ಘನೀಕೃತ ಕೋಶಗಳ ಸಾಗಣೆಯಿಂದ

ಒಣಗಿದ ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯ ಮೇಲೆ 1 ಮಿಲಿ ಆಲ್ಕೋಹಾಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸ್ವೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು ಈಗಿನಿಂದಲೇ ಪ್ರಾರಂಭಿಸದಿದ್ದರೆ ಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಅಥವಾ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕ ಸಂಗ್ರಹದಲ್ಲಿ ಇರಿಸುವವರೆಗೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟುವಂತೆ ಇರಿಸಿ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ನೀವು ನಂತರದ ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲು ಹೋದರೆ, ತಾಜಾ ಸ್ಟಾಕ್‌ಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಿಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಬಹು ಆಂಪೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಿ ಎಂದು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು 45% RPMI-1640, 50% ಭ್ರೂಣದ ಕರು ಸೀರಮ್ ಮತ್ತು 5% DMSO (ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ದರ್ಜೆಯಲ್ಲಿ) ನಲ್ಲಿ ಕ್ರಯೋಪ್ರೆಸರ್ವ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

1. 10 ಮಿಲಿ RPMI-1640, 15% ಭ್ರೂಣದ ಕರು ಸೀರಮ್ (FCS), ± ಪ್ರತಿಜೀವಕಗಳನ್ನು T-25 ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.
2. 37 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 5% C ಆರ್ದ್ರಗೊಳಿಸಿದ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ನಲ್ಲಿ 2% CO 30in ಗಾಳಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಮತೋಲನಗೊಳಿಸಲು ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಅನುಮತಿಸಿ.
3. ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರತಿ ಆಂಪೌಲ್ ಅನ್ನು 37 water C ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಉತ್ಸಾಹವಿಲ್ಲದ ನೀರಿನ ಬೀಕರ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಮ್ಮೆಯಾದರೂ ಕರಗಿಸಿ.
4. ಬರಡಾದ ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್ ಪ್ರೆಪ್ ಪ್ಯಾಡ್‌ನಿಂದ ಆಂಪೌಲ್‌ನ ಹೊರಭಾಗವನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಸ್ವಚ್ clean ಗೊಳಿಸಿ, ನಂತರ ಬೆರಳುಗಳನ್ನು ರಕ್ಷಿಸಲು ಆಂಪೌಲ್ ಸುತ್ತಲೂ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ಯಾಡ್ ಅನ್ನು ಸುತ್ತಿಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಸುರಕ್ಷತಾ ಹುಡ್‌ನೊಳಗಿನ ಆಂಪೌಲ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಮುದ್ರೆಯನ್ನು ಬಿರುಕುಗೊಳಿಸಿ.
5. ಬರಡಾದ ಗಾಜಿನ ಪಾಶ್ಚರ್ ಪೈಪೆಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಕೋಶಗಳ 1 ಮಿಲಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯಮ 25 ಮಿಲಿ ಯೊಂದಿಗೆ T-10 ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ. ಪ್ರತಿ ಕೋಶ ರೇಖೆಯನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ ಅನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿ.
6. ಕೋಶಗಳನ್ನು 37% C ಆರ್ದ್ರಗೊಳಿಸಿದ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ನಲ್ಲಿ 5% CO 2in ಗಾಳಿಯೊಂದಿಗೆ ಇರಿಸಿ.
7. 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ನ ಕೆಳಭಾಗದಲ್ಲಿ ನೆಲೆಸಿದ ಲಿಂಫೋಸೈಟ್‌ಗಳಿಗೆ ತೊಂದರೆಯಾಗದಂತೆ ಮೇಲಿನಿಂದ 5 ಮಿಲಿ ಮಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಪೂರ್ವ-ಬೆಚ್ಚಗಾಗುವ ಮಾಧ್ಯಮದ 5 ಮಿಲಿ ಯೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ.
8. ಪ್ರತಿ 5 - 6 ದಿನಗಳಿಗೊಮ್ಮೆ 3 - 4 ಮಿಲಿ ತಾಜಾ ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಆಹಾರವನ್ನು ನೀಡಿ ಮತ್ತು ಅಗತ್ಯವಿರುವಂತೆ ಹೊಸ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಾಗಿ ವಿಭಜಿಸಿ.

ಲೈವ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳ ಸಾಗಣೆಯಿಂದ

1. RPMI-25, 1640% FCS, 15% ಪೆನಿಸಿಲಿನ್-ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಿನ್ (ಗಿಬ್ಕೊ) ನೊಂದಿಗೆ ಮೇಲ್ಭಾಗದಲ್ಲಿ ತುಂಬಿದ T-1 ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಲೈವ್ ಲಿಂಫೋಸೈಟ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು ಸ್ವೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕ್ಯಾಪ್ಗಳನ್ನು ಬಿಗಿಯಾಗಿ ಮತ್ತು ಪ್ಯಾರಾಫಿಲ್ಮ್ನೊಂದಿಗೆ ಮುಚ್ಚಲಾಗುತ್ತದೆ.
2. ಪ್ಯಾರಾಫಿಲ್ಮ್ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ.
3. ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು 37 ° C ಆರ್ದ್ರಗೊಳಿಸಿದ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ನಲ್ಲಿ 5% CO2 ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕೋಶಗಳು ನೆಲೆಗೊಳ್ಳಲು ಅನುಮತಿಸಿ (20 - 30 ನಿಮಿಷಗಳು).
4. ಬರಡಾದ ಪೈಪೆಟ್ ಬಳಸಿ 10 - 15 ಮಿಲಿ ಹೊರತುಪಡಿಸಿ ಎಲ್ಲವನ್ನೂ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ತ್ಯಜಿಸಿ.
5. ಅನಿಲ ವಿನಿಮಯವನ್ನು ಅನುಮತಿಸಲು ಫ್ಲಾಪ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಕ್ಯಾಪ್‌ಗಳನ್ನು ಸ್ವಲ್ಪ ಸಡಿಲಗೊಳಿಸಿ (ಕ್ಯಾಪ್ ಥ್ರೆಡ್‌ಗಳು ಅವುಗಳ ಮೇಲೆ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಹೊಂದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ. ಹಾಗಿದ್ದಲ್ಲಿ ನೀವು ಹೊಸ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲು ಬಯಸಬಹುದು.) ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು ಮತ್ತೆ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ 5% CO 2in ನೊಂದಿಗೆ ಇರಿಸಿ ಗಾಳಿ. ಅವರು ಒಂದು ಅಥವಾ ಎರಡು ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಚೇತರಿಸಿಕೊಳ್ಳಬೇಕು.
6. ಪ್ರತಿ 3 - 4 ದಿನಗಳಿಗೊಮ್ಮೆ ಕೋಶಗಳ ಸಮುಚ್ಚಯಗಳನ್ನು ಮರುಹೊಂದಿಸಿ ಮತ್ತು 50 -60% ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ತಾಜಾ ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ. ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ನಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿರುವಂತೆ ಹೊಸ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು.

ವೆಂಡಿ ನಾರ್ರಿಸ್