Dari Pengiriman Sel Beku

Sel beku akan diterima dalam alikuot 1 ml pada es kering. Biarkan sel beku sampai dicairkan untuk kultur sel atau tempatkan dalam penyimpanan nitrogen cair jika tidak segera memulai kultur. Namun, disarankan bahwa jika Anda akan menyimpan sel untuk digunakan nanti, tumbuhkan stok segar dan bekukan beberapa ampul. Sel-sel cryopreservasi dalam 45% RPMI-1640, serum betis janin 50%, dan 5% DMSO (tingkat kultur jaringan).

1. Tempatkan 10 ml RPMI-1640, 15% fetal calf serum (FCS), ± antibiotik dalam botol T-25.
2. Biarkan media menyeimbangkan dalam 37 ° C inkubator yang dilembabkan dengan udara 5% CO 2in selama 30 menit.
3. Lelehkan setiap ampul sel beku dalam bak air 37 ° C atau gelas air hangat, satu per satu.
4. Dengan cepat bersihkan bagian luar ampul dengan bantalan prep isopropanol steril, kemudian bungkus bantalan prep sekitar ampul untuk melindungi jari-jari dan retak segel pada ampul di dalam tudung pengaman biologis.
5. Lepaskan 1 ml sel beku dengan pipet Pasteur kaca steril dan tempatkan dalam termos T-25 dengan medium 10 ml. Labeli labu dengan jelas untuk mengidentifikasi setiap baris sel.
6. Tempatkan sel-sel dalam inkubator yang dilembabkan 37 ° C dengan 5% CO 2 di udara.
7. Setelah jam 24, keluarkan 5 ml media dari atas tanpa mengganggu limfosit yang menempel di bagian bawah labu dan ganti dengan 5 ml media yang sudah dipanaskan.
8. Beri makan sel dengan 5 - 6 ml media segar setiap 3 - 4 hari dan pisahkan menjadi kultur baru sesuai kebutuhan.

Dari Pengiriman Budaya Hidup

1. Kultur limfosit hidup akan diterima dalam labu T-25 yang diisi ke atas dengan RPMI-1640, 15% FCS, 1% Penicillin-Streptomycin (Gibco). Tutupnya akan rapat dan ditutup dengan parafilm.
2. Hapus parafilm.
3. Tempatkan kultur dalam inkubator yang dilembabkan 37 ° C dengan 5% CO2 di udara dan biarkan sel mengendap (20 - 30 menit).
4. Dengan menggunakan pipet steril, buang semua kecuali 10 - 15 ml media dan buang.
5. Pasang kembali tutup pada labu yang sedikit longgar agar pertukaran gas (Periksa untuk memastikan tidak ada media pada tutupnya. Jika demikian, Anda mungkin ingin mentransfer ke labu baru.) Tempatkan kembali kultur dalam inkubator dengan 5% CO 2in udara. Mereka harus pulih dalam satu atau dua hari.
6. Beri makan sel dengan media segar setiap 3 - 4 hari dengan menyuspensi kembali agregat sel dan membuang 50 -60% volume dan menggantinya dengan media baru. Sel yang dikeluarkan dari labu dapat digunakan untuk memulai kultur baru sesuai kebutuhan.

Wendy Norris