PRF ұяшықтарының сызықтарын еріту

1. 37˚C су моншасында тез еритін жасушалар.
2. Шишаның сыртын 70% этанолмен сүртіңіз.
3. Ерітілген жасушаларды 25 мл өсу ортасы бар T5 колбасына өткізіңіз.
4. Күнделікті 37˚C инкубаторына колбаны салыңыз.
5. Келесі күні микроскоптың көмегімен жасушалардың бекітілгенін тексеріңіз.
6. Тасымалдағышты алып тастап, жаңа өсетін медиамен ауыстырыңыз.

Субкультура жасушалары PRF

1. Жуылған кезде жасушалар бөлінуі керек.
2. Бөлінетін жасушаларға (берілген көлемдер T25-ге сәйкес келеді):
   а) Стерильді техниканы қолданып, ортаны алып тастаңыз және колбаны 2-3 мл стерильді HBSS-мен шайыңыз. HBSS-ті алып тастаңыз.
   б) 1 мл трипсин қосып, 2-3 минут инкубациялаңыз. Жасушаларды дөңгелектеуді, көтеруді және жүзуді бастағанын анықтау үшін оларды төңкерілген микроскоппен тексеру керек. Егер 3 минуттан кейін жасушалар ажыратылмаса, сіз тағы 1-2 минут жасыра аласыз.
   в) қақпақты қатайтыңыз және барлық ұяшықтарды ығыстыру үшін колбаны бір жағынан екінші жағына ақырын қойыңыз. Қажет болса, жасушаларды босату үшін колбаны жанынан аздап түртуге болады.
   г) Трипсинді инактивациялау үшін жасушалар жүзіп бара жатқанда колбаға 4 мл жаңа ортаны қосыңыз. Пластмассадан және ерітіндіге барлық жасушаларды жуу үшін колбаның бүйірлерін жаңа құралдармен бірнеше рет шайыңыз. Құрамындағы барлық сұйықтықтарды алып тастап, 15 мл конустыққа ауыстырыңыз (немесе 50 немесе одан да көп колбаларды біріктіріп жатсаңыз, 3 мл).
   д) Стерильді техниканы қолдана отырып, гемоцитометрде санау үшін аликвотаны алып тастаңыз.
   f) Сіз жасушаларды санап жатқанда, қалған ерітінді клиникалық центрифугада 5 минут ішінде 1000 айн / мин айналдырылуы керек.
3. Ұяшықтар санын есептегеннен кейін 2.5 x 10 өлшемді тақталар⁵ T25 сүзгісінің жоғарғы колбасына бір ұяшық.
4. Әрбір 2-3 күнде жасушалар өсіп-өну ортасымен бірге тамақтандырылуы керек.

Мұздату:

Ұяшықтар 5 x 10-ден кем болмауы керек⁵ 10% DMSO және 30% FBS бар өсу ортасында жасушалар / мл / криовиалды және кейін түнде -80˚C температурада изопропанолды мұздату камерасына орналастырады. Келесі күні сұйық азотқа ауыстырыңыз.

Субкультура және мұздату фибробласттары үшін хаттама