منجمد سیلوں کی کھیپ سے

منجمد سیل خشک برف پر 1 ملی لیٹر الکوٹس میں وصول کیے جائیں گے۔ خلیوں کو منجمد رکھیں یہاں تک کہ سیل ثقافت کے لئے پگھل جائیں یا مائع نائٹروجن اسٹوریج میں رکھیں اگر ابھی ثقافتوں کا آغاز نہ کریں۔ تاہم ، یہ تجویز کی جاتی ہے کہ اگر آپ بعد میں استعمال کے ل the خلیوں کو ذخیرہ کرنے جارہے ہیں تو ، تازہ ذخیرے میں اضافہ کریں اور متعدد ampoules کو منجمد کریں۔ خلیوں کو 45٪ RPMI-1640 ، 50٪ جنین بچھڑا سیرم ، اور 5٪ DMSO (ٹشو کلچر گریڈ) میں cryopre محفوظ ہیں۔

1. 10 ملی لیٹر RPMI-1640 ، 15٪ جنین بچھڑا سیرم (FCS) ، ± T-25 فلاسک میں اینٹی بائیوٹک رکھیں۔
2. میڈیا کو 37 hum C میں 5 hum C 2in ہوا کے ساتھ 30 ° C humidised انکیوبیٹر میں ہم آہنگی کرنے کی اجازت دیں۔
3. ایک ایک وقت میں ، ایک 37 or C پانی کے غسل میں یا کسی گیلے پانی کا بیکر ، میں منجمد خلیوں کے ہر ایک امپول کو گوندیں۔
4. ایک جراثیم کامل isopropanol پری پیڈ کے ذریعہ امپول کے باہر جلدی سے صاف کریں ، پھر انگلیوں کی حفاظت کے ل the امپول کے ارد گرد پری پیڈ لپیٹیں اور حیاتیاتی حفاظت کے ہڈ کے اندر امپول پر مہر کو پھٹا دیں۔
5. 1 ملی لیٹر کو منجمد خلیوں کو جراثیم سے پاک شیشہ پاسچر پائپیٹ کے ساتھ ہٹائیں اور 25 ملی لیٹر کے ساتھ T-10 فلاسک میں رکھیں۔ ہر سیل لائن کی شناخت کے لئے فلاسک کو واضح طور پر لیبل لگائیں۔
6. 37 CO C ہوا میں 5 CO C کے ساتھ خلیوں کو 2 ° C رطوبت انکیوبیٹر میں رکھیں۔
7. 24 گھنٹوں کے بعد فلاسک کے نچلے حصے میں بسیف لیمفاسیٹس کو پریشان کیے بغیر اوپر سے 5 ملی لیٹر کو درمیانے درجے سے ہٹائیں اور پہلے سے گرم میڈیم کے 5 ملی لیٹر کے ساتھ تبدیل کریں۔
8. ہر 5 - 6 دن میں تازہ میڈیم کے 3 - 4 ملی لیٹر کے ساتھ خلیوں کو کھانا کھلانا اور ضرورت کے مطابق نئی ثقافتوں میں تقسیم کرنا۔

براہ راست ثقافتوں کی کھیپ سے

1. براہ راست لمفوسائٹ کلچرز T-25 فلاسکس میں وصول ہوں گے جو RPMI-1640، 15٪ FCS، 1٪ Penicillin-Streptomycin (Gibco) کے ساتھ ٹاپ پر بھرا ہوا ہے۔ ٹوپیاں تنگ اور پیرافلم کے ساتھ مہر لگیں گی۔
2. پیرافلم کو ہٹا دیں۔
3. ثقافت کو 37 ° C میں ہوا میں 5 CO CO2 کے ساتھ انکیوبیٹر کو ہوا میں رکھیں اور خلیوں کو باہر نکلنے دیں (20 - 30 منٹ)۔
4. جراثیم سے پاک پائپٹ کے استعمال سے درمیانے کے 10 - 15 ملی لیٹر کے علاوہ اور تمام کو ہٹا دیں۔
5. گیس کے تبادلے کی اجازت دینے کے ل cap ٹوپیاں تھوڑی ڈھیلی ہوئں پر رکھیں (یہ یقینی بنائیں کہ ٹوپی کے دھاگوں پر میڈیا نہ ہو۔ ہوا وہ ایک دو دن میں صحت یاب ہوجائیں۔
6. خلیوں کو تازہ میڈیم والے ہر 3 - 4 دن میں سیل ایگریگریٹس کا مقابلہ کرتے ہوئے اور 50-60٪ حجم کو نکال کر اور تازہ میڈیا کے ساتھ تبدیل کرکے کھانا کھلانا۔ ضرورت کے مطابق نئی ثقافتوں کو شروع کرنے کے لئے فلاسک سے نکالے گئے خلیوں کا استعمال کیا جاسکتا ہے۔

وینڈی نورس