பி.ஆர்.எஃப் செல் கோடுகளை தாவிங்

1. 37˚C நீர் குளியல் கலங்களை வேகமாக கரைக்கவும்.
2. குப்பியின் வெளிப்புறத்தை 70% எத்தனால் கொண்டு துடைக்கவும்.
3. கரைந்த கலங்களை 25 மில்லி வளர்ச்சி ஊடகங்களைக் கொண்ட T5 குடுவைக்கு மாற்றவும்.
4. ஒரே இரவில் 37˚C இன்குபேட்டரில் குடுவை வைக்கவும்.
5. அடுத்த நாள், செல்கள் இணைக்கப்பட்டுள்ளதா என்பதை உறுதிப்படுத்த நுண்ணோக்கின் கீழ் கவனிக்கவும்.
6. மீடியாவை அகற்றி புதிய வளர்ச்சி ஊடகத்துடன் மாற்றவும்.

பி.ஆர்.எஃப் செல் கோடுகளை துணைப்பண்படுத்துதல்

1. சங்கமமாக இருக்கும்போது கலங்களை பிரிக்க வேண்டும்.
2. கலங்களை பிரிக்க (கொடுக்கப்பட்ட தொகுதிகள் செல்கள் ஒரு T25 இல் உள்ளன என்று கருதுகின்றன):
   அ) மலட்டு நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தி, மீடியாவை அகற்றி, 2-3 மில்லி மலட்டு எச்.பி.எஸ்.எஸ். HBSS ஐ அகற்றி நிராகரிக்கவும்.
   b) 1 மில்லி டிரிப்சின் சேர்த்து 2-3 நிமிடங்கள் அடைகாக்கும். செல்கள் தலைகீழ் நுண்ணோக்கின் கீழ் சரிபார்க்கப்பட வேண்டும், அவை வட்டமிடுவதற்கும், தூக்குவதற்கும், மிதப்பதற்கும் தொடங்கியுள்ளனவா என்பதை தீர்மானிக்க. 3 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு செல்கள் பிரிக்கப்படாவிட்டால், நீங்கள் மற்றொரு 1-2 நிமிடங்களுக்கு அடைகாக்கலாம்.
   c) தொப்பியை இறுக்கி, அனைத்து செல்களை வெளியேற்றுவதற்காக பக்கத்திலிருந்து பக்கமாக மெதுவாக நுனி பிளாஸ்கை. தேவைப்பட்டால் செல்களை தளர்த்துவதற்கு பக்கவாட்டில் லேசாக தட்டலாம்.
   d) ட்ரிப்சின் செயலிழக்க செல்கள் மிதந்தவுடன் 4 மில்லி புதிய மீடியாவை பிளாஸ்கில் சேர்க்கவும். புதிய செல்கள் மூலம் பிளாஸ்கின் பக்கங்களை பல முறை துவைக்க, எல்லா கலங்களையும் பிளாஸ்டிக்கிலிருந்து கழுவவும், கரைசலில் வைக்கவும். கலங்களைக் கொண்ட அனைத்து திரவங்களையும் அகற்றி, 15 மில்லி கூம்புக்கு மாற்றவும் (அல்லது நீங்கள் 50 அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட ஃபிளாஸ்களை பூல் செய்தால் 3 மில்லி).
   e) மலட்டு நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தி, ஒரு ஹீமோசைட்டோமீட்டரில் எண்ணுவதற்கு ஒரு அலிகோட்டை அகற்றவும்.
   f) நீங்கள் கலங்களை எண்ணும்போது, ​​மீதமுள்ள தீர்வு மருத்துவ மையவிலக்கத்தில் 5 நிமிடங்கள் 1000 ஆர்.பி.எம்.
3. உங்கள் செல் எண்ணிக்கையைக் கணக்கிட்ட பிறகு, 2.5 x 10 இல் தட்டு செல்கள்⁵ T25 வடிப்பான் மேல் குடுவைக்கு செல்கள்.
4. ஒவ்வொரு 2-3 நாட்களிலும் செல்கள் புதிய வளர்ச்சி ஊடகத்துடன் வழங்கப்பட வேண்டும்.

உறைபனி:

கலங்கள் 5 x 10 க்கு குறையாமல் உறைந்திருக்க வேண்டும்⁵ 10% டி.எம்.எஸ்.ஓ மற்றும் 30% எஃப்.பி.எஸ் ஆகியவற்றைக் கொண்ட வளர்ச்சி ஊடகங்களில் செல்கள் / மில்லி / கிரையோவல் மற்றும் பின்னர் ஒரே இரவில் -80˚ சி வெப்பநிலையில் ஒரு ஐசோபிரபனோல் உறைபனி அறையில் வைக்கப்படுகிறது. அடுத்த நாள் திரவ நைட்ரஜனுக்கு மாற்றவும்.

துணை கலாச்சாரம் மற்றும் உறைபனி ஃபைப்ரோபிளாஸ்ட்களுக்கான நெறிமுறை