10° Workshop scientifico internazionale della PRF

Risposta: Studi PK/PD hanno indicato la biodisponibilità di 100% nel cuore, nell'aorta e nei reni. Il rene era l'unico tessuto in cui c'era un suggerimento di accumulo, sulla base dell'esame istologico e dei dati PK/PD. La somministrazione di una dose singola di SRP-2001 ha dimostrato che PPMO è stato rapidamente eliminato dal cuore (entro 2 ore), eliminato dall'aorta entro 4 ore, ma mantenuto nel rene fino al punto temporale di 48 ore. La ddPCR quantitativa ha dimostrato l'attività di inibizione dello splicing criptico G608G in tutti i tessuti eccetto la pelle finora testata (aorta, cuore, rene, fegato, quadricipite, osso), sebbene l'attività variasse a seconda del tessuto.

Francesco, Mike e Wayne

Risposta:Per quanto riguarda la domanda, per essere onesti, non conosco la risposta a questa domanda. In un adulto tipico, tuttavia, non correliamo il grado di calcificazione valvolare con l'assunzione di Mg/Ca, la calcificazione più pesante è probabilmente dovuta ad altri fattori.

Dott. Pinak Shah

Risposta: Sono d'accordo con l'opinione del dott. Shah. Probabilmente le cause della calcificazione valvolare nell'HGPS sono diverse da quelle che vediamo nei pazienti anziani. Inoltre, non ho alcuna conoscenza sul metabolismo di Ca e Mg.

Dott. Francesco Musumeci

Risposta: La lamina A/C null (Lmna^-/-) il modello murino sviluppa DCM accompagnato da perdita della funzionalità cardiaca. Inoltre, questi topi presentano difetti nella conduzione cardiaca e fibrosi cardiaca estesa, e morte prematura a 5-8 settimane di età (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Tuttavia, i modelli murini privi solo di Lamin A (Fong et al., 2006) o Lamin C (Coffinier et al., 2010) non mostrano difetti cardiaci e hanno una durata di vita normale.

Riferimenti:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT, & Marian, AJ (2018). La soppressione dei fattori di trascrizione FOXO attivati nel cuore prolunga la sopravvivenza in un modello murino di laminopatie. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). La sintesi diretta della lamina A, bypassando l'elaborazione della prelamina a, causa nuclei deformi nei fibroblasti ma nessuna patologia rilevabile nei topi. Rivista di chimica biologica, 285(27), 20818–20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang, SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). La prelamina A e la lamina A sembrano essere dispensabili nella lamina nucleare. Il giornale di investigazione clinica, 116(3), 743–752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). L'espressione specifica dei cardiomiociti della lamina A migliora la funzione cardiaca nei topi Lmna-/-. PLoS UNO, 7Italiano: (8), 1–9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). La perdita dell'espressione della lamina di tipo A compromette l'integrità dell'involucro nucleare, portando alla distrofia muscolare. Il giornale di biologia cellulare, 147(5), 913–920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Domanda: Da Tom Misteli: quanto è durato il trattamento con lonafarnib + tozilizumab negli animali?
Risposta: Abbiamo eseguito un esperimento preliminare su animali eterozigoti a partire dalla settimana 22 fino alla settimana 30. Vogliamo concentrarci su questo intervallo di tempo per valutare l'effetto sull'aumento di peso precedentemente osservato con tocilizumab.

Domanda: Da Sgonzalo: Bellissima storia Giovanna e Sammy!!! Avete notato effetti collaterali del trattamento con tocilizumab? O fenotipi che non sono migliorati nei topi con progeria? Alla dott. ssa Giovanna Lattanzi: Domanda: Da tom misteli: quanto è durato il trattamento con lonafarnib + tozilizumab negli animali?
Risposta: Grazie Susana. No, non abbiamo visto alcun effetto collaterale del tocilizumab. Tra i fenotipi esaminati (cifosi, distrofia del tessuto adiposo, difetti dei capelli e della pelle, attività locomotoria, lesioni dell'aorta e ipertrofia del miocardio) sono stati ritardati/migliorati.

Commento: Da MARIE GERHARD-HERMAN: Utilizzato anche negli Stati Uniti per malattie reumatologiche e vasculite
Rispondere: Grazie Marie per queste interessanti informazioni sull'uso nella vasculite.

Commento: Da pc stefano: Tocilizumab approvato anche in Giappone per il trattamento della malattia di Castleman senza effetti immunosoppressivi
Rispondere: Grazie Stefano per queste informazioni.

Domanda: Da Delphine Larrieu: noti una diminuzione del danno al DNA in seguito al trattamento con progerina nelle cellule HGPS/modelli di topi HGPS?
Risposta: Abbiamo osservato che i geni correlati alla riparazione del DNA (BRCA1, Rad51, ecc.) sono risultati alterati dopo il trattamento con progerina.

Domanda: Da Delphine Larrieu: Come funziona la progerina in Werner
Sindrome che – per quanto ne so – non esprime progerina? La molecola ha altri target?
Risposta: Le cellule WS possono anche produrre una piccola quantità di progerina come le cellule invecchiate normali
cellule. Abbiamo osservato l'espressione della progerina nelle cellule WS a livelli di mRNA.
Pensiamo che la proteina WRN possa funzionare per inibire la progerina. Tuttavia, nel
nel caso dei pazienti con WS, poiché non è presente la proteina WRN, l'espressione della progerina è
si pensa che si verifichi tra i 20 e i 30 anni, come avviene anche nelle persone di età normale
persone.

Domanda: Da Bob Bishop: Il sito di legame della progerina è definito biochimicamente o
strutturalmente? Esiste un test biochimico per trovare composti aggiuntivi
con questo meccanismo?
Risposta: Abbiamo eseguito un test di pull-down delle sfere di biotina-avidina e abbiamo osservato l'
interazione specifica della perogerinina con la progerina ma non con la lamina A, la lamina
B, p53 o emerina.
Abbiamo anche eseguito il test Elisa per trovare composti aggiuntivi che potrebbero
essere presunti inibitori del legame progerina/lamina A. La proteina ricombinante progerina è stata incubata sequenzialmente con una libreria chimica e lamina A.
Tuttavia, la progerina è stata la sostanza chimica più efficace nel
biblioteca.

Domanda: Da John Cooke: Grandi progressi, dottor Kim. La progerina riduce la
secrezione di citochine SASP?
Risposta: Abbiamo osservato che la progerina potrebbe ridurre l'espressione di IL6 e IL8 in
Celle HGPS.

Domanda: Da Susan Michaelis: la progerina è a disposizione dei ricercatori?
Risposta: Naturalmente, è disponibile se lo richiedi.

Domanda: Da Thomas W Glover: Potrei averlo perso, ma cosa pensi che sia il
meccanismo responsabile degli effetti benefici nella sindrome di Werner?
Risposta: Le cellule derivate dai pazienti WS producono anche una piccola quantità di progerina, come
tanto quanto le cellule normali derivate da persone anziane. La progerinina può essere anche
efficace nelle cellule WS riducendo l'espressione della progerina.

Risposta: Grazie per la domanda: no, non infiammazione di per sé. Parzialmente correlata all'infiammazione, abbiamo studiato i macrofagi in questo progetto e abbiamo scoperto che knockout di ICMTA in aumenta l'efflusso di colesterolo dei macrofagi, sia basale che stimolato da ApoAI e HDL. Poiché questo effetto è talvolta associato a un aumento del trasporto inverso del colesterolo in vivo, vorremmo determinare se ICMTA l'inibizione ridurrebbe lo sviluppo dell'aterosclerosi.

Domanda: Da vandres: hai provato la correzione del DNA nei fibroblasti HGPS umani di età diverse (in vitro) e hai testato la normalizzazione del loro fenotipo per vedere se diminuisce con l'invecchiamento delle cellule?
Risposta: No, non abbiamo provato la correzione su fibroblasti di pazienti di età diverse, ma solo su due pazienti diversi, che hanno prodotto risultati simili.

Domanda: Da Delphine Larrieu: Effetti sorprendenti! Ti aspetteresti un KO completo della progerina nei topi eterozigoti?
Risposta: Nel topo a copia singola, non mi aspetterei necessariamente efficienze di editing molto diverse da quelle che osserviamo attualmente, poiché dovrebbe già esserci un eccesso di agente di editing per ogni progerina.

Domanda: Da Andre Monteiro Da Rocha: Pensi che la riprogrammazione di una bassa percentuale di cellule possa riparare la funzionalità delle cellule staminali, ma potrebbe portare all'esaurimento delle cellule staminali adulte?
Risposta: Non disponiamo di dati che possano fornire una risposta a questa domanda.

Domanda: Da Mei: Sembrano cardiomiociti, bellissima colorazione!
Da Abby Buchwalter: L'espressione dominante negativa di Sun1 interrompe tutti i complessi LINC, compresi quelli mediati da Sun2?
Risposta: Sì, ci sono prove in vitro di ciò, in quanto tutte le Nesprin nel NE possono essere sostituite da DNSUN1

Domanda: Da Suet Nee Chen: come e qual è il meccanismo con cui l'AAV9-SunDn è in grado di avere effetti a lungo termine? A che età hai iniettato l'AAV9-Sun1DN nei topi mutanti LMNA?
Risposta: Abbiamo iniettato l'AAV DNSUN1 un giorno dopo aver indotto la ricombinasi Cre a eliminare la lamina A. Abbiamo dati che indicano che l'AAV DNSUN1 somministrato dall'AAV continua a essere espresso nei cardiomiociti un anno dopo l'iniezione. Stiamo eseguendo esperimenti di dose/tempo/risposta ora che siamo tornati in laboratorio e possiamo produrre il nostro AAV in quantità sufficienti.

Domanda: Da Martin Bergö, Viceordförande Kommittén för forskning: Quale pensi sia il contributo relativo della lamina A assente rispetto alla lamina C nei tuoi esperimenti ad eliminazione diretta su Lmna?
Risposta: Non ne sono sicuro, ma Sun1 interagisce con LaminA e nei topi HGPS il contributo deve essere tutto LaminA (da cui deriva la progerina)

Domanda: Da jcampisi: Qual è la causa della morte in SUN1 KO o hets?
Risposta: Bella domanda, non lo sappiamo ancora, ma attualmente sospettiamo che si tratti di un gruppo di muscoli scheletrici. Dobbiamo fare un'analisi istopatologica decente dei topi morenti.

Domanda: Da Tom Misteli: Colin: hai notato cambiamenti nei percorsi di risposta allo stress cellulare negli animali Lmna/Sun?
Risposta: Non abbiamo ancora misurato alcun gene/marcatore di risposta allo stress in questi topi

Domanda: Delphine Larrieu: Prevedete di colpire solo il cuore con il DNSUN1 nei pazienti con HGPS?
Risposta: Ciò è possibile dato il sierotipo e l'uso di un promotore specifico per i cardiomiociti. Tali esperimenti sono attualmente in corso

Domanda:Da Yuexia Wang: Perché KO SUN1 ha meno benefici sui topi G609G omozigoti?
Risposta: Presumibilmente perché i topi omozigoti esprimono più Progerina. Vediamo un effetto di risposta delle femmine degli eterozigoti rispetto agli omozigoti nei nostri esperimenti genetici

Domanda:Da Roland Foisner: Ciao Colin, bella chiacchierata. Qual è l'effetto negativo del SUN1 sovraregolato in HGPS. Roland
Risposta: Probabilmente aumentata associazione della rete MT con il complesso LINC. L'aumentata espressione di Sun/Nesprin nelle cellule di coltura influisce sul posizionamento nucleare e sulla migrazione cellulare

È stato un onore incontrare la famiglia Basso e Peraut. Grazie per aver condiviso il vostro viaggio. Siete davvero un'ispirazione!

Grazie alla famiglia di Sami e Alexandra per aver preso parte al workshop e aver condiviso il vostro stimolante percorso con la progeria!

Fantastici progressi dell'Eiger con approvazione all'orizzonte.

Possiamo prolungare questa sessione fino alla fine della settimana e continuare la discussione? (GRAZIE a tutti!) 

Questo workshop è stato incredibile. Mi congratulo con la PRF per l'impegno dimostrato nel fare questa fantastica attività. Senza dubbio, questo workshop mi ha riempito di un sacco di conoscenze per il mio futuro. È stato fantastico. Insieme troveremo la cura!

Sono sempre rimasto colpito dall'entusiasmante scienza degli incontri PRF. Tanti complimenti agli organizzatori per aver preservato l'esperienza del workshop della comunità anche in questo formato virtuale!

Siete tutti ROCK!!! Grazie per questa grande opportunità, pensando a tanti anni fa, ora è come vivere nel futuro! Felice di farne parte

Mi manca la chitarra del Dr. Collin. Ottimo lavoro!

Grazie mille per aver organizzato tutto questo, è stato davvero il momento clou della mia settimana!

Grazie a tutti e arrivederci di persona l'anno prossimo a Cambridge!!

 Grazie a tutti per essere stati con noi!