냉동 세포 배송부터

냉동 세포는 드라이아이스에 1ml 분취량으로 제공됩니다. 세포 배양을 위해 해동될 때까지 세포를 냉동 상태로 유지하거나 즉시 배양을 시작하지 않는 경우 액체 질소 저장소에 보관하십시오. 그러나 나중에 사용하기 위해 세포를 보관하려는 경우 신선한 주식을 키우고 여러 앰플을 동결하는 것이 좋습니다. 세포는 45% RPMI-1640, 50% 소 태아 혈청 및 5% DMSO(조직 배양 등급)에서 동결 보존됩니다.

1. RPMI-10, 1640% 태아 소 혈청(FCS), ±항생제 15ml를 T-25 플라스크에 넣습니다.
2. 미디어가 37분 동안 5% CO 2in 공기와 함께 30°C 가습 인큐베이터에서 평형을 이루도록 합니다.
3. 냉동 세포의 각 앰플을 37°C 수조 또는 미지근한 물이 담긴 비이커에서 한 번에 하나씩 해동합니다.
4. 멸균된 이소프로판올 프렙 패드로 앰플 외부를 재빠르게 세척한 후, 프렙 패드를 앰플 주위로 감싸 손가락을 보호하고 생물학적 안전 후드 내부의 앰플 밀봉을 깨뜨립니다.
5. 멸균 유리 파스퇴르 피펫으로 냉동 세포 1ml를 제거하고 배지 25ml가 들어 있는 T-10 플라스크에 넣습니다. 각 세포주를 식별하기 위해 플라스크에 명확하게 라벨을 붙입니다.
6. 공기 중 37% CO5가 있는 2°C 가습 인큐베이터에 세포를 놓습니다.
7. 24시간 후 플라스크 바닥에 침착된 림프구를 방해하지 않고 상단에서 배지 5ml를 제거하고 미리 데운 배지 5ml로 교체합니다.
8. 5~6일마다 3~4ml의 신선한 배지를 세포에 공급하고 필요에 따라 새로운 배양으로 나눕니다.

살아있는 문화의 선적에서

1. 살아있는 림프구 배양은 RPMI-25, 1640% FCS, 15% 페니실린-스트렙토마이신(Gibco)으로 상단까지 채워진 T-1 플라스크에 수용됩니다. 캡은 단단하고 파라필름으로 밀봉됩니다.
2. 파라필름을 제거합니다.
3. 공기 중에 37% CO5가 있는 2°C 가습 인큐베이터에 배양을 놓고 세포가 가라앉도록 합니다(20 – 30분).
4. 멸균 피펫을 사용하여 10 – 15 ml의 배지를 제외한 모든 배지를 제거하고 버립니다.
5. 가스 교환이 가능하도록 약간 느슨하게 플라스크에 캡을 다시 놓습니다(캡 스레드에 미디어가 없는지 확인하십시오. 그렇다면 새 플라스크로 옮길 수 있습니다.) 5% CO 2in가 있는 인큐베이터에 문화를 다시 놓습니다. 공기. 그들은 하루나 이틀 안에 회복될 것입니다.
6. 세포 응집체를 재현탁하고 부피의 3-4%를 제거하고 신선한 배지로 교체하여 50-60일마다 신선한 배지로 세포를 공급합니다. 플라스크에서 제거된 세포는 필요에 따라 새로운 배양을 시작하는 데 사용할 수 있습니다.

웬디 노리스