पीआरएफ सेल लाइन ओघळत आहे

1. 37˚C वॉटर बाथमध्ये वेगाने पेशी वितळवा.
2. 70% इथेनॉल सह कुपीच्या बाहेरील भाग पुसून टाका.
3. वितळलेल्या पेशींना एक्सएनयूएमएक्स मिली मिलीग्राम वाढीच्या टीएक्सएनयूएमएक्स फ्लास्कमध्ये स्थानांतरित करा.
4. रात्रभर 37˚C इनक्यूबेटरमध्ये फ्लास्क ठेवा.
5. दुसर्‍या दिवशी, पेशी संलग्न झाल्या आहेत याची खात्री करण्यासाठी सूक्ष्मदर्शकाखाली निरीक्षण करा.
6. मीडिया काढा आणि नवीन ग्रोथ मीडियासह पुनर्स्थित करा.

उपसमूह पीआरएफ सेल लाइन

1. संगम असताना पेशी विभाजित केल्या पाहिजेत.
2. सेल विभाजित करण्यासाठी (दिलेली परिमाण पेशी एक टीएक्सएनयूएमएक्समध्ये आहेत असे गृहीत धरून आहेत):
   अ) निर्जंतुकीकरण तंत्राचा वापर करून, मिडिया काढून टाका आणि निर्जंतुकीकरण एचबीएसएसच्या 2-3 मिलीलीटरसह फ्लास्क स्वच्छ धुवा. एचबीएसएस काढा आणि टाकून द्या.
   ब) १ मि.ली. ट्रायपसीन घालून २- 1-2 मिनिटे ओतणे. सेलने गोल करणे, लिफ्ट करणे आणि फ्लोट करण्यास सुरवात केली आहे की नाही हे निर्धारित करण्यासाठी एका व्युत्पन्न सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासणी केली पाहिजे. जर 3 मिनिटांनंतर पेशी विलग न झाल्यास आपण आणखी १-२ मिनिटे उष्मायन करू शकता.
   c) टोपी कडक करा आणि सर्व पेशी काढून टाकण्यासाठी हळूवारपणे फ्लास्क टिप करा. आवश्यक असल्यास पेशी सोडविण्यासाठी फ्लास्क बाजूला हलके टॅप केले जाऊ शकते.
   ड) ट्रिपसीन निष्क्रिय करण्यासाठी पेशी फ्लोटिंग होताच 4 मिलीलीटर नवीन मीडियाला फ्लास्कवर जोडा. प्लॅस्टिकमधून आणि सोल्यूशनमध्ये सर्व पेशी धुण्यासाठी नवीन माध्यमांसह कित्येक वेळा फ्लास्कच्या बाजू खाली धुवा. सर्व द्रव असलेले पेशी काढून टाका आणि 15 मिली शंकूच्या आकारात स्थानांतरित करा (किंवा आपण 50 किंवा अधिक फ्लास्क टाकत असल्यास 3 मि.ली.)
   e) निर्जंतुकीकरण तंत्राचा वापर करून, हेमोसाइटोमीटर मोजण्यासाठी एक अलिकोट काढा.
   f) आपण पेशी मोजत असताना, उर्वरित सोल्यूशन क्लिनिकल सेंट्रीफ्यूजमध्ये 5 आरपीएमवर 1000 मिनिटे ठेवले पाहिजे.
3. आपल्या सेल मोजणीनंतर, एक्सएनयूएमएक्स एक्स एक्सएनयूएमएक्सवर प्लेट सेल⁵ प्रति टीएक्सएनयूएमएक्स सेल टॉप फ्लास्क.
4. पेशी प्रत्येक एक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स दिवसात ताजे वाढीसह दिले जाव्यात.

अतिशीत:

5 x 10 पेक्षा कमी नसल्यास सेल गोठविले जावेत⁵ पेशी / मिली / क्रायोव्हियल ज्यात ग्रोथ मीडियामध्ये 10% डीएमएसओ आणि 30% एफबीएस असतात आणि त्यानंतर -80 डिग्री सेल्सियस रात्रभर आयसोप्रोपानॉल फ्रीझिंग चेंबरमध्ये ठेवतात. दुसर्‍या दिवशी लिक्विड नायट्रोजनमध्ये स्थानांतरित करा.

सबकल्चरिंग आणि फ्रीज फायब्रोब्लास्ट्ससाठी प्रोटोकॉल