உறைந்த கலங்களின் கப்பலில் இருந்து

உலர் செல்கள் உலர்ந்த பனியில் 1 மில்லி அலிகோட்களில் பெறப்படும். கலாச்சாரங்களை இப்போதே தொடங்காவிட்டால், செல் கலாச்சாரத்திற்காக அல்லது திரவ நைட்ரஜன் சேமிப்பகத்தில் வைக்கப்படும் வரை செல்களை உறைந்து வைத்திருங்கள். இருப்பினும், பிற்கால பயன்பாட்டிற்காக நீங்கள் கலங்களை சேமிக்கப் போகிறீர்கள் என்றால், புதிய பங்குகளை வளர்த்து பல ஆம்பூல்களை உறைய வைக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. செல்கள் 45% RPMI-1640, 50% கரு கன்று சீரம் மற்றும் 5% DMSO (திசு வளர்ப்பு தரம்) ஆகியவற்றில் கிரையோபிரெஸ் செய்யப்பட்டுள்ளன.

1. RPMI-10 இன் 1640 மில்லி, 15% கரு கன்று சீரம் (FCS), ± T-25 பிளாஸ்கில் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகளை வைக்கவும்.
2. 37 நிமிடங்களுக்கு 5% C ஈரப்பதமான இன்குபேட்டரில் 2% CO 30in காற்றில் சமப்படுத்த ஊடகத்தை அனுமதிக்கவும்.
3. உறைந்த கலங்களின் ஒவ்வொரு ஆம்பூலையும் ஒரு 37 water C நீர் குளியல் அல்லது மந்தமான தண்ணீரில் ஒரு பீக்கர், ஒரு நேரத்தில் ஒன்றைக் கரைக்கவும்.
4. ஆம்பூலின் வெளிப்புறத்தை ஒரு மலட்டு ஐசோபிரபனோல் ப்ரெப் பேட் மூலம் விரைவாக சுத்தம் செய்து, பின்னர் விரல்களைப் பாதுகாக்க ஆம்பூலைச் சுற்றி ப்ரெப் பேட்டை மடக்கி, ஒரு உயிரியல் பாதுகாப்பு பேட்டை உள்ளே ஆம்பூலில் உள்ள முத்திரையை உடைக்கவும்.
5. உறைந்த கலங்களின் 1 மில்லி ஒரு மலட்டு கண்ணாடி பாஷர் பைப்பை அகற்றி, T-25 பிளாஸ்கில் 10 மில்லி நடுத்தரத்துடன் வைக்கவும். ஒவ்வொரு செல் கோட்டையும் அடையாளம் காண பிளாஸ்கை தெளிவாக லேபிளிடுங்கள்.
6. கலங்களை ஒரு 37 ° C ஈரப்பதமான இன்குபேட்டரில் 5% CO 2in காற்றில் வைக்கவும்.
7. 24 மணிநேரங்களுக்குப் பிறகு, குப்பையின் அடிப்பகுதியில் குடியேறிய லிம்போசைட்டுகளுக்கு இடையூறு விளைவிக்காமல் மேலே இருந்து 5 மில்லி நடுத்தரத்தை அகற்றி, முன் சூடேற்றப்பட்ட நடுத்தரத்தின் 5 மில்லி மூலம் மாற்றவும்.
8. ஒவ்வொரு 5 - 6 நாட்களுக்கும் 3 - 4 மில்லி புதிய நடுத்தரத்துடன் கலங்களுக்கு உணவளித்து, தேவைக்கேற்ப புதிய கலாச்சாரங்களாகப் பிரிக்கவும்.

நேரடி கலாச்சாரங்களின் கப்பலில் இருந்து

1. RPMI-25, 1640% FCS, 15% Penicillin-Streptomycin (Gibco) உடன் நிரப்பப்பட்ட T-1 ஃபிளாஸ்களில் நேரடி லிம்போசைட் கலாச்சாரங்கள் பெறப்படும். தொப்பிகள் இறுக்கமாகவும், பாராஃபில்முடன் மூடப்பட்டிருக்கும்.
2. பாராஃபில்மை அகற்று.
3. 37 ° C ஈரப்பதமான இன்குபேட்டரில் 5% CO2 காற்றில் வைக்கவும், செல்கள் வெளியேற அனுமதிக்கவும் (20 - 30 நிமிடங்கள்).
4. ஒரு மலட்டு குழாயைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் 10 - 15 மில்லி நடுத்தரத்தை தவிர்த்து அனைத்தையும் நிராகரிக்கவும்.
5. எரிவாயு பரிமாற்றத்தை அனுமதிக்க மீண்டும் தளர்த்தப்பட்ட ஃபிளாஸ்களில் தொப்பிகளை வைக்கவும் (தொப்பி நூல்களில் ஊடகங்கள் இல்லை என்பதை உறுதிப்படுத்திக் கொள்ளுங்கள். அப்படியானால் நீங்கள் ஒரு புதிய குடுவைக்கு மாற்ற விரும்பலாம்.) கலாச்சாரங்களை மீண்டும் இன்குபேட்டரில் 5% CO 2in உடன் வைக்கவும் ஒளிபரப்பப்படுகின்றன. அவர்கள் ஓரிரு நாட்களில் மீட்க வேண்டும்.
6. ஒவ்வொரு 3 - 4 நாட்களுக்கும் கலங்களின் தொகுப்புகளை மறுசீரமைப்பதன் மூலமும், 50 -60% அளவை நீக்கி, புதிய மீடியாவுடன் மாற்றுவதன் மூலமும் கலங்களுக்கு புதிய நடுத்தரத்துடன் உணவளிக்கவும். பிளாஸ்கிலிருந்து அகற்றப்பட்ட கலங்கள் தேவைக்கேற்ப புதிய கலாச்சாரங்களைத் தொடங்க பயன்படுத்தப்படலாம்.

வெண்டி நோரிஸ்