډاټا
HGADFN003 iPS 1B LMNAExon 11 ،
1824 C> T		نارینه 2yr 0mo نرمه فایبروبلاسټونه
HGADFN003		003 iPS1B
HGADFN003 iPS 1C LMNA ایکسون 11 ،
1824 C> T		نارینه 2yr 0mo نرمه فایبروبلاسټونه
HGADFN003		003 iPS1C
HGDFN003
IPS 1D		LMNA ایکسون 11 ،
1824 C> T		نارینه 2yr 0mo نرمه فایبروبلاسټونه
HGADFN003		003 iPS1D
HGADFN167 iPS 1J LMNA ایکسون 11 ، 1824 C> Tنارینه 8yr 5moنرمه فایبروبلاسټ HGADFN167د 167 PS 1J
HGADFN167 iPS 1Q LMNA ایکسون 11 ، 1824 C> Tنارینه 8yr 5moنرمه فایبروبلاسټ HGADFN167167 iPS1Q
د HGMDFN090 iPS 1B د HGADFN167 مور (بې اغیزه شوی)ښځینه 37yr 10moنرمه فایبروبلاسټونه
HGMDFN090		090 iPS1B
د HGMDFN090 iPS 1C د HGADFN167 مور (بې اغیزه شوی)ښځینه 37yr 10moنرمه فایبروبلاسټونه
HGMDFN090		090 iPS1C
HGFDFN168 iPS1 D2د HGADFN167 پلار (بې اغیزه شوی)نارینه 40yr
5mo		نرمه فایبروبلاسټ HGFDFN168168 iPS1 D2
HGFDFN168 iPS1Pد HGADFN167 پلار (بې اغیزه شوی)نارینه 40yr
5mo		نرمه فایبروبلاسټونه
HGFDFN168		168 iPS1P

PRF د سیل لینونه شتون لري

6. د راتلونکي iPSC تازه معلوماتو او نوي سیل لینونو لپاره زموږ بریښنالیک لیست کې شامل شئ

موږ د آی پي ایس سي لاینونو تولید ته دوام ورکوو. که تاسو غواړئ د آی پي ایس سی په اړه لنډمهاله تازه معلومات د PRF سیل او نسج بانک کې ترسره کړئ ، نو مهرباني وکړئ زموږ د بریښنالیک لیست کې د کلیک کولو سره دا ځای شئ دلته

7. پوښتنې؟

مهرباني وکړئ لیسلي ګورډن ، MD ، PhD ، طبي رییس سره د هرې پوښتنې یا اړتیاو سره په اړیکه کې شئ lgordon@progeriaresearch.org یا 978-535-2594

8. د آی پي ایس حجرو لاینونو تنظیم کول

په 2014 کې ، PRF زموږ په MTA کې د هیڅ بدلون پالیسۍ رامینځته کړه. دا د 12 کلونو د تړون ترتیباتو پایله ده چې د 70 څیړنیزو ټیمونو سره په 14 هیوادونو کې په ادارو کې کار کوي. PRF او د هغه مشاور هغه مسلې په پام کې نیولي دي چې پدې موده کې راپورته شوي او د تړون مطابق ترمیم شوي ، په پایله کې هغه څه چې موږ یې احساس کوو مناسب او مناسب شرایط دي.

د متحده ایالاتو فدرالي حکومتي ادارو یا پوښتنو لپاره ، مهرباني وکړئ دلته له وینډي نوریس سره اړیکه ونیسئ: wnorris@lifespan.org or 401-274-1122 x 48063.

مرحله 1: د غوښتنلیک او د موادو لیږد تړون بشپړ کړئ

د غیر دولتي نهادونو لپاره غوښتنلیک او تړون

د غیر دولتي نهادونو لپاره د موادو لیږد تړون

2 پړاو: بشپړ شوی غوښتنلیک او د موادو لیږد تړون وینډي نوریس ته بیرته راستانه کړئ wnorris@lifespan.org. یوځل تصویب شو ، تاسو به یو بریښنالیک ترلاسه کړئ چې ستاسو د غوښتنې او اټکل شوي نیټه تایید کوي. 

3 پړاو: د ډاکټر سټینفورډ لابراتوار اوس مهال په منجمد کریوالونو کې لینکونه توزیع کوي. د هغه لابراتوار به تاسو ته بریښنالیک درکړي کله چې کلتور لیږدول شوی وي ، د بار وړلو او تعقیب معلوماتو سره. بې تجربه څیړونکو ته لارښوونه شوې چې په ځانګړي کورسونو کې روزنه ترلاسه کړي چې د انساني جنینیک سټم سیل / آی پي ایس سي کار لپاره اړین دي.

د اوټاوا روغتون څیړنیز انسټیټیوټ کې د انسان پلوریپوټینټ سټیم سیل اسانتیا (د ډاکټر سټینفورډ لخوا لارښود شوی) د پروجیریا iPSC حجرو لاینونو ته ځانګړي د iPSC کلتور تخنیکونو اساساتو په اړه یو له بل سره مجازی روزنه وړاندې کوي. د روزنې اختیارونه او بڼه د ساینس پوهانو د تجربې کچې پورې اړه لري انعطاف وړ دي.  د نورو معلوماتو لپاره، مهرباني وکړئ بریښنالیک hpscf@ohri.ca.

4 ګام: د اوټاوا پوهنتون به تاسو سره په مستقیم ډول د هر iPSC لاین پلور کوریر لګښتونو لپاره ، که کوم یو وي.

9. د HGPS او کنټرول iPS سیل کلتور میډیا چمتووالی

iPSC او ESCs ته اړتیا لري د سټیم سیل ټیکنالوژیو څخه mTeSR پلس سره تغذیه شي (بلی# 5825). مهرباني وکړئ د ذخیره کولو لپاره د عرضه کونکي وړاندیزونه تعقیب کړئ.

10. د میتریجل پلیټونو چمتو کول

یادښت: د میټریل په شمول ټول ګامونه باید ژر تر ژره ترسره شي او څومره چې امکان ولري سړه پاتې شئ.

  1. د میټریګل بوتل په 4 کې وخورئ°C. د پروټین غلظت موندلو لپاره په دې لاټ کې د تحلیل سند وګورئ.
  2. په کافي اندازه سړه DMEM/F12 میډیا په حل شوي میټریګل کې اضافه کړئ ترڅو د 5mg/mL وروستي غلظت ته ورسیږي.
  3. د چمتو شوي میټریګیل 1 ملی لیتر الیکوټس د 2 ملی لیتر فالکون ټیوبونو کې د 15 مرحلې څخه مخکې یخ کړئ.
  4. ټول الکوټس په -20 کې منجمد او ذخیره کړئ°C.
  5. د میټریګل پلیټونو جوړولو لپاره ، د میټریګل (1 ملی لیتر) یو الکوت له -20 څخه لرې کړئ°C او 10 ملی لیتر سړه DMEM/F12 اضافه کړئ. ښه مخلوط کړئ تر هغه چې ګولۍ وخورئ (پرته له دې چې بلبلونه رامینځته کړي، او تل محلول سړه وساتئ).
  6. یو 50 ملی لیتر ټیوب ته انتقال کړئ، بیا 20 ملی لیتر سړه DMEM/F12 اضافه کړئ (1 ملی لیتر میټریګل ایلیکوټ په 30 ملی لیتر DMEM/F12 کې حل شوی)، ښه مخلوط کړئ.
  7. پلیټ (1mL/څاه د 6 څاه پلیټ لپاره، 0.5mL/څاه د 12 څاه پلیټ لپاره، 0.25mL/څاه د 24 څاه پلیټ لپاره). ډاډ ترلاسه کړئ چې محلول په نرمۍ سره د پلیټ په وهلو سره د سطحې ټوله ساحه پوښي. هیڅ پاتې میټریګل بیا کنګل مه کوئ.
  8. که پلیټ سمدستي کاروئ، پریږدئ چې پلیټ د خونې په حرارت درجه کې د 1 ساعت (یا 30 دقیقې په 37 کې) کېږدي°ج) د مایکروسکوپ لاندې میټریګل وګورئ. میټریګیل باید په ښه توګه توزیع شي او "ګډون" نه وي.
  9. که چیرې په بل وخت کې پلیټونه وکاروئ، د پلیټ څنډه د پارفیلم سره وتړئ او په 4 کې ذخیره کړئ°C تر 2 اونیو پورې.

میټریجیل - BD / فشر ، پیشو # CB-40230

DMEM / F12 - د ژوند ټیکنالوژي ، پیشو # 11330-057

ډاکټر ولیم سټینفورډ - 2022

11. ژاړونکی ES یا iPS حجرې (په هر ژاړه کې)

  1. د میټریګیل پلیټ له 4 درجې سانتي ګراد څخه واخلئ او د خونې په حرارت کې د یو ساعت لپاره ګرم کړئ، یا تازه میټریګل پلیټ جوړ کړئ (د میټریګل پلیټ پروتوکول چمتو کول وګورئ).
  2. په 4mL فالکن ټیوب کې 15mL mTeSR Plus ګرم کړئ.
  3. د مایع نایټروجن ټانک څخه حجرې لرې کړئ او په 37 درجې سانتي مترو کې حمام کې وګرځئ تر څو چې یوازې د یخ یوه کوچنۍ ټوټه پاتې وي. شیش باید په 1-2 دقیقو کې وچ شي. دا ګام باید په چټکۍ سره ترسره شي.
  4. د ایتانول سیل ټیوب او فالکن میډیا ټیوب او په هود کې ځای.
  5. 1 ملی لیتر وکاروئ ورو ورو د خولې پراخه لار د مخکینۍ تودوخې میډیا 4mL ته حجرې اضافه کړئ (د حجرو تعلیق مخلوط کولو څخه ډډه وکړئ).
  6. د 130 دقیقو لپاره په 5 rcf کې وخورئ.
  7. سپرناټینټ لرې کړئ.
  8. د PSC میډیا 2mL اضافه کړئ، او د پراخې خولې سره په نرمۍ سره ټوټې ټوټې کړئ. د 6 څاه پلیټ څخه یوې څاه ته میډیا انتقال کړئ 2uL ROCK inhibitor اضافه کړئ (Y27632، د 10uM وروستی غلظت). په یو میټریګیل ښه پوښل شوی (د 6 څاه پلیټ څخه).
  9. حجرې په نرمۍ سره په مساوي ډول توزیع کولو لپاره حجرې راکوي او په هایپوکسیک انکیوبټر کې ځای په ځای کوي (5٪ O210٪ CO2). د کښت کولو وروسته د 24 ساعتونو لپاره د پلیټ ګډوډۍ څخه مخنیوی وکړئ.

    یادښت: دا ډیره مهمه ده چې د ډیری کلمپونو ماتولو یا تیریدونکي پایپټینګ څخه مخنیوی وشي. دا کولی شي د پام وړ د بقا کچه کمه کړي. حجرې باید د تخم د کرلو په وخت کې د 100-300 حجرو په لویو برخو کې پاتې شي. پداسې حال کې چې نرم وي، هڅه وکړئ کله چې حجرې پړسیدلي وي نو ژر تر ژره کار وکړئ ترڅو هغه وخت کم کړي چې دوی د کریوپروټیکټینټ سره تماس کې وي.

  10. د 24 ساعتونو وروسته میډیا لرې کړئ او د PSC میډیا 2mL اضافه کړئ (د 6 څاه لپاره، 1mL د 12 څاه لپاره او 0.5mL د 24 څاه پلیټ لپاره). د hESC/iPSC پروتوکول لپاره د حاصلاتو راټولول او پاملرنه وګورئ.

    د PSC رسنۍ

    د سټیم سیل ټیکنالوژیو څخه mTeSR پلس (بلی# 5825). مهرباني وکړئ د ذخیره کولو لپاره د عرضه کونکي وړاندیزونه تعقیب کړئ.

    راکس انابیوټر Y27632 څه شی دی؟

    ROCK Inhibitor Y27632 د Rho پورې تړلي kinase p160 ROCK انتخابی مخنیوی کونکی دی. د ROCK Inhibitor Y27632 سره درملنه د انسان جنین سټیم حجرو (hESC) او د انسان هڅول شوي pluripotent سټیم حجرو (iPSC) د جلا کیدو هڅول شوي اپوپټوسس مخه نیسي ، د ژوندي پاتې کیدو کچه لوړوي او د hESCs او HIPSCs د فرعي کښت او غوړیدو پرمهال د pluripotency ساتل. د ROCK Inhibitor Y27632 هم ښودل شوي چې د کریوپریزرویشن په جریان کې د سټیم حجرو د بقا کچه لوړه کړي. په یاد ولرئ چې د راک مخنیوی کونکي الکوټس د رڼا او تکراري منجمد پړسوب سایکلونو سره حساس دي. ډاډ ترلاسه کړئ چې د عرضه کونکي وړاندیز شوي شیلف ژوند کې د دې الکوټس څخه کار واخلئ.

    ډاکټر ولیم سټینفورډ - 2022

    12. د hESC/iPSC لپاره د حاصلاتو راټولول او ساتنه

    1. یوه ورځ وروسته له دې چې حجرې پړسیدلې وې د مایکروسکوپ لاندې یې وګورئ ترڅو د بقا کچه معلومه کړي. نوټ: دا عادي خبره ده چې د ډیرو غیر تړلو حجرو څارنه وکړئ. تر هغه چې ځینې حجرې وصل وي، نو کالونیز کولی شي د 3 - 7 ورځو په اوږدو کې له دوی څخه رامینځته شي.
    2. له څاګانو څخه میډیا لرې کړئ او په هر څاه کې د تازه او ګرمو PSC میډیا 2 ملی لیتر (د 6 څاګانو لپاره ، 1 ملی لیتر د 12 څاګانو لپاره او 0.5 ملی لیتر د 24 څاګانو لپاره) لرې کړئ. پلیټ انکیوبیټر ته راستانه کړئ.
    3. حجرې تر 60-70 conf پورې تغذیه کیږي (د عرضه کونکي وړاندیزونه تعقیب کړئ).
    4. د ورځې 2 پورې ، حجرې باید مشاهده شي او د هرډول توپیر لرونکي حجرو څخه پاک شي چې ممکن وده وکړي.
    5. د حجرو پاکولو لپاره، د غوره کولو هود وکاروئ او د پایپټ ټیپ سره مختلف حجرې لرې کړئ.
    6. کله چې حجرې پاکې شي، میډیا بدل کړئ لکه څنګه چې په پورته ګامونو کې ترسره شوي.

    (د hESC/iPSC کنګل کول یا د hESC/iPSC پاس کول وګورئ)

    یادښت:

    د PSC میډیا ټاکل شوې وه چې په هایپوکسیک چاپیریال کې ډیر اغیزمن وي. موږ دا هم لیدلي چې لږ توپیر واقع کیږي کله چې حجرې په هایپوکسیک انکیوبیټرونو کې د نورموکسیک په پرتله وده کوي. په نهایت کې ، تخم شوي حجرې د هایپوکسیک انکیوبټر کارولو په وخت کې د بقا غوره نرخ لري.

    نورموکسیک: ۳۷°ج، 21٪ O25٪ CO2

    هایپوکسیک: ۳۷°C، 5% O210٪ CO2

    ډاکټر ولیم سټینفورډ - 2022

    13. د HESC/iPSC پاس کول

    1. 2 ملی لیتر PSC میډیا په 6 ښه میټریګل لیپت شوي پلیټ کې اضافه کړئ او یو طرف کېږدئ.
    2. د تېرېدو لپاره پلیټ واخلئ او رسنۍ له څاه څخه لرې کړئ او یو ځل د 1 ملی لیتر PBS (-/-) سره ومینځئ.
    3. په څاه کې د EDTA محلول 1 ملی لیتر اضافه کړئ او د خونې په حرارت کې د 3-4 دقیقو لپاره پریږدئ. پلیټ شاوخوا مه حرکت کوئ ځکه چې حجرې کولی شي جلا کول پیل کړي.
    4. د EDTA حل لرې کړئ او د PSC میډیا 1mL اضافه کړئ. EDTA د 4 دقیقو څخه ډیر په حجرو کې مه پریږدئ ځکه چې دا به د حجرو د پورته کیدو لامل شي.
    5. حجرې د سیل سکریپر په کارولو سره سکریپ کړئ او ستاسو د پلیټ د 6 څاګانو په مینځ کې حجرې تقسیم کړئ چې PSC میډیا لري. د کالونی ټوټو د ډیر ماتولو څخه ډډه وکړئ، او هڅه وکړئ چې د سکریپ کولو سره نرم وي. هڅه وکړئ چې حجرې په لویو برخو کې وساتئ. د اړتیا په صورت کې د کلمپونو د ماتولو لپاره د خولې پراخه پیپټ ټیپ وکاروئ. د حجرو ډیر ماتیدل ممکن د حجرو مړینه یا د تیریدو وروسته ډیر ناڅاپي توپیر لامل شي.
    6. په 37 کلنۍ کې تنفس کړئ°C وروسته له دې چې په هر څاه کې حجرې په مساوي ډول توزیع کړي (د 8 شکل یا L شکل ټکان) د تیریدو وروسته د 24 ساعتونو لپاره د پلیټ ګډوډۍ څخه مخنیوی وکړئ.

    یادښت: یوځل چې حجرې سکریپ شوې وي تاسو غواړئ ژر تر ژره نوي پلیټ ته یې واستوئ ځکه چې حجرې به په چټکۍ سره بیا سره وصل شي (په 5 دقیقو کې).

    که چیرې EDTA د 4 دقیقو څخه ډیر په حجرو کې پاتې شي، حجرې کولی شي جلا کول پیل کړي. که دا پیښ شي، په ساده ډول حجرې په 15mL falcon کې د 4mL PSC میډیا سره راټول کړئ. حجرې د 130 دقیقو لپاره په 5 rcf کې وخورئ. ګولۍ د 1mL میډیا سره بیا ځای پرځای کړئ او په مساوي ډول د 6 څاه میټریګل لیپت شوي پلیټ (په هر څاه کې 160uL) سره وویشئ.

    د EDTA حل: 500uL د 0.5M EDTA (pH 8.0) په 500mL DPBS (-/-) کې اضافه کړئ. 0.9 ګرامه NaCl اضافه کړئ. د تعقیم کولو لپاره محلول فلټر کړئ او تر 4 میاشتو پورې یې په 6 ° C کې ذخیره کړئ.

    د کاغذ څخه:

    په کیمیاوي ډول تعبیر شوي کلتور شرایطو کې د انزایم فری تحلیل په واسطه د انسان pluripotent ډډ حجرو تیریدل او کالونی توسعه

    ژانیت بیر,1 ډینیل آر ګلبرسن,2,3 نیکول جورج,4لورن I. سنوسلیچي,1 جیفري جونز,4,5 جیمز ا. تامسن,2,3,6 او ګووکی چن1,2

    14. د hESC/iPSC کنګل کول

    1. بایو کول (کنټرول شوي نرخ فریزر) چالان کړئ او د تودوخې درجه -7 درجې ته تنظیم کړئ.
    2. د انکیوبټر څخه حجرې لرې کړئ او د مایکروسکوپ لاندې انفلاسیون او مورفولوژي وګورئ.
    3. که څاګانې 70% سره یو ځای شوي وي، زاړه میډیا لرې کړئ او یو ځل د PBS (-/-) سره ومینځئ بیا په هر څاه کې 1 ملی لیتر EDTA محلول اضافه کړئ (د EDTA محلول سره تیریدل وګورئ).
    4. د 3-4 دقیقو لپاره د خونې په حرارت درجه کې غوړ کړئ.
    5. د EDTA محلول جذب کړئ او 1 ملی لیتر سړه mFreSR میډیا اضافه کړئ (بلی # 05855، سټیم سیل ټیکنالوژي).
    6. حجرې په نرمۍ سره پورته کولو لپاره د حجرو سکریپر وکاروئ. حجرې د امکان تر حده په لویو ټوټو کې وساتئ او د پایپ پورته کولو څخه مخنیوی وکړئ.
    7. حجرې/mFreSR د پراخې خولې په کارولو سره کریوټیوب ته انتقال کړئ. شیشې په یخ کې وساتئ تر هغه چې د 8 مرحلې لپاره چمتو وي.
    8. ټیوبونه په بایو کول کې ځای په ځای کړئ او د 10 دقیقو لپاره یې وینځئ.
    9. مایع نایتروجن ترلاسه کړئ.
    10. د 10 دقیقو وروسته، حجرې د سپاتولا په مایع نایټروجن کې ډوب کړئ او د نږدې 10-30 ثانیو لپاره د کریو ویال اړخ ته لمس کړئ یا تر هغه چې تاسو د کریو شیش په اړخ کې کریسټال شکل وګورئ.
    11. پروګرام 1 د "PROG" تڼۍ په فشارولو سره پیل کړئ او بیا د تڼۍ په فشارولو سره پروګرام ته لاړ شئ او تاسو باید د 0.5 درجې C/min نرخ وګورئ. بیا "RUN" فشار ورکړئ.
    12. کله چې د تودوخې درجه -65 سانتي ګراد ته ورسیږي د کریو ټیوبونه لیږدول کیدی شي او په مایع نایټروجن کې زیرمه شي.

    د بدیل

    بله لاره دا ده چې کریو ټیوبونه په کنګل شوي کانتینر (Biocision-CoolCell) کې ځای په ځای کړئ او د شپې په -80 ° C کې ذخیره کړئ. په بله ورځ کریو ټیوبونه مایع نایتروجن (مایع یا بخار مرحله) ته انتقال کړئ.

    ډاکټر ولیم سټینفورډ - 2022

    ثبت نام

    زموږ لپاره

    خبر پا !ه!

    اوس لاسلیک کړئ

    په ګډه ، موږ

    به وشی

    درملنه یې ومومئ!

    اوس مرسته وکړئ