انتخاب Page

د فایبروبلاسټ حجره

د کلتور پروتوکولونه

 

د فرعی بلاستونو د فرعی کولو او کنګل کولو پروتوکول

وده میډیا

DMEM - د ترمیم فشیر # 11960-044 (له L - ګلوټامین پرته لوړ ګلوکوز)

15 F FBS د جنین بیوین سیرم - د ترمو فشیر # 10437-028

د 1 ((1X) پینسیلین - سټراټومیټین - د ترمو فشیر # 15140-122

1٪ (1X) ګلوټیماکس - د ترمو فشیر # 35050-061

ټریپسن

د ټریپسن EDTA C 0.25 ((د ترمو فشیر # 25200-056)

د هانک متوازن مالګه حل

HBSS- (ThermoFisher #14170 (1X) (-) کلسيم کلسیم ، (-) مګنیزیم کلوراید ، (-) مګنیزیم سلفیټ

د یخولو لپاره DMSO

د سیل کلتور درجې DMSO - سیګما #D2438

د PRF حجرو لاین تیروي

  1. په 37˚C اوبو حمام کې په چټکۍ سره حجرې غوړ کړئ.
  2. د 70 et ایتانول سره د وایل بهر مسح کړئ.
  3. ژړل شوي حجرې د T25 فلاسک ته انتقال کړئ چې د ودې میډیا 5 ملی لیتر لري.
  4. په شپه کې په 37ubC انکیوبیټر کې فلاسک ځای په ځای کړئ.
  5. په بله ورځ ، د مایکروسکوپ لاندې وګورئ ترڅو ډاډ ترلاسه کړئ چې حجرې تړلي دي.
  6. میډیا لرې کړئ او د تازه ودې رسنۍ سره ځای په ځای کړئ.

د PRF سیل سیل کرښې سبکول

  1. حجرې باید تقسیم شي کله چې متوافق وي.
  2. د حجرو ویشلو لپاره (ورکړل شوي مقدارونه فرض کیږي حجرې په T25 کې دي):
    a) د بې تعصب تخنیک په کارولو سره ، میډیا لرې کړئ او فلاسک له 2-3 ملی لیتې بې تعصب HBSS سره پاک کړئ. د HBSS لرې کول او ګوښه کول.
    b) 1 ملی لیتر ټریپزین اضافه کړئ او د 2-3 دقیقو لپاره غوړ کړئ. حجرې باید د متغیر مایکروسکوپ لاندې وکتل شي ترڅو معلومه کړي چې ایا دوی پورته ، پورته کولو او تیرولو پیل کړی که نه. که چیرې حجرې د 3 دقیقو وروسته جلا نه شي ، تاسو ممکن بل 1-2 دقیقې غوړ کړئ.
    c) کیپ سخت کړئ او په نرمۍ سره فلاسک له اړخ څخه بل خوا ته واچوئ ترڅو ټولې حجرې خارج کړئ. فلاسک ممکن د اړتیا په صورت کې د حجرو خلاصیدو لپاره په لږه اندازه سره ټیپ شي.
    d) 4 ملی لیتره نوې میډیا په فلاسک کې اضافه کړئ کله چې حجرې د تپپیسین غیر فعال کولو لپاره تیر شي. د نوي میډیا سره د فلاسک اړخونه څو ځله پاک کړئ ترڅو ټول حجرې له پلاستيک څخه وینځئ او حل ته یې ولرئ. ټول مایع لرونکي حجرې لرې کړئ او 15ML کونیکي ته یې انتقال کړئ (یا 50 ملی لیتر ته که تاسو 3 یا ډیر فاسکس ولرئ).
    e) د تعقیم تخنیک په کارولو سره ، د هیموسایټومیټر حساب کولو لپاره الیواکټ لرې کړئ.
    f) پداسې حال کې چې تاسو حجرې حساب کوئ ، پاتې حل باید په 5 rpm کې د 1000 دقیقو لپاره په کلینیکي سنټرفیوج کې سپن شي.
  3. ستاسو د حجرې محاسبې وروسته ، په 2.5 x 10 کې د پلیټ حجرې5 حجرې په T25 سرپا flaه فلاسک.
  4. حجرې باید هره 2-3 ورځو کې د تازه ودې مینځنۍ سره خواړه ورکړل شي.

يخ وهل:

حجرې باید د 5 x 10 څخه لږ نه کنګل شي5 حجرې / ml / cryovial د ودې میډیا کې 10 D DMSO او 30 F FBS لري او بیا وروسته -80ightC کې د اسوپروپانول کنګل چیمبر کې ځای په ځای کوي. بله ورځ مایع نایټروجن ته انتقال کړئ.

د فرعی بلاستونو د فرعی کولو او کنګل کولو پروتوکول

د نورو معلوماتو لپاره مهرباني وکړئ اړیکه ونیسئ:

لیسلی بی ګورډن ، MD ، پی ایچ ډی

د براډن پوهنتون د پیډیاټریکس ریسرچ پروفیسر وارین الپرټ میډیکل سکول او د ماشومانو د څانګې څانګې ، د هسبرو ماشومانو روغتون ، پروویډینشن ، د انستیزیا RI ډیپارټمنټ ، د ماشومانو روغتون بوسټن او هارورډ میډیکل سکول ، بوسټن ، د MA پروجیریا ریسرچ فاونډیشن.

تيليفون: 978-535-2594
فاکس: 508-543-0377
lgordon@progeriaresearch.org

وینډي نوریس
د PRF سیل او نسج بانک
تلیفون: 401-274-1122 x 48063
wnorris@lifespan.org