1। আইপিএসসি ব্যাকগ্রাউন্ড তথ্য অ বিজ্ঞানীর জন্য

স্টেম সেলগুলি "অপরিণত" কোষ যা এখনও কোনও একরকমের কোষে পরিণত হওয়ার প্রতিশ্রুতি দেয় না। এগুলি নমনীয় কারণ তারা দেহের বিভিন্ন ধরণের পরিপক্ক কোষে যেমন কোষগুলি হৃদয় বা রক্তনালীগুলি তৈরি করে এবং অন্যান্য টিস্যু এবং অঙ্গগুলিতে বিকশিত হওয়ার সম্ভাবনা রয়েছে। ২০০ 2007 সালে গবেষকরা গবেষণাগারে পরিপক্ক প্রাপ্তবয়স্ক কোষগুলির পুনঃপ্রণয়ন করে স্টেম সেল তৈরির জন্য একটি কৌশল আবিষ্কার করেছিলেন যা আমরা সাধারণত গবেষণার উদ্দেশ্যে বৃদ্ধি করি।^{1, 2} । এই কৃত্রিমভাবে তৈরি স্টেম সেলগুলিকে ইনডুসেড প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেলস ("আইপিএসসি") বলা হয়। প্রোজেরিয়ার ক্ষেত্রের ক্ষেত্রে এটি একটি বিশাল অগ্রগতি। প্রথমবারের জন্য, বিজ্ঞানীরা এখন প্রোজেরিয়া স্টেম সেল তৈরি করতে পারেন এবং প্রেজিয়ারিয়ায় স্টেম সেলগুলি কীভাবে কাজ করে এবং বিকাশ হয় সে সম্পর্কে প্রশ্ন জিজ্ঞাসা করতে পারে। পূর্বে মানব প্রোজেরিয়া স্টেম সেলগুলির কোনও উত্স ছিল না, এবং প্রেজেরিয়া স্টেম সেলগুলি প্রোজেরিয়াবিহীন লোকদের স্টেম সেলগুলির সাথে তুলনা করে কীভাবে কাজ করে সে সম্পর্কে কোনও তথ্যই অকার্যকর ছিল। এছাড়াও, বিজ্ঞানীরা প্রথমবারের জন্য পরিপক্ক প্রজেরিয়া রক্তনালীগুলি, হার্টের কোষ এবং অন্যান্য কোষের প্রকারগুলি তৈরি করতে প্রোজেরিয়া স্টেম সেলগুলি পুনরায় প্রোগ্রাম করতে পারেন। এখনও অবধি মানব প্রোজেরিয়া হার্ট বা রক্তনালী কোষগুলির কোনও উত্স ছিল না।  আমরা এখন চাবি জিজ্ঞাসা করতে পারেন হার্ট অ্যাটাক এবং স্ট্রোক থেকে প্রোজেরিয়ায় প্রাথমিক মৃত্যুর দিকে পরিচালিত করে এমন হৃদরোগ সম্পর্কিত প্রশ্নগুলি। আমরা এই আবিষ্কারগুলিকে সাধারণ জনগণের হৃদরোগ এবং বার্ধক্যের সাথে তুলনা করতে পারি এবং আমাদের সকলের মধ্যে বয়স বাড়ানোর ক্ষেত্রে কী প্রভাব ফেলে সে সম্পর্কে আরও জানতে পারি। ইতিমধ্যে প্রোজেরিয়া স্টেম সেল ব্যবহার করে বেশ কয়েকটি দুর্দান্ত গবেষণা প্রকাশিত হয়েছে।^3-5  প্রোজেরিয়া রিসার্চ ফাউন্ডেশনে আমাদের লক্ষ্য এই অমূল্য সরঞ্জামটি ব্যবহার করে আরও অনেক আবিষ্কারের সুবিধার্থে। স্টেম সেলগুলিতে প্রাইমারের জন্য, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের এই সরকারী ওয়েবসাইটটি দেখুন: https://stemcells.nih.gov/info/basics.htm

২ প্রোজেরিয়া রিসার্চ ফাউন্ডেশন দ্বারা উত্সাহিত প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেল (আইপিএসসি) উত্পাদন ও বিতরণের উদ্দেশ্য

প্রোজেরিয়া রিসার্চ ফাউন্ডেশনের লক্ষ্য হুচিনসন-গিলফোর্ড প্রজেরিয়া সিন্ড্রোম এবং এর বয়সজনিত-সম্পর্কিত ব্যাধিগুলির চিকিত্সা এবং নিরাময় আবিষ্কার করা। এক্সএনইউএমএক্সে, পিআরএফ উচ্চ মানের প্রজেরিয়া আইপিএসসি তৈরির জন্য উইলিয়াম স্ট্যানফোর্ড, পিএইচডি এর নির্দেশনায় কানাডার টরন্টো বিশ্ববিদ্যালয়ের বিজ্ঞানীদের একটি বিশেষজ্ঞ দলের সাথে একটি সহযোগিতা করেছে। ড। স্ট্যানফোর্ড ইন্টিগ্রেটিভ স্টেম সেল জীববিজ্ঞানের কানাডা রিসার্চ চেয়ার Cha এক্সএনএমএক্স হিসাবে, পিআরএফ কানাডার অটোয়া বিশ্ববিদ্যালয়ের ড। স্ট্যানফোর্ডের সাথে সহযোগিতা অব্যাহত রেখেছে যেখানে তিনি সেলুলার এবং মলিকুলার মেডিসিনের অধ্যাপক, মেডিসিন অনুষদ, এবং স্টাট সেল গবেষণার জন্য ওটাওয়া হাসপাতাল গবেষণা ইনস্টিটিউটের স্প্রট সেন্টারে সিনিয়র সায়েন্টিস্ট রয়েছেন।

আমাদের লক্ষ্য বিশ্বজুড়ে গবেষকদের কাছে এই অমূল্য সরঞ্জাম সরবরাহ করা। এই নতুন গবেষণা সরঞ্জামটি প্রোজেরিয়ায় নতুন এবং উদ্ভাবনী গবেষণা তৈরি করার পাশাপাশি হৃদরোগ এবং বার্ধক্যের সাথে এর সম্পর্কের জন্য ব্যবহৃত হবে।  

3। হাচিনসন-গিলফোর্ড প্রোজেরিয়া সিন্ড্রোম প্ররোচিত-প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেলস (আইপিএসসি)

ইন্ডিউসড-প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেলস (আইপিএসসি) চারটি মানব কারণ, অক্টোবর 4, সক্স 2, কেএলএফ 4 এবং সি-মাইককে ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে ভিএসভিজি-সিউডোটাইপড রেট্রোভাইরাল ট্রান্সডাকশন ব্যবহার করে উদ্ভূত হয়েছিল। আইপিএসসি কলোনীগুলি মাউস-এমব্রায়নিক ফাইব্রোব্লাস্ট (এমইএফ) এ প্রাপ্ত হয়েছিল। ব্যবহৃত পদ্ধতিটি মূলত পূর্বে বর্ণিত হিসাবে ছিল তবে ইওএস রিপোর্টার ব্যবহার ছাড়াই (প্রকৃতি প্রোটোকলস 4: 1828-1844, 2009)। 

4। গুণ নিয়ন্ত্রণ: বৈধতা এবং বৈশিষ্ট্য

বর্তমানে উপলব্ধ লাইনগুলি বেশ কয়েকটি বৈধকরণের পদক্ষেপ নিয়েছে (নীচে ডাউনলোডযোগ্য পিডিএফ দেখুন):

৫. আসল প্রারম্ভিক উপাদান যা থেকে এই আইপিএস সেলগুলি উত্পন্ন হয়েছিল

আইপিএসসিগুলি পিআরএফ সেল এবং টিস্যু ব্যাংক নন-ট্রান্সফর্মড ফাইব্রোব্লাস্ট সেল লাইন থেকে নেওয়া হয়েছিল।

সমস্ত আইপিএস লাইনের জন্য ব্যবহৃত ট্রান্সপোর্টেশন পদ্ধতিটি ছিল রেট্রোভাইরাস এমকেওএস।

আইপিএসসি লাইন আইডি	পরিব্যক্তি	জেন্ডার এবং দান এজ	মূল প্রকারের ঘর প্রকার এখানে ক্লিক করুন.	সহায়ক ডেটা
HGADFN003 আইপিএস এক্সএনইউএমএক্সবি	LMNAExon 11, এক্সএনএমএক্স সি> টি	পুরুষ 2yr 0mo	ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টস HGADFN003	এক্সএনইউএমএক্স আইপিএসএক্সএনইউএমএক্সবি
HGADFN003 আইপিএস এক্সএনইউএমএক্সসি	এলএমএনএ এক্সন এক্সএনএমএক্স, এক্সএনএমএক্স সি> টি	পুরুষ 2yr 0mo	ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টস HGADFN003	এক্সএনইউএমএক্স আইপিএসএক্সএনইউএমএক্সসি
HGDFN003 আইপিএস এক্সএনএমএক্সএক্স	এলএমএনএ এক্সন এক্সএনএমএক্স, এক্সএনএমএক্স সি> টি	পুরুষ 2yr 0mo	ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টস HGADFN003	এক্সএনইউএমএক্স আইপিএসএক্সএনএমএমএক্সডি
HGADFN167 আইপিএস এক্সএনএমএক্সএক্স	এলএমএনএ এক্সন এক্সএনইউএমএক্স, এক্সএনএমএক্স সি> টি	পুরুষ 8yr 5mo	চর্মর ফাইব্রোব্লাস্টস এইচজিএডিএফএনএক্সএনইউএমএক্স	এক্সএনইউএমএক্স পিএস এক্সএনএমএক্সএক্স
HGADFN167 আইপিএস এক্সএনইউএমএক্সকিউ	এলএমএনএ এক্সন এক্সএনইউএমএক্স, এক্সএনএমএক্স সি> টি	পুরুষ 8yr 5mo	চর্মর ফাইব্রোব্লাস্টস এইচজিএডিএফএনএক্সএনইউএমএক্স	এক্সএনইউএমএক্স আইপিএসএক্সএনএমএক্সকিউ
HGMDFN090 আইপিএস এক্সএনইউএমএক্সবি	HGADFN167 এর মা (প্রভাবিত)	মহিলা 37yr 10mo	ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টস HGMDFN090	এক্সএনইউএমএক্স আইপিএসএক্সএনইউএমএক্সবি
HGMDFN090 আইপিএস এক্সএনইউএমএক্সসি	HGADFN167 এর মা (প্রভাবিত)	মহিলা 37yr 10mo	ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টস HGMDFN090	এক্সএনইউএমএক্স আইপিএসএক্সএনইউএমএক্সসি
HGFDFN168 আইপিএসএক্সএনএমএক্স ডিএক্সএনএমএক্স	HGADFN167 এর জনক (প্রভাবিত)	পুরুষ 40yr 5mo	চর্মর ফাইব্রোব্লাস্টস এইচজিএফডিএফএনএক্সএনইউএমএক্স	এক্সএনইউএমএক্স আইপিএসএক্সএনএমএক্স ডিএক্সএনএমএক্স
HGFDFN168 আইপিএসএক্সএনএমএমএক্সপি	HGADFN167 এর জনক (প্রভাবিত)	পুরুষ 40yr 5mo	ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টস HGFDFN168	এক্সএনইউএমএক্স আইপিএসএক্সএনএমএমএক্সপি

6। ভবিষ্যতের আইপিএসসি আপডেট এবং নতুন সেল লাইনের জন্য আমাদের ইমেল তালিকায় যোগ দিন

আমরা আইপিএসসি লাইন তৈরি করা চালিয়ে যাচ্ছি। আপনি যদি পিআরএফ সেল এবং টিস্যু ব্যাঙ্কে অনুষ্ঠিত আইপিএসসিতে পর্যায়ক্রমিক আপডেট চান, দয়া করে ক্লিক করে আমাদের ইমেল তালিকাতে যোগদান করুন এখানে

Questions. প্রশ্ন?

দয়া করে কোনও প্রশ্ন বা প্রয়োজনের সাথে, মেডিকেল ডিরেক্টর লেসেলি গর্ডন, এমডি, পিএইচডি, সাথে যোগাযোগ করুন lgordon@progeriaresearch.org অথবা 978-535-2594

৮. আইপিএস সেল লাইন অর্ডার করা হচ্ছে

এক্সএনএমএক্সে, পিআরএফ আমাদের এমটিএতে কোনও পরিবর্তন না করার নীতি চালু করেছিল। এটি 2014 দেশগুলির প্রতিষ্ঠানে 12 গবেষণা দলের সাথে কাজ করা 70 বছরের চুক্তিভিত্তিক ব্যবস্থার ফলাফল। পিআরএফ এবং এর পরামর্শগুলি সেই সময়কালে উত্থাপিত সমস্যাগুলি বিবেচনায় নিয়েছে এবং সেই অনুসারে চুক্তি সম্পাদনা করেছে, ফলস্বরূপ আমরা যা অনুভব করি তা ন্যায্য এবং যুক্তিসঙ্গত শর্তাবলী।

মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রীয় ফেডারাল সরকারী প্রতিষ্ঠান বা প্রশ্নগুলির জন্য, দয়া করে এখানে ভেন্ডি নরিসের সাথে যোগাযোগ করুন: wnorris@lifespan.org or 401-274-1122 x 48063.

পদক্ষেপ 1: একটি অ্যাপ্লিকেশন এবং উপাদান স্থানান্তর চুক্তি সম্পূর্ণ করুন

বেসরকারী প্রতিষ্ঠানের জন্য আবেদন এবং চুক্তি

বেসরকারী প্রতিষ্ঠানের জন্য উপাদান স্থানান্তর চুক্তি

ধাপ 2: সম্পূর্ণ আবেদন এবং উপাদান স্থানান্তর চুক্তি ওয়েন্ডি নরিসের কাছে ফেরত দিন wnorris@lifespan.org। একবার অনুমোদিত হয়ে গেলে, আপনি আপনার অর্ডার এবং প্রত্যাশিত শিপিংয়ের তারিখের নিশ্চয়তা দেওয়ার জন্য একটি ইমেল পাবেন। 

ধাপ 3: ড। স্ট্যানফোর্ডের পরীক্ষাগার বর্তমানে হিমায়িত ক্রিওভায়ালে লাইন বিতরণ করছে। শিপিং এবং ট্র্যাকিংয়ের তথ্য সহ যখন সংস্কৃতিটি প্রেরণ করা হবে তখন তার পরীক্ষাগার আপনাকে ইমেল করবে। অনভিজ্ঞ গবেষকরা মানব ভ্রূণ স্টেম সেল / আইপিএসসি কাজের জন্য প্রয়োজনীয় বিশেষায়িত কোর্সে প্রশিক্ষণ নেওয়ার জন্য পরিচালিত হয়।

অটোয়া হসপিটাল রিসার্চ ইনস্টিটিউটে হিউম্যান প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেল ফ্যাসিলিটি (ড. স্ট্যানফোর্ড দ্বারা পরিচালিত) প্রোজেরিয়া আইপিএসসি সেল লাইনের জন্য নির্দিষ্ট আইপিএসসি কালচার কৌশলগুলির মৌলিক বিষয়গুলির উপর ভার্চুয়াল একের পর এক প্রশিক্ষণ প্রদান করে। বিজ্ঞানীদের অভিজ্ঞতার স্তরের উপর নির্ভর করে প্রশিক্ষণের বিকল্প এবং বিন্যাস নমনীয়।  আরও তথ্যের জন্য, hpscf@ohri.ca ইমেল করুন.

পদক্ষেপ 4: অটোয়া বিশ্ববিদ্যালয় প্রতিটি আইপিএসসি লাইন প্লাস কুরিয়ার ব্যয়ের জন্য সরাসরি আপনার চালান করবে any

9. এইচজিপিএস এবং নিয়ন্ত্রণ আইপিএস সেল সংস্কৃতি মিডিয়া প্রস্তুতি

আইপিএসসি এবং ইএসসিকে স্টেম সেল টেকনোলজিস (বিড়াল# 5825) থেকে এমটিইএসআর প্লাস খাওয়ানো দরকার। স্টোরেজের জন্য সরবরাহকারীর সুপারিশ অনুসরণ করুন।

10. ম্যাট্রিজেল প্লেট প্রস্তুত করা

বিঃদ্রঃ: ম্যাট্রিজেলের সাথে জড়িত সমস্ত পদক্ষেপগুলি যত তাড়াতাড়ি সম্ভব করা উচিত এবং যতটা সম্ভব ঠান্ডা থাকা উচিত।

1. ম্যাট্রিজেল বোতল 4 এ গলান°C. প্রোটিনের ঘনত্ব খুঁজে পেতে সেই লটের বিশ্লেষণের শংসাপত্রটি পরীক্ষা করুন।
2. 12mg/mL এর চূড়ান্ত ঘনত্বে পৌঁছানোর জন্য গলানো ম্যাট্রিজেলে পর্যাপ্ত ঠান্ডা DMEM/F5 মিডিয়া যোগ করুন।
3. প্রি-চিল্ড 1mL ফ্যালকন টিউবে ধাপ 2 থেকে প্রস্তুত ম্যাট্রিজেলের 15mL অ্যালিকোট তৈরি করুন।
4. -20-এ সমস্ত অ্যালিকোট জমা এবং সংরক্ষণ করুন°C.
5. ম্যাট্রিজেল প্লেট তৈরি করতে, -1 থেকে ম্যাট্রিজেল (20mL) এর একটি অ্যালিকোট সরান°C এবং 10mL ঠান্ডা DMEM/F12 যোগ করুন। পেলেট গলা না হওয়া পর্যন্ত ভালভাবে মেশান (বুদবুদ তৈরি না করে এবং সর্বদা দ্রবণ ঠান্ডা রাখুন)।
6. একটি 50mL টিউবে স্থানান্তর করুন, তারপর 20mL ঠান্ডা DMEM/F12 যোগ করুন (1mL ম্যাট্রিজেল অ্যালিকোট 30mL DMEM/F12 এ মিশ্রিত করা হয়), ভালভাবে মেশান।
7. প্লেট (1টি ওয়েল প্লেটের জন্য 6mL/ওয়েল, 0.5টি ওয়েল প্লেটের জন্য 12mL/ওয়েল, 0.25টি ওয়েল প্লেটের জন্য 24mL/ওয়েল)। নিশ্চিত করুন যে দ্রবণটি প্লেটটিকে আলতো করে ঝাঁকিয়ে পুরো পৃষ্ঠের এলাকাকে ঢেকে দিচ্ছে। কোনো অবশিষ্ট থাকা ম্যাট্রিজেল পুনরায় হিমায়িত করবেন না।
8. প্লেটটি অবিলম্বে ব্যবহার করলে, প্লেটটিকে ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টা (বা 30 এ 37 মিনিট) বসতে দিন°গ), মাইক্রোস্কোপের নীচে ম্যাট্রিজেল পর্যবেক্ষণ করুন। ম্যাট্রিজেল ভালভাবে বিচ্ছুরিত হওয়া উচিত এবং "আঠালো" নয়।
9. অন্য সময়ে প্লেট ব্যবহার করলে, প্যারাফিল্ম দিয়ে প্লেটের প্রান্তটি মুড়ে 4 এ সংরক্ষণ করুন°সি 2 সপ্তাহ পর্যন্ত।

ম্যাটরিজিল - বিডি / ফিশার, বিড়াল # সিবি-এক্সএনইউএমএক্স

ডিএমইএম / এফএক্সএনএমএক্স - লাইফ টেকনোলজিস, বিড়াল # 12-11330

ডঃ উইলিয়াম স্ট্যানফোর্ড-এক্সএনইউএমএক্স

11. গলানো ইএস বা আইপিএস কোষ (প্রতি ক্রিও-শিশি)

1. 4°C থেকে একটি ম্যাট্রিজেল প্লেট নিন এবং ঘরের তাপমাত্রায় এক ঘন্টার জন্য উষ্ণ করুন, অথবা একটি নতুন ম্যাট্রিজেল প্লেট তৈরি করুন (ম্যাট্রিজেল প্লেট প্রোটোকল প্রস্তুত করা দেখুন)।
2. 4mL ফ্যালকন টিউবে উষ্ণ 15mL mTeSR প্লাস।
3. তরল নাইট্রোজেন ট্যাঙ্ক থেকে কোষগুলি সরান এবং একটি 37 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড স্নানে ঘূর্ণায়মান করুন যতক্ষণ না শুধুমাত্র একটি ছোট বরফের খণ্ড বাকি থাকে। শিশি 1-2 মিনিটের মধ্যে গলাতে হবে। এই পদক্ষেপ দ্রুত সম্পন্ন করা আবশ্যক.
4. ইথানল সেল টিউব এবং ফালক মিডিয়া টিউব এবং হুডে স্থান।
5. 1mL ব্যবহার করুন ধীরে ধীরে প্রশস্ত মুখ টিপ 4mL প্রাক-উষ্ণ মিডিয়াতে কোষ যোগ করুন (সেল সাসপেনশন মিশ্রিত করা এড়িয়ে চলুন)।
6. 130 মিনিটের জন্য 5 rcf এ স্পিন করুন।
7. সুপারনাট্যান্ট সরান।
8. PSC মিডিয়ার 2mL যোগ করুন, এবং একটি প্রশস্ত মুখের ডগা দিয়ে আলতো করে ক্লাম্পগুলি ভেঙে ফেলুন. একটি 6 ওয়েল প্লেটের একটি কূপে মিডিয়া স্থানান্তর করুন রক ইনহিবিটারের 2uL যোগ করুন (Y27632, 10uM এর চূড়ান্ত ঘনত্ব)। একটি ম্যাট্রিজেল প্রলিপ্ত কূপে প্লেট করুন (একটি 6টি ভাল প্লেটের)।
9. কোষগুলিকে সমানভাবে বিতরণ করার জন্য শিলা কোষগুলিকে আলতো করে, এবং একটি হাইপোক্সিক ইনকিউবেটরে রাখুন (5%O₂, 10% CO₂) বীজ বপনের পর 24 ঘন্টা প্লেটের ঝামেলা এড়িয়ে চলুন।

   লক্ষ্য করুন: ক্লম্পের অত্যধিক ভাঙ্গন বা আক্রমনাত্মক পাইপটিং এড়ানো খুবই গুরুত্বপূর্ণ। এটি উল্লেখযোগ্যভাবে বেঁচে থাকার হার কমাতে পারে। বীজ বপনের সময় কোষগুলি 100-300 কোষের বড় অংশে থাকা উচিত। মৃদু থাকার সময়, কোষগুলি গলানো হয়ে গেলে দ্রুত কাজ করার চেষ্টা করুন যাতে তারা ক্রায়োপ্রোটেক্ট্যান্টের সংস্পর্শে থাকে।

10. 24 ঘন্টা পরে মিডিয়া সরান এবং PSC মিডিয়ার 2mL যোগ করুন (একটি 6 কূপের জন্য, 1টি কূপের জন্য 12mL এবং 0.5টি কূপের জন্য 24mL)। hESC/iPSC প্রোটোকলের জন্য ফসল কাটা এবং পরিচর্যা দেখুন।

পিএসসি মিডিয়া

স্টেম সেল টেকনোলজিস থেকে mTeSR প্লাস (বিড়াল# 5825)। স্টোরেজের জন্য দয়া করে সরবরাহকারীর সুপারিশ অনুসরণ করুন।

রক ইনহিবিটার Y27632 কী?

রক ইনহিবিটর Y27632 হল Rho সম্পর্কিত kinase p160 ROCK-এর একটি নির্বাচনী ইনহিবিটার। ROCK ইনহিবিটর Y27632 এর সাথে চিকিত্সা মানব ভ্রূণ স্টেম সেল (hESC) এবং মানব প্ররোচিত প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেল (iPSC) এর বিচ্ছিন্নতা প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধ করে, বেঁচে থাকার হার বৃদ্ধি করে এবং এইচইএসসি এবং হিপিএসসি-এর উপচাষ এবং গলানোর সময় প্লুরিপোটেন্সি বজায় রাখে। ROCK ইনহিবিটর Y27632 কে ক্রায়োপ্রিজারভেশনের সময় স্টেম সেলের বেঁচে থাকার হারকেও বাড়ানোর জন্য দেখানো হয়েছে। নোট করুন যে রক ইনহিবিটর অ্যালিকোটগুলি আলো এবং পুনরাবৃত্তিমূলক ফ্রিজ গলার চক্রের প্রতি সংবেদনশীল। সরবরাহকারীর প্রস্তাবিত শেলফ লাইফের মধ্যে এই অ্যালিকোটগুলি ব্যবহার করা নিশ্চিত করুন৷

ডঃ উইলিয়াম স্ট্যানফোর্ড-এক্সএনইউএমএক্স

12. hESC/ iPSC-এর জন্য ফসল কাটা এবং পরিচর্যা করা

1. কোষগুলি গলানোর পরের দিন বেঁচে থাকার হার নির্ধারণ করতে মাইক্রোস্কোপের নীচে সেগুলি দেখুন। দ্রষ্টব্য: এটি একটি উচ্চ সংখ্যক অসংযুক্ত কোষ পর্যবেক্ষণ করা স্বাভাবিক। যতক্ষণ পর্যন্ত কিছু কোষ সংযুক্ত থাকে, 3-7 দিনের মধ্যে তাদের থেকে উপনিবেশ তৈরি হতে পারে।
2. কূপ থেকে মিডিয়া সরান এবং প্রতি কূপের তাজা এবং উষ্ণ পিএসসি মিডিয়ার 2 মিলি (6 কূপের জন্য, 1টি কূপের জন্য 12 মিলি এবং 0.5টি কূপের প্লেটের জন্য 24 মিলি) পিপেট করুন। ইনকিউবেটরে প্লেট ফেরত দিন।
3. কোষগুলি 60-70% মিলিত হওয়া পর্যন্ত সরবরাহ করা হয় (সরবরাহকারীর সুপারিশ অনুসরণ করুন)।
4. দ্বিতীয় দিন হিসাবে, কোষগুলি পর্যবেক্ষণ করা উচিত এবং যে কোনও পৃথকীকৃত কোষ পরিষ্কার করা উচিত যা ক্রমবর্ধমান হতে পারে।
5. কোষগুলি পরিষ্কার করতে, পিকিং হুড ব্যবহার করুন এবং একটি পাইপেটের ডগা দিয়ে বিচ্ছিন্ন কোষগুলিকে স্ক্র্যাপ করুন।
6. একবার কক্ষগুলি পরিষ্কার হয়ে গেলে, উপরের ধাপগুলির মতো মিডিয়া পরিবর্তন করুন।

(হিমায়িত hESC/iPSC বা hESC/iPSC পাস করা দেখুন)

লক্ষ্য করুন:

পিএসসি মিডিয়া হাইপোক্সিক পরিবেশে আরও দক্ষ হতে দৃঢ়প্রতিজ্ঞ ছিল। আমরা আরও লক্ষ্য করেছি যে কম পার্থক্য ঘটে যখন কোষগুলি হাইপোক্সিক ইনকিউবেটর বনাম নরমোক্সিকে বৃদ্ধি পায়। অবশেষে, হাইপোক্সিক ইনকিউবেটর ব্যবহার করার সময় বীজযুক্ত কোষগুলির বেঁচে থাকার হার আরও ভাল থাকে।

নরমোক্সিক: 37°C, 21% O₂, 5% CO₂

হাইপোক্সিক: 37°C, 5% O₂, 10% CO₂

ডঃ উইলিয়াম স্ট্যানফোর্ড-এক্সএনইউএমএক্স

13. এইচইএসসি/আইপিএসসি পাস

1. একটি 2 ভাল ম্যাট্রিজেল প্রলিপ্ত প্লেটে 6mL PSC মিডিয়া যোগ করুন এবং একপাশে রাখুন।
2. প্লেটটি পাস করার জন্য নিন এবং কূপ থেকে মিডিয়াটি সরিয়ে ফেলুন এবং একবার 1 মিলি পিবিএস(-/-) দিয়ে ধুয়ে ফেলুন।
3. কূপে 1mL EDTA দ্রবণ যোগ করুন এবং ঘরের তাপমাত্রায় 3-4 মিনিট রেখে দিন। প্লেটটি চারপাশে সরান না কারণ কোষগুলি বিচ্ছিন্ন হওয়া শুরু করতে পারে।
4. EDTA সমাধান সরান এবং PSC মিডিয়ার 1mL যোগ করুন। EDTA কোষে 4 মিনিটের বেশি রেখে দেবেন না কারণ এর ফলে কোষগুলি উঠে যাবে।
5. একটি সেল স্ক্র্যাপার ব্যবহার করে কোষগুলিকে স্ক্র্যাপ করুন এবং PSC মিডিয়া ধারণকারী আপনার প্লেটের 6 টি কূপের মধ্যে কোষগুলিকে ভাগ করুন। উপনিবেশ টুকরা অত্যধিক ভাঙ্গন এড়িয়ে চলুন, এবং স্ক্র্যাপিং সঙ্গে মৃদু হতে চেষ্টা করুন. কোষগুলিকে বড় অংশে রাখার চেষ্টা করুন। প্রয়োজনে ক্লাম্পগুলি ভাঙতে একটি প্রশস্ত মুখের পিপেটের টিপ ব্যবহার করুন। কোষের অত্যধিক ভাঙ্গনের ফলে কোষের মৃত্যু বা অতিবাহিত হওয়ার পর অতিরিক্ত স্বতঃস্ফূর্ত পার্থক্য হতে পারে।
6. 37 এ ইনকিউবেট করুন°C প্রতিটি কূপে সমানভাবে কোষ বিতরণ করার পর (8 চিত্র বা এল আকৃতির ঝাঁকুনি)। 24 ঘন্টার জন্য প্লেট ঝামেলা এড়িয়ে চলুন পরে পাসিং.

বিঃদ্রঃ: একবার কোষগুলি স্ক্র্যাপ করা হয়ে গেলে আপনি যত তাড়াতাড়ি সম্ভব সেগুলিকে নতুন প্লেটে স্থানান্তর করতে চান কারণ কোষগুলি দ্রুত পুনরায় সংযুক্ত হবে (5 মিনিটের মধ্যে)।

যদি EDTA কোষে 4 মিনিটের বেশি সময় ধরে রেখে দেওয়া হয়, কোষগুলি বিচ্ছিন্ন হতে শুরু করতে পারে। যদি এটি ঘটে থাকে, 15mL PSC মিডিয়া সহ একটি 4mL ফ্যালকনে কোষগুলি সংগ্রহ করুন। 130 মিনিটের জন্য 5 rcf এ সেল স্পিন করুন। 1mL মিডিয়া দিয়ে পেলেটটিকে আবার সাসপেন্ড করুন এবং একটি 6টি ওয়েল ম্যাট্রিজেল প্রলিপ্ত প্লেটের মধ্যে সমানভাবে ভাগ করুন (প্রতি কূপ 160uL)।

EDTA সমাধান: 500M EDTA (pH 0.5) এর 8.0uL DPBS (-/-) এর 500mL এ যোগ করুন। 0.9 গ্রাম NaCl যোগ করুন। দ্রবণটিকে জীবাণুমুক্ত করার জন্য ফিল্টার করুন এবং 4 মাস পর্যন্ত 6°C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করুন।

কাগজ থেকে:

রাসায়নিকভাবে সংজ্ঞায়িত সংস্কৃতির পরিস্থিতিতে এনজাইম মুক্ত বিচ্ছিন্নকরণের মাধ্যমে মানবীয় প্লুরোপোটেন্ট স্টেম সেলগুলির উত্তরণ এবং উপনিবেশ সম্প্রসারণ

জিনেট বিয়ার,¹ ড্যানিয়েল আর গুলবার্সন,^2,3 নিকোল জর্জ,⁴লরেন আই,¹ জেফ্রি জোন্স,^4,5 জেমস এ। থমসন,^2,3,6 এবং গুয়োকাই চেন^1,2

14. হিমায়িত hESC/iPSC

1. বায়ো-কুল (নিয়ন্ত্রিত রেট ফ্রিজার) চালু করুন এবং তাপমাত্রা -7 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সামঞ্জস্য করুন।
2. ইনকিউবেটর থেকে কোষগুলি সরান এবং অণুবীক্ষণ যন্ত্রের নীচে সঙ্গম এবং রূপবিদ্যা পর্যবেক্ষণ করুন।
3. যদি কূপগুলি 70% সঙ্গমযুক্ত হয় তবে পুরানো মিডিয়াগুলি সরিয়ে ফেলুন এবং PBS(-/-) দিয়ে একবার ধুয়ে ফেলুন তারপর প্রতি কূপে 1 মিলি ইডিটিএ দ্রবণ (ইডিটিএ দ্রবণের সাথে পাসিং দেখুন) যোগ করুন।
4. 3-4 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় জ্বালান।
5. EDTA সমাধানটি অ্যাসপিরেট করুন এবং 1 মিলি কোল্ড mFreSR মিডিয়া যোগ করুন (বিড়াল#05855, স্টেম সেল টেকনোলজিস)।
6. কোষগুলিকে আলতো করে তুলতে একটি সেল স্ক্র্যাপার ব্যবহার করুন। কোষগুলিকে যতটা সম্ভব বড় খণ্ডে রাখুন এবং উপরে এবং নীচে পাইপ করা এড়িয়ে চলুন।
7. একটি প্রশস্ত মুখের ডগা ব্যবহার করে একটি ক্রায়োটিউবে কোষ/mFreSR স্থানান্তর করুন। ধাপ 8 এর জন্য প্রস্তুত না হওয়া পর্যন্ত বরফের উপর শিশি রাখুন।
8. টিউবগুলিকে বায়ো-কুলে রাখুন এবং 10 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন।
9. তরল নাইট্রোজেন পান।
10. 10 মিনিটের পরে, তরল নাইট্রোজেনে একটি স্প্যাটুলা ডুবিয়ে এবং প্রায় 10-30 সেকেন্ডের জন্য ক্রায়ো-ভায়ালের পাশে স্পর্শ করে বা যতক্ষণ না আপনি ক্রাইও-ভায়ালের পাশে একটি স্ফটিক আকার দেখতে পাচ্ছেন ততক্ষণ পর্যন্ত কোষগুলি বীজ করুন।
11. "PROG" বোতাম টিপে প্রোগ্রাম 1 শুরু করুন এবং আবার বোতাম টিপে প্রোগ্রামের মধ্য দিয়ে যান এবং আপনি 0.5°C/মিনিট হার দেখতে পাবেন। , তারপর "RUN" টিপুন।
12. একবার তাপমাত্রা -65 ডিগ্রি সেলসিয়াসে পৌঁছালে ক্রাইও-টিউবগুলি স্থানান্তরিত এবং তরল নাইট্রোজেনে সংরক্ষণ করা যেতে পারে।

বিকল্প

আরেকটি বিকল্প হল ক্রায়ো-টিউবগুলিকে একটি হিমায়িত পাত্রে (বায়োসিশন-কুলসেল) রাখা এবং রাতারাতি -80 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা। পরের দিন ক্রাইও-টিউবগুলিকে তরল নাইট্রোজেনে (তরল বা বাষ্প পর্যায়ে) নিয়ে যান।

ডঃ উইলিয়াম স্ট্যানফোর্ড-এক্সএনইউএমএক্স