10e atelier scientifique international du PRF

Répondre: Les études PK/PD ont indiqué la biodisponibilité du 100% dans le cœur, l'aorte et le rein. Le rein était le seul tissu où il y avait une suggestion d'accumulation, d'après l'examen histologique et les données PK/PD. L'administration d'une dose unique de SRP-2001 a démontré que le PPMO était rapidement éliminé du cœur (dans les 2 heures), éliminé de l'aorte dans les 4 heures, mais maintenu dans le rein jusqu'au point de temps de 48 heures. La ddPCR quantitative a démontré une activité d'inhibition de l'épissage cryptique G608G dans tous les tissus à l'exception de la peau testée jusqu'à présent (aorte, cœur, rein, foie, quadriceps, os), bien que l'activité ait varié en fonction du tissu.

Francis, Mike et Wayne

Répondre:En ce qui concerne la question, pour être honnête, je ne connais pas la réponse à cette question. Chez un adulte typique, cependant, nous ne corrélons pas le degré de calcification valvulaire avec l'apport en Mg/Ca, la calcification plus importante est probablement due à d'autres facteurs.

Dr Pinak Shah

Répondre: Je suis d'accord avec l'opinion du Dr Shah. Les causes de la calcification des valves dans le syndrome de Heidegger sont probablement différentes de celles que nous observons chez les patients âgés. Je n'ai également aucune connaissance du métabolisme du Ca et du Mg.

Dr Francesco Musumeci

Répondre: Le lamin A/C nul (Lmna^-/-) modèle de souris développe une DCM accompagnée d'une perte de la fonction cardiaque. De plus, ces souris présentent des défauts de conduction cardiaque et une fibrose cardiaque étendue, ainsi qu'une mort prématurée à l'âge de 5 à 8 semaines (Auguste et al., 2018 ; Frock et al., 2012 ; Sullivan, 1999). Cependant, les modèles de souris dépourvus uniquement de lamine A (Fong et al., 2006) ou de lamine C (Coffinier et al., 2010) ne présentent pas de défauts cardiaques et ont une durée de vie normale.

Références:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT et Marian, AJ (2018). La suppression des facteurs de transcription FOXO activés dans le cœur prolonge la survie dans un modèle murin de laminopathies. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). La synthèse directe de la lamine A, en contournant le traitement de la prélamine a, provoque des noyaux déformés dans les fibroblastes mais aucune pathologie détectable chez la souris. Journal de chimie biologique, 285(27), 20818–20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang, SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). La prélamine A et la lamine A semblent être dispensables dans la lame nucléaire. Journal de recherche clinique, 116(3), 743–752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). L'expression spécifique de la lamine A dans les cardiomyocytes améliore la fonction cardiaque chez les souris Lmna-/-. PLoS ONE, 7(8), 1–9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). La perte d'expression de la lamine de type A compromet l'intégrité de l'enveloppe nucléaire, conduisant à une dystrophie musculaire. Journal de biologie cellulaire, 147(5), 913–920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Question: De Tom Misteli : combien de temps a duré le traitement lonafarnib + tozilizumab chez les animaux ?
Répondre: Nous avons réalisé une expérience préliminaire sur des animaux hétérozygotes à partir de la semaine 22 jusqu'à la semaine 30. Nous souhaitons nous concentrer sur cette période pour évaluer l'effet sur la prise de poids qui a été précédemment observé avec le tocilizumab.

Question: De Sgonzalo : Belle histoire Giovanna et Sammy !!! Avez-vous constaté des effets secondaires du traitement au tocilizumab ? Ou des phénotypes qui n'ont pas été améliorés chez les souris atteintes de progéria ? Au Dr Giovanna Lattanzi : Question : De Tom Misteli : combien de temps a duré le traitement au lonafarnib + tozilizumab chez les animaux ?
Répondre: Merci Susana. Non, nous n'avons observé aucun effet secondaire du tocilizumab. Parmi les phénotypes examinés (cyphose, dystrophie du tissu adipeux, défauts des cheveux et de la peau, activité locomotrice, lésions de l'aorte et hypertrophie du myocarde), ceux-ci ont été retardés/améliorés.

Commentaire: De MARIE GERHARD-HERMAN : Également utilisé aux États-Unis pour les maladies rhumatismales et les vascularites
Répondre: Merci Marie pour ces infos intéressantes sur l'utilisation pour les vascularites.

Commentaire: D'après PC Stefano : Le tocilizumab est également approuvé au Japon pour le traitement de la maladie de Castleman sans effets immunosoppresseurs
Répondre: Merci Stefano pour ces infos.

Question: De Delphine Larrieu : constatez-vous une diminution des dommages à l'ADN suite au traitement à la progérinine dans les cellules HGPS/modèles de souris HGPS ?
Répondre: Nous avons observé que les gènes liés à la réparation de l’ADN (BRCA1, Rad51, etc.) étaient altérés après un traitement à la progérinine.

Question: De Delphine Larrieu : Comment agit la progérinine chez Werner
Syndrome qui, à ma connaissance, n’exprime pas la progérine ? La molécule a-t-elle d’autres cibles ?
Répondre: Les cellules WS peuvent également produire une petite quantité de progérine comme les cellules vieillissantes normales.
cellules. Nous avons observé l'expression de la progérine dans les cellules WS au niveau de l'ARNm.
Nous pensons que la protéine WRN peut fonctionner pour inhiber la progérine. Cependant, dans le
cas des patients WS, puisqu'il n'y a pas de protéine WRN, l'expression de la progérine est
on pense qu'elle se produit dans la vingtaine et la trentaine, tout comme elle est observée chez les personnes d'âge normal
personnes.

Question: De Bob Bishop : Le site de liaison de la progérinine est-il défini biochimiquement ou
structurellement ? Existe-t-il un test biochimique pour trouver des composés supplémentaires
avec ce mécanisme ?
Répondre: Nous avons effectué un test de traction de billes de biotine-avidine et observé la
interaction spécifique de la pérogérinine avec la progérine mais pas avec la lamine A, la lamine
B, p53 ou émérine.
Nous avons également effectué un test Elisa pour trouver des composés supplémentaires qui pourraient
être des inhibiteurs putatifs de la liaison progérine/lamine A. La protéine recombinante progérine a été incubée séquentiellement avec une bibliothèque chimique et la lamine A.
Cependant, la progérinine était le produit chimique le plus efficace dans le domaine chimique.
bibliothèque.

Question: De John Cooke : De grands progrès Dr Kim. La progérinine réduit-elle la
sécrétion de cytokines SASP ?
Répondre: Nous avons observé que la progérinine pouvait réduire l’expression de l’IL6 et de l’IL8 dans
Cellules HGPS.

Question: De Susan Michaelis : la progérinine est-elle disponible pour les chercheurs ?
Répondre: Bien sûr, il est disponible si vous le demandez.

Question: De Thomas W Glover : Je l'ai peut-être manqué, mais selon vous, quelle est la
mécanisme responsable des effets bénéfiques dans le syndrome de Werner ?
Répondre: Les cellules dérivées de patients atteints du WS produisent également une petite quantité de progérine, comme
comme les cellules normales dérivées de personnes âgées. La progérinine peut également être
efficace dans les cellules WS en réduisant l’expression de la progérine.

Répondre: Merci pour la question : Non, pas d'inflammation en soi. En partie liée à l'inflammation, nous avons étudié les macrophages dans ce projet et avons découvert que l'élimination de Icmt en augmentant l'efflux de cholestérol des macrophages, à la fois basal et stimulé par l'ApoAI et le HDL. Comme cet effet est parfois associé à une augmentation du transport inverse du cholestérol in vivo, nous aimerions déterminer si Icmt l’inhibition réduirait le développement de l’athérosclérose.

Question: De vandres : avez-vous essayé la correction de l'ADN dans des fibroblastes HGPS humains d'âges différents (in vitro) et testé la normalisation de leur phénotype pour voir s'il diminue à mesure que les cellules vieillissent ?
Répondre: Non, nous n’avons pas essayé de corriger les fibroblastes de patients d’âges différents, mais seulement ceux de deux patients différents, ce qui a donné des résultats similaires.

Question: De Delphine Larrieu : Des effets étonnants ! On s'attendrait à une inhibition complète de la progérine chez les souris hétérozygotes ?
Répondre: Chez la souris à copie unique, je ne m'attendrais pas nécessairement à des efficacités d'édition très différentes de celles que nous observons actuellement, car il devrait déjà y avoir un excès d'agent d'édition pour chaque progérine.

Question: D'André Monteiro Da Rocha : Pensez-vous que la reprogrammation d'un faible pourcentage de cellules peut réparer la fonction des cellules souches, mais pourrait conduire à l'épuisement des cellules souches adultes ?
Répondre: Nous ne disposons d’aucune donnée permettant de répondre à cette question.

Question: De Mei : Cela ressemble à un cardiomyocyte, belle coloration !
D'Abby Buchwalter : L'expression dominante négative de Sun1 perturbe-t-elle tous les complexes LINC, y compris ceux médiés par Sun2 ?
Répondre: Oui, il existe des preuves in vitro de cela dans la mesure où toutes les Nesprines du NE peuvent être déplacées par DNSUN1

Question: De Suet Nee Chen : comment et quel est le mécanisme par lequel l'AAV9-SunDn est capable d'avoir des effets à long terme ? À quel âge avez-vous injecté l'AAV9-Sun1DN aux souris mutantes LMNA ?
Répondre: Nous avons injecté l'AAV DNSUN1 un jour après avoir induit la recombinase Cre pour supprimer la laminA. Nous avons des données montrant que le DNSUN1 délivré par l'AAV continue d'être exprimé dans les cardiomyocytes un an après l'injection. Nous effectuons des expériences de dosage/temps/réponse maintenant que nous sommes de retour au laboratoire et que nous pouvons fabriquer notre propre AAV en quantités suffisantes

Question: De Martin Bergö, Viceordförande Kommittén för forskning : Selon vous, quelle est la contribution relative de la lamine A absente par rapport à la lamine C dans vos expériences d'inactivation de Lmna ?
Répondre: Je n'en suis pas sûr, mais Sun1 interagit avec LaminA et chez les souris HGPS, la contribution doit être entièrement LaminA (dont la progérine est dérivée)

Question: De jcampisi : Quelle est la cause du décès chez SUN1 KO ou hets ?
Répondre: Bonne question, nous ne savons toujours pas, mais nous suspectons actuellement un groupe de muscles squelettiques. Nous devons faire une analyse histopathologique décente des souris mourantes.

Question: De Tom Misteli : Colin : avez-vous observé des changements dans les voies de réponse au stress cellulaire chez les animaux Lmna/Sun ?
Répondre: Nous n'avons pas encore mesuré de gènes/marqueurs de réponse au stress chez ces souris.

Question : De Delphine Larrieu : Envisageriez-vous de cibler uniquement le cœur avec le DNSUN1 chez les patients HGPS ?
Répondre: Cela est possible grâce au sérotype et à l'utilisation d'un promoteur spécifique des cardiomyocytes. Ces expériences sont actuellement en cours

Question:De Yuexia Wang : Pourquoi KO SUN1 a moins d'avantages sur les souris homozygotes G609G ?
Répondre: Probablement parce que les souris homozygotes expriment plus de progérine. Nous observons un effet de réponse des hétérozygotes par rapport aux homozygotes dans nos expériences génétiques

Question:De Roland Foisner : Salut Colin, bonne discussion. Quel est l'effet négatif de la régulation positive de SUN1 dans HGPS. Roland
Répondre: Il est probable que le réseau MT soit associé de manière accrue au complexe LINC. L'augmentation de l'expression de Sun/Nesprin dans les cellules en culture affecte le positionnement nucléaire et la migration cellulaire.

C'est un honneur de rencontrer la famille Basso et Peraut. Merci d'avoir partagé votre parcours. Vous êtes vraiment une source d'inspiration !

Merci à la famille de Sami et Alexandra d'avoir participé à l'atelier et d'avoir partagé votre parcours inspirant avec la progéria !

Progrès fantastiques Eiger avec approbation à l'horizon.

Pouvons-nous prolonger cette séance jusqu'à la fin de la semaine et poursuivre la discussion ? (MERCI à tous !) 

Cet atelier était incroyable. Je félicite la PRF d'avoir eu l'engagement de faire cette belle activité. Sans aucun doute, cet atelier m'a apporté beaucoup de connaissances pour mon avenir. C'était incroyable. Ensemble, nous trouverons le remède !

Toujours impressionné par la science passionnante des réunions du PRF. Un grand bravo aux organisateurs pour avoir préservé l'expérience de l'atelier communautaire même dans ce format virtuel !

Vous êtes tous géniaux !!! Merci pour cette superbe opportunité, je pense que c'était il y a de nombreuses années, maintenant c'est comme vivre dans le futur ! Je suis heureux d'en faire partie

La guitare du Dr Collin me manque. Bon travail !

Merci beaucoup d'avoir organisé cela, vraiment le point culminant de ma semaine !

Merci à tous et à bientôt en personne l'année prochaine à Cambridge !!

 Merci à tous de nous avoir rejoint !