Бетті таңдаңыз

Лимфобласт жасушасы

Мәдениет хаттамалары

 

Трансформацияланған лимфоциттерді өсіру хаттамасы

Лимфобласттарды өсіру хаттамасы

Өсу ортасы

RPMI 1640 – ThermoFisher # 11875
15% ұрықтың ірі қара сарысуы (FBS) – ThermoFisher #10437-028
1% (1X) пенициллин-стрептомицин (қосымша) – ThermoFisher #15140-122

Жалпы ескертпелер

  • Өсіру ортасы әрқашан инкубаторда 37°C, 5% CO тепе-теңдікте болуы керек.2 қолданар алдында 30 минут бойы
  • Әрқашан желдеткіш қақпағы бар колбаларды пайдаланыңыз
  • Колбаны әрқашан тік күйде инкубациялаңыз
  • T25 колбада 20 мл-ден аспауы керек

Мұздатылған жасушаларды еріту

Мұздатылған жасушалар құрғақ мұзда 1 мл аликвотта алынады. Жасуша культурасы үшін ерігенше жасушаларды мұздатылған күйде ұстаңыз немесе культураларды дереу бастамасаңыз, сұйық азот қоймасына қойыңыз. Дегенмен, егер сіз жасушаларды кейінірек пайдалану үшін сақтағыңыз келсе, жаңа қорларды өсіріп, бірнеше ампуланы мұздату ұсынылады. Жасушалар 45% RPMI-1640, 50% FBS және 5% DMSO (тін культурасының дәрежесі) криоконсервіленген.

    1. 10 мл RPMI-1640, 15% ұрықтың ірі қара сарысуын (FBS), ± антибиотиктерді желдеткіш қақпағы бар Т-25 колбаға салыңыз.
    2. Тасымалдағыштарды 5% CO бар 37°C ылғалдандырылған инкубаторда тепе-теңдікке келтіруге мүмкіндік беріңіз.2 ауада 30 минут. Колбаларды тік күйде инкубациялау керек.
    3. Мұздатылған жасушалардың әрбір ампуласын немесе құтыны 37°C су моншасында немесе жылы су құйылған стақанда бір-бірден ерітіңіз.
    4. Ампуланың немесе флаконның сыртын 70% этанолымен жылдам тазалаңыз. Егер жасушалар шыны ампулада болса, саусақтарыңызды шыны сынықтарынан қорғау үшін ампуланы мұқият сындырыңыз.
    5. 1 мл мұздатылған жасушаларды стерильді тамшуырмен алып, 10 мл ортасы бар Т-25 колбаға салыңыз. Әрбір ұяшық сызығын анықтау үшін колбаны анық белгілеңіз.
    6. Колбаны 5% CO бар 37°C ылғалданған инкубаторға салыңыз2 ауада. Колбаларды тік күйде инкубациялау керек.
    7. 24 сағаттан соң колбаның түбіне қоныстанған лимфоциттерді бұзбай жоғарыдан 5 мл ортаны алып, орнына 5 мл алдын ала қыздырылған ортаны қояды.
    8. Лимфобласт жасуша культурасының хаттамасымен жалғастырыңыз.

Лимфобласт мәдениеті

    1. Ерігеннен кейін үш-төрт күннен кейін жасушаларды санаңыз. Жасушалар жабыспайды және шоғырланып өседі. Жұмсақ тамшуыр арқылы түйірлерді бөлшектеңіз.
    2. Ұяшықтарды санау.
    3. Ең дұрысы, жасуша концентрациясы 2 х 10 аспауы керек6 жасушалар/мл.
    4. Жасуша концентрациясына байланысты жасушаларды қайта жібереді, бөледі немесе мұздатады.
    5. 5-6 мл теңестірілген өсу ортасын қосу арқылы қайта қоректендіріңіз.
    6. Жаңа дақылдарды 2 х 10 кем емес мөлшерде себіңіз5 жасушалар/мл.
    7. Ұяшықтар шамамен 5 x 10 мұздатылған болуы керек6 жасушалар/мл. Ұяшықты мұздату протоколын орындаңыз.

Лимфобласттарды мұздату

    1. Ұяшықтар шамамен 5 x 10 мұздатылған болуы керек6 жасушалар/мл.
    2. Клеткалардың тиісті көлемін 15 немесе 50 мл конустық түтікке ауыстырыңыз.
    3. 4°C температурада 100 хг 10 минут бойы центрифугалау.
    4. Ортаны алып тастап, салқын мұздату ортасының тиісті көлемінде қайта суспензия.
    5. Әрқайсысы 1 мл жасушаларды криовиальға ауыстырыңыз.
    6. Криовиалды мұздату камерасына салыңыз және камераны түні бойы -80°C мұздатқышқа салыңыз.
    7. Келесі күні криовиалды сұйық азотқа ауыстырыңыз.

Қосымша ақпарат алу үшін хабарласыңыз:

Лесли Б. Гордон, MD, PhD

Браун университетінің педиатрия зерттеулерінің профессоры Уоррен Альперт медициналық мектебі және педиатрия кафедрасы, Хасбро балалар ауруханасы, Провиденс, RI анестезия бөлімі, Бостон балалар ауруханасы және Гарвард медициналық мектебі, Бостон, MA медициналық директоры, Progeria зерттеу қоры

Телефон: 978-535-2594
Факс: 508-543-0377
lgordon@progeriaresearch.org

Венди Норрис
PRF жасуша және ұлпа банкі
Телефон: 401-274-1122 x 48063
wnorris@brownhealth.org
kkKazakh