फ्रोजन सेल्सच्या शिपमेंट कडून

गोठलेल्या पेशी कोरड्या बर्फावरील एक्सएनयूएमएक्स मिली एलिकॉडॉट्समध्ये प्राप्त होतील. सेल संस्कृतीसाठी वितळल्याशिवाय पेशी गोठवून ठेवा किंवा संस्कृती त्वरित सुरू न केल्यास द्रव नायट्रोजन स्टोरेजमध्ये ठेवा. तथापि, अशी शिफारस केली जाते की जर आपण नंतर वापरण्यासाठी पेशी संचयित करत असाल तर ताजे साठा वाढवा आणि एकाधिक अँम्प्युल्स गोठवा. पेशी एक्सएनयूएमएक्स% आरपीएमआय-एक्सएनयूएमएक्स, एक्सएनयूएमएक्स% गर्भाच्या वासराची सीरम आणि एक्सएनयूएमएक्स% डीएमएसओ (टिशू कल्चर ग्रेड) मध्ये क्रायोप्रिझर्व्ह आहेत.

1. टीपी-एक्सएनयूएमएक्स फ्लास्कमध्ये आरपीएमआय-एक्सएनयूएमएक्सचे एक्सएनयूएमएक्स मिली, एक्सएनयूएमएक्स% भ्रूळ वासरू सीरम (एफसीएस), ± प्रतिजैविक ठेवा.
2. 37 मिनिटांसाठी 5 CO C ह्युमिनिफाइड इनक्यूबेटरमध्ये 2 ° C मध्ये मीडियाला समतोल साधण्याची परवानगी द्या.
3. गोठलेल्या पेशींचे प्रत्येक एम्प्यूल एक्सएनयूएमएक्स water सी वॉटर बाथमध्ये किंवा कोमट पाण्यातील बीकरमध्ये, एकावेळी एक द्या.
4. एम्प्यूलच्या बाहेरील बाजूस पटकन निर्जंतुकीकरण असलेल्या आयसोप्रोपानॉल प्रेप पॅडने त्वरीत स्वच्छ करा, नंतर बोटांच्या संरक्षणासाठी एम्पौलच्या सभोवतालच्या प्रेप पॅडला गुंडाळा आणि जैविक सुरक्षा प्रवाहाच्या आत असलेल्या एम्प्यूलवर सील क्रॅक करा.
5. निर्जंतुकीकरण काचेच्या पाश्चर पाइपेटसह गोठलेल्या पेशींचे एक्सएनयूएमएक्स मिली काढून टाका आणि एक्सएनयूएमएक्स एमएल मध्यम टी-एक्सएनयूएमएक्स फ्लास्कमध्ये ठेवा. प्रत्येक सेल लाइन ओळखण्यासाठी फ्लास्कवर स्पष्टपणे लेबल लावा.
6. कक्षांना 37 ° C आर्द्रता असलेल्या इनक्यूबेटरमध्ये हवेत 5% CO 2in ठेवा.
7. 24 तासांनंतर फ्लास्कच्या तळाशी स्थायिक झालेल्या लिम्फोसाइट्सला त्रास न देता वरून 5 मिलीलीटर मध्यम वरून काढा आणि प्री-वॉर्म मध्यमच्या एक्सएनयूएमएक्स मिलीसह बदला.
8. दर 5 - 6 दिवसांनी ताज्या माध्यमात 3 - 4 मिलीलीटर असलेल्या पेशींना खायला द्या आणि आवश्यकतेनुसार नवीन संस्कृतींमध्ये विभाजित करा.

थेट संस्कृतींच्या शिपमेंट कडून

1. आरपीएमआय-एक्सएनयूएमएक्स, एक्सएनयूएमएक्स% एफसीएस, एक्सएनयूएमएक्स% पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन (गिबको) सह शीर्षस्थानी भरलेल्या टी-एक्सएनयूएमएक्स फ्लास्कमध्ये थेट लिम्फोसाइट संस्कृती प्राप्त होतील. सामने कडक आणि पॅराफिल्मसह सीलबंद असतील.
2. पॅराफिल्म काढा.
3. 37 5 डिग्री सेल्सियस तापमानात आर्द्रता असलेल्या इनक्यूबेटरमध्ये 2 20 डिग्री सेल्सिअस तापमानात संस्कृती ठेवा आणि पेशी बाहेर जाण्यास परवानगी द्या (२० - minutes० मिनिटे).
4. एक निर्जंतुकीकरण पाइपेटचा वापर करून मध्यम ते वगळता सर्व काढा आणि टाकून द्या.
5. गॅस एक्सचेंजला अनुमती देण्यासाठी फ्लास्कवर परत कॅप्स परत सैल करा (कॅप थ्रेड्सवर मीडिया नसल्याचे सुनिश्चित करा. तसे असल्यास आपल्याला नवीन फ्लास्कवर हस्तांतरित करावेसे वाटेल.) संस्कृती परत एक्सएनयूएमएक्स% सीओ एक्सएनयूएमएक्सिनसह इनक्यूबेटरमध्ये ठेवा. हवा ते एक किंवा दोन दिवसात बरे व्हावेत.
6. दर 3 - 4 दिवसांनी सेल एकत्रित करून आणि 50-60% व्हॉल्यूम काढून टाकून आणि ताज्या माध्यमांसह पुनर्स्थित करून ताज्या माध्यमासह पेशींना दर चार - चार दिवस आहार द्या. आवश्यकतेनुसार नवीन संस्कृती सुरू करण्यासाठी फ्लास्कमधून काढून टाकलेल्या सेलचा वापर केला जाऊ शकतो.

वेंडी नॉरिस