Мұздатылған жасушаларды жіберуден

Мұздатылған жасушалар 1 мл аликвоталарда құрғақ мұз үстіне түседі. Егер клеткалардың культурасы ерігенше мұздатылған күйде ұстаңыз немесе бірден өсірілмеген болса, сұйық азот қоймасына салыңыз. Алайда, егер сіз клеткаларды кейінірек пайдалану үшін сақтағыңыз келсе, жаңа қорларды өсіріп, бірнеше ампулаларды қатырып тастау ұсынылады. Жасушалар 45% RPMI-1640, 50% ұрықтың бұзау сарысуында және 5% DMSO-да (тіндердің культуралық дәрежесі) криопроқорытылған.

1. Т-ХНУМХ колбасына 10 мл RPMI-1640, 15% ұрықтың бұзау сарысуын (FCS), ± антибиотиктерді салыңыз.
2. Тасымалдағышқа 37 ° C ылғалдандырылған инкубаторды 5% CO 2in ауасымен 30 минут ішінде теңестіруге мүмкіндік беріңіз.
3. Мұздатылған жасушалардың әр ампуласын 37 ° C ваннаға немесе жылы судың стаканына бір-бірлеп ерітіңіз.
4. Ампуланың сыртын стерильденген изопропанолға арналған төсенішпен тез тазалаңыз, содан кейін саусақтарыңызды қорғау үшін ампуланың айналасын төсеңіз және биологиялық қауіпсіздік сорғышының ішіне ампуладағы пломбаны сындырыңыз.
5. 1 мл мұздатылған жасушаларды стерильденген әйнек пастерімен алып тастаңыз және 25 мл орташа мөлшері бар T-10 колбасына салыңыз. Әр ұяшық сызығын анықтау үшін колбаны нақты белгілеңіз.
6. 37 ° C ылғалдандырылған инкубаторға 5% CO 2 бар ауаны салыңыз.
7. 24 сағаттан кейін колбаның түбінде орналасқан лимфоциттерді мазаламай 5 мл ортаны жоғарыдан алыңыз және 5 мл алдын ала қыздырылған ортамен ауыстырыңыз.
8. 5 - 6 күн сайын жасушаларды 3 - 4 мл жаңа ортамен тамақтандырыңыз және қажет болған жағдайда жаңа дақылдарға бөліңіз.

Тірі дақылдарды жөнелтуден

1. Тірі лимфоциттік культуралар жоғарыдан толтырылған RPMI-25, 1640% FCS, 15% пенициллин-стрептомицинмен (Гибко) толтырылған T-1 колбаларында қабылданады. Қақпақтар тығыз және парафильммен тығыздалады.
2. Парафильмді алыңыз.
3. Өсіру дақылдарын ауада 37% СО5 бар 2 ° С ылғалданған инкубаторға орналастырыңыз және жасушалардың шөгуіне мүмкіндік беріңіз (20 - 30 минут).
4. Стерильді тамшуырды қолданып, 10-15 мл қоспадан басқасының барлығын алып тастаңыз және жойыңыз.
5. Газ алмасуға мүмкіндік беретін аздап босатылған колбаларға қақпақтарды қайта салыңыз (қақпақтардың жіптерінде баспа материалдары жоқ екеніне көз жеткізіңіз. Олай болса, сіз жаңа колбаға ауысқыңыз келуі мүмкін.) 5% CO 2in бар культураларды инкубаторға қайта салыңыз. ауа. Олар бір-екі күнде қалпына келеді.
6. Әр 3-4 күн сайын жасушаларды жаңа ортамен тамақтандырыңыз, жасуша агрегаттарын қайта шығарып, көлемнің 50 -60% алып тастаңыз және жаңа медиамен ауыстырыңыз. Колбадан алынған жасушалар қажет болған жағдайда жаңа дақылдарды бастау үшін қолданыла алады.

Венди Норрис