फ्रोजन सेल के शिपमेंट से

जमी हुई कोशिकाओं को सूखी बर्फ पर एक्सएनयूएमएक्स एमएल एलिकोट्स में प्राप्त किया जाएगा। सेल संस्कृति या तरल नाइट्रोजन भंडारण में जगह के लिए विगलन जब तक कोशिकाओं को जमे हुए रखें, अगर संस्कृतियों को तुरंत शुरू न करें। हालांकि, यह अनुशंसा की जाती है कि यदि आप बाद में उपयोग के लिए कोशिकाओं को संग्रहीत करने जा रहे हैं, तो ताजा स्टॉक बढ़ाएं और कई ampoules फ्रीज करें। 1% RPMI-45, 1640% भ्रूण बछड़ा सीरम, और 50% DMSO (टिशू कल्चर ग्रेड) में कोशिकाएं क्रायोप्रेसिव की जाती हैं।

1. RPMI-10, 1640% भ्रूण बछड़ा सीरम (FCS), T एंटीबायोटिक दवाओं को एक T-15 फ्लास्क में रखें।
2. 37 मिनट के लिए 5% CO 2in हवा के साथ एक 30 ° C के नम इनक्यूबेटर में मीडिया को संतुलित करने की अनुमति दें।
3. एक 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान या गुनगुने पानी के बीकर में जमे हुए कोशिकाओं के प्रत्येक ampoule को एक समय में पिघलाएं।
4. एक बाँझ isopropanol प्रस्तुत करने का पैड के साथ ampoule के बाहर जल्दी से साफ, तो उंगलियों की रक्षा के लिए ampoule के आसपास प्रस्तुत करने का पैड लपेटो और एक जैविक सुरक्षा हुड के भीतर ampoule पर सील दरार।
5. एक बाँझ कांच पाश्चर pipet के साथ जमे हुए कोशिकाओं के 1 मिलीलीटर निकालें और मध्यम के 25 मिलीलीटर के साथ एक T-10 फ्लास्क में रखें। प्रत्येक सेल लाइन की पहचान करने के लिए स्पष्ट रूप से लेबल फ्लास्क।
6. 37% CO 5in हवा के साथ एक 2 ° C के आर्द्रीकृत इनक्यूबेटर में कोशिकाओं को रखें।
7. 24 घंटों के बाद फ्लास्क के तल पर बसे लिम्फोसाइटों को परेशान किए बिना ऊपर से मध्यम के 5 मिलीलीटर को हटा दें और पूर्व-गर्म माध्यम के 5 मिलीलीटर के साथ बदलें।
8. हर 5 - 6 दिनों में ताजा माध्यम के 3 - 4 मिलीलीटर के साथ कोशिकाओं को खिलाएं और आवश्यकतानुसार नई संस्कृतियों में विभाजित करें।

लाइव कल्चर की शिपमेंट से

1. लाइव लिम्फोसाइट संस्कृतियों को RPMI-25, 1640% FCS, 15% पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन (गिब्को) के साथ शीर्ष पर भरे हुए T-1 फ्लास्क में प्राप्त होंगे। कैप्स को पैराफिल्म के साथ कड़ा और सील किया जाएगा।
2. पैराफिल्म निकालें।
3. हवा में 37% सीओ 5 के साथ 2 डिग्री सेल्सियस के आर्द्रीकृत इनक्यूबेटर में संस्कृतियों को रखें और कोशिकाओं को बाहर निकालने की अनुमति दें (20 - 30 मिनट)।
4. एक बाँझ पिपेट का उपयोग करके मध्यम के 10 लेकिन 15 मिलीलीटर को हटा दें और त्यागें।
5. गैस एक्सचेंज की अनुमति देने के लिए फ्लैक्स पर कैप्स को थोड़ा ढीला रखें। (सुनिश्चित करें कि कैप थ्रेड्स उन पर मीडिया नहीं है। यदि ऐसा है तो आप एक नए फ्लास्क में ट्रांसफर करना चाहते हैं।) इनक्यूबेटर में एक्सन्यूमैक्स सीओ एक्सन्यूमिन के साथ संस्कृतियों को वापस रखें। वायु। उन्हें एक-दो दिन में ठीक हो जाना चाहिए।
6. सेल एग्रीगेट का पुनरुत्पादन करके और वॉल्यूम के 3 -4% को हटाकर ताजा मीडिया के साथ प्रतिस्थापित करके हर 50 - 60 दिनों में ताजा माध्यम के साथ कोशिकाओं को खिलाएं। कुप्पी से हटाए गए सेल का उपयोग आवश्यकतानुसार नई संस्कृतियों को शुरू करने के लिए किया जा सकता है।

वेंडी नॉरिस