পিআরএফ সেল লাইন গলা

1. একটি 37˚C জল স্নানে দ্রুত ঘর গলাতে।
2. 70% ইথানল দিয়ে শিশিরের বাইরের অংশটি মুছুন।
3. গলিত কক্ষগুলি একটি T25 ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন যাতে বৃদ্ধি মিডিয়াতে 5 মিলি থাকে।
4. রাতারাতি 37˚C ইনকিউবেটারে ফ্লাস্ক রাখুন।
5. পরের দিন, কক্ষগুলি সংযুক্ত রয়েছে তা নিশ্চিত করতে মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করুন।
6. মিডিয়া সরান এবং তাজা বৃদ্ধি মিডিয়া সঙ্গে প্রতিস্থাপন।

উপ-সংস্কৃতি PRF সেল লাইন

1. সংমিশ্রিত হলে ঘরগুলি বিভক্ত করা উচিত।
2. কক্ষগুলি বিভক্ত করতে (প্রদত্ত খণ্ডগুলি কোষগুলি একটি T25- এ রয়েছে ধরে নেওয়া হচ্ছে):
   ক) জীবাণুমুক্ত কৌশল ব্যবহার করে মিডিয়া সরিয়ে ফেলুন এবং জীবাণুমুক্ত এইচবিএসএসের 2-3 মিলি দিয়ে ফ্লাস্ক ধুয়ে ফেলুন। এইচবিএসএস সরান এবং বাতিল করুন।
   খ) ১ মিলি ট্রাইপসিন যুক্ত করুন এবং ২-৩ মিনিটের জন্য জ্বালান। কোষগুলি বৃত্তাকার, উত্তোলন এবং ভাসমান শুরু করেছে কিনা তা নির্ধারণ করার জন্য একটি উল্টানো মাইক্রোস্কোপের নীচে পরীক্ষা করা উচিত। যদি 1 মিনিটের পরে যদি ঘরগুলি আলাদা না করা হয় তবে আপনি আরও 2-3 মিনিট উত্পন্ন করতে পারেন।
   গ) ক্যাপটি শক্ত করুন এবং সমস্ত কোষকে অপসারণের জন্য আলতো করে পাশ থেকে একপাশে আলতো চাপ দিন। প্রয়োজনবোধে কোষগুলি আলগা করতে ফ্লাস্ক হালকাভাবে আলতো চাপতে পারে।
   ঘ) ট্রিপসিন নিষ্ক্রিয় করতে কোষগুলি ভেসে উঠার সাথে সাথে ফ্লাস্কে 4 মিলি নতুন মিডিয়া যুক্ত করুন। প্লাস্টিকের বাইরে থেকে সমস্ত ঘরের ধোয়া এবং সমাধানের জন্য নতুন মিডিয়া দিয়ে ফ্লাস্কের পক্ষগুলি কয়েকবার ধুয়ে ফেলুন। সমস্ত তরলযুক্ত কোষগুলি সরিয়ে ফেলুন এবং একটি 15 মিলি শঙ্কুতে স্থানান্তর করুন (বা আপনি যদি 50 বা ততোধিক ফ্লাস্ক সরবরাহ করছেন তবে 3 মিলি)।
   ঙ) জীবাণুমুক্ত কৌশল ব্যবহার করে হিমোসাইটোমিটারে গণনা করার জন্য একটি অ্যালিকোট সরান।
   চ) আপনি সেলগুলি গণনা করার সময়, বাকি সমাধানটি 5 মিনিটের জন্য ক্লিনিকাল সেন্ট্রিফিউজে 1000 মিনিটের জন্য কাটাতে হবে।
3. আপনার সেল গণনা গণনা করার পরে, 2.5 x 10 এ প্লেট ঘরগুলি⁵ প্রতি T25 টির উপরে ফ্লাস্ক ফিল্টার করুন।
4. কক্ষগুলি প্রতিটি এক্সএনইউএমএক্স-এক্সএনইউএমএক্স দিন তাজা বৃদ্ধির মাধ্যম দিয়ে খাওয়ানো উচিত।

ঠাণ্ডা:

কক্ষগুলি 5 x 10 এর চেয়ে কম হিমায়িত করা উচিত⁵ 10% ডিএমএসও এবং 30% এফবিএস সমন্বিত গ্রোথ মিডিয়াতে কোষ / মিলি / ক্রিওভিয়াল এবং পরবর্তীকালে -80˚ সি-তে একটি আইসোপ্রোপানল ফ্রিজিং চেম্বারে স্থাপন করা হয়। পরের দিন তরল নাইট্রোজেনে স্থানান্তর করুন।

সাবক্ল্যাচারিং এবং ফাইব্রোব্লাস্টগুলি জমা করার জন্য প্রোটোকল