হিমায়িত কক্ষের চালান থেকে

হিমায়িত কক্ষগুলি শুকনো বরফে 1 মিলি এলিকোয়টে প্রাপ্ত হবে। এখনই সংস্কৃতি শুরু না করা হলে সেল সংস্কৃতি বা তরল নাইট্রোজেন স্টোরেজে রাখার জন্য কোষগুলি হিমায়িত রাখুন। যাইহোক, এটি প্রস্তাবিত হয় যে আপনি যদি পরবর্তীকালে ব্যবহারের জন্য কোষগুলি সঞ্চয় করতে চলেছেন তবে তাজা স্টকগুলি বড় করুন এবং একাধিক ampoules হিমশীতল করুন। কোষগুলি 45% RPMI-1640, 50% ভ্রূণ বাছুরের সিরাম এবং 5% DMSO (টিস্যু সংস্কৃতি গ্রেড) এ ক্রিওপ্রিজারভড রয়েছে।

1. XMUM-10 এর 1640 মিলি, 15% ভ্রূণ বাছুর সিরাম (এফসিএস), T একটি টি-এক্সএনএমএক্স ফ্লাস্কে অ্যান্টিবায়োটিক রাখুন।
2. 37 মিনিট 5% C 2% CO 30in বায়ু সহ একটি XNUMX ° C হিমিটেড ইনকিউবেটারে মিডিয়াকে সামঞ্জস্য করার মঞ্জুরি দিন।
3. 37 ° C জলে স্নান বা হালকা গরম পানির একটি বিকারে হিমায়িত কোষগুলির প্রতিটি অ্যাম্পুল একবারে এক বার Tha
4. জীবাণুমুক্ত আইসোপ্রোপানল প্রিপ প্যাড দিয়ে অ্যাম্পুলের বাইরের অংশটি দ্রুত সাফ করুন, তারপরে আঙ্গুলগুলি রক্ষা করার জন্য অ্যাম্পুলের চারপাশে প্রিপ প্যাডটি জড়িয়ে রাখুন এবং জৈবিক সুরক্ষা হুডের ভিতরে এমপুলের উপর সীলটি ফাটান।
5. জীবাণুমুক্ত কাচের পাস্তর পাইপেটের সাথে হিমায়িত কোষগুলির 1 মিলি সরান এবং 25 মিলি মিডিয়ামের সাথে একটি টি-এক্সএনইউএমএক্স ফ্লাস্কে রাখুন। প্রতিটি কক্ষের লাইন চিহ্নিত করতে ফ্লাস্ককে স্পষ্টভাবে লেবেল করুন।
6. 37% CO 5 বায়ুতে একটি 2 hum C হিমিটেড ইনকিউবেটারে ঘরগুলি রাখুন।
7. এক্সএনএমএক্স ঘন্টা পরে ফ্ল্যাশকের নীচে স্থিত হওয়া লিম্ফোসাইটগুলি বিঘ্নিত না করে উপরে থেকে 24 মিলি মাঝারিটি সরান এবং প্রাক-উষ্ণ মাধ্যমের 5 মিলি প্রতিস্থাপন করুন।
8. প্রতি 5 - 6 দিন পরে 3 - 4 মিলি তাজা মাধ্যমের সাথে কোষগুলিকে খাওয়ান এবং প্রয়োজন অনুসারে নতুন সংস্কৃতিতে বিভক্ত করুন।

সরাসরি সংস্কৃতির চালান থেকে From

1. লাইভ লিম্ফোসাইট সংস্কৃতিগুলি RPMI-25, 1640% FCS, 15% পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন (গিবকো) দিয়ে শীর্ষে ভরা টি-এক্সএনএমএমএক্স ফ্লাস্কে পাবেন। ক্যাপগুলি প্যারাফিল্ম দিয়ে শক্ত এবং সিল করা হবে।
2. প্যারাফিল্ম সরান।
3. সংস্কৃতিগুলিকে একটি 37 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় আর্দ্রতাযুক্ত ইনকিউবেটরকে 5% সিও 2 বায়ুতে রাখুন এবং কোষগুলি স্থির হয়ে উঠতে দিন (20 - 30 মিনিট)।
4. একটি জীবাণুমুক্ত পাইপ ব্যবহার করে 10 - 15 মিলি মাঝারিটি বাদ দিয়ে সমস্ত ফেলে দিন।
5. গ্যাস এক্সচেঞ্জের অনুমতি দেওয়ার জন্য ক্যাপগুলি সামান্য আলগা করে ফ্ল্যাস্কে রাখুন (ক্যাপ থ্রেডগুলিতে মিডিয়া নেই তা নিশ্চিত করার জন্য চেক করুন so যদি আপনি কোনও নতুন ফাস্কে স্থানান্তর করতে চাইতে পারেন the) সংস্কৃতিগুলিকে এক্সএনএমএক্সএক্স% সিএন এক্সএনএমএমএস দিয়ে ইনকিউবেটারে ফিরে রাখুন) বাতাস। তাদের এক বা দুই দিনের মধ্যে সুস্থ হওয়া উচিত।
6. প্রতি 3 - 4 দিন পরের মাধ্যম সহ ঘরগুলি ফিড দিন কক্ষের সংমিশ্রণগুলি পুনরায় স্থির করে এবং 50 -60% ভলিউমটি সরিয়ে এবং তাজা মিডিয়া প্রতিস্থাপন করে। ফ্লাস্ক থেকে সরানো ঘরগুলি প্রয়োজন অনুসারে নতুন সংস্কৃতি শুরু করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।

ভেন্ডি নরিস