د منجمد حجرو له کښت څخه

کنګل شوي حجرې به په 1 ملی لیتر په وچه یخ کې ترلاسه شي. حجرات تر هغه وخته منجمد وساتئ تر څو د حجرو کلتور یا د مایع نایټروجن ذخیره کې ځای په ځای کړئ که چیرې سمدلاسه کلتورونه پیل نه کړئ. په هرصورت ، دا سپارښتنه کیږي چې که تاسو د وروسته کارولو لپاره حجرې ذخیره کړئ ، نو تازه ذخیره وده وکړئ او ډیری ampoules کنګل کړئ. حجرې په 45 RP RPMI-1640 ، 50 fet د جنین خوسکي سیرم ، او 5 D DMSO (د نسج کلتور په درجه) کې کریپټو خوندي دي.

1. د RPMI-10 1640 ml ، 15 fet د جنین خوسکي سیرم (FCS) ،، په T-25 فلاسک کې انټي بیوټیک.
2. میډیا ته اجازه ورکړئ چې په 37 hum C رطوبت لرونکي انکیوبیټر د 5 دقیقو لپاره د 2 id CO 30in هوا سره متوازن کړئ.
3. په یو 37 ° C د اوبو حمام یا د ګرمو اوبو بیکر کې د منجمد حجرو هر ampoule واچوئ ، یو ځل په یوځل.
4. د امپول بهر بهر د جراثیمي isopropanol PR پیډ سره په چټکۍ سره پاک کړئ ، بیا د امپول په شاوخوا کې د پیډ پیډ وتړئ ترڅو د ګوتو ساتنه وکړئ او د بیولوژیکي مصونیت پوړ کې دننه په ampoule کې مهر مات کړئ.
5. د منجمد حجرو 1 ملی لیتره د تعقیم شوي شیشې پیسټور پایپ سره لرې کړئ او د TN 25 فلاسک کې د 10 ملی لیتر سره ځای ونیسئ. په واضح ډول د هر سیل حجرې پیژندلو لپاره فلاسک لیبل کړئ.
6. حجرې په 37 ° C رطوبت شوي انکیوبیټر کې د 5٪ CO 2in هوا کې ځای په ځای کړئ.
7. د 24 ساعتونو وروسته د 5 ملی لیتر منځنۍ برخه له پورته څخه لرې کړئ پرته لدې چې لامبوسایټونه ګډوډ کړئ د فلاسک په لاندینۍ برخه کې ځای په ځای شوي او د 5 ملی لیتر څخه دمخه تودوخه مینځ ته کړئ.
8. حجرو ته په هرو days - days ورځو کې له medium څخه تر m ملی لیتره تازه متوسطه خواړه ورکړئ او د اړتیا په صورت کې په نوو کلتورونو وویشل شي.

د ژوندیو کلتورونو له لیږد څخه

1. ژوندی لیمفاسیټ کلتورونه به په T-25 فلاسکس کې ترلاسه شي چې د RPMI-1640 ، 15 F FCS ، 1 Pen Penicillin-Streptomycin (ګبکو) سره سر ته ډک شوي. کیپس به کلک وي او د پارفیلم سره سیل شوي وي.
2. پارافلم لرې کړئ.
3. کلتورونه په 37 ° C رطوبت لرونکي انکیوبیټر کې په هوا کې د 5 CO CO2 سره ځای ورکړئ او حجرو ته اجازه ورکړئ چې بهر شي (20 - 30 دقیقې).
4. د بې تعقیب پایپټ کارول د 10 - 15 ملی لیتر څخه علاوه ټول لرې کړئ او پریږدئ.
5. د غازو تبادلې ته اجازه ورکولو لپاره کیپسونه په لږ فلز شوي ځای کې ځای په ځای کړئ (د دې لپاره ډاډ ترلاسه کړئ چې کیپ تارونه په دوی باندې رسنۍ نه لري. که داسې وي نو تاسو ممکن وغواړئ نوي فلاسک ته یې انتقال کړئ.) کلتورونه په 5٪ CO 2in سره په انکیوبیټر کې ځای په ځای کړئ. هوا دوی باید په یوه یا دوه ورځو کې روغ شي.
6. حجرو ته په هره 3 - 4 ورځو کې د حجرو مجموعې بیا تنظیمولو او حجم 50 - 60 removing حذف کولو او د تازه میډیا سره ځای په ځای کولو سره تازه تغذیه کړئ. د فلاسک څخه لرې شوي حجرې د اړتیا سره سم د نوي کلتورونو پیل کولو لپاره کارول کیدی شي.

وینډي نوریس