Antworten: PK / PD-Studien zeigten eine 100% ige Bioverfügbarkeit in Herz, Aorta und Niere. Die Niere war das einzige Gewebe, bei dem aufgrund der histologischen Untersuchung und der PK / PD-Daten ein Hinweis auf eine Akkumulation vorlag. Die einmalige Verabreichung von SRP-2001 zeigte, dass PPMO schnell aus dem Herzen entfernt wurde (innerhalb von 2 Stunden), innerhalb von 4 Stunden aus der Aorta entfernt wurde, aber in der Niere bis zum 48-Stunden-Zeitpunkt anhielt. Quantitativer ddPCR zeigte eine kryptische G608G-Spleißhemmungsaktivität in allen Geweben mit Ausnahme der bisher getesteten Haut (Aorta, Herz, Niere, Leber, Quadrizeps, Knochen), obwohl die Aktivität je nach Gewebe variierte.

Francis, Mike und Wayne

Antworten:Um ehrlich zu sein, kenne ich die Antwort auf diese Frage nicht. Bei einem typischen Erwachsenen korrelieren wir jedoch nicht den Grad der Klappenverkalkung mit der Mg / Ca-Aufnahme. Die stärkere Verkalkung ist wahrscheinlich auf andere Faktoren zurückzuführen.

Dr. Pinak Shah

Antworten: Ich stimme der Meinung von Dr. Shah zu. Wahrscheinlich unterscheiden sich die Ursachen der Klappenverkalkung bei HGPS von denen bei älteren Patienten. Ich habe auch keine Kenntnisse über den Ca- und Mg-Metabolismus.

Dr. Francesco Musumeci

Antworten: Die Lamin A / C null (Lmna^{- / -}) Mausmodell entwickelt DCM begleitet von Verlust der Herzfunktion. Darüber hinaus zeigen diese Mäuse Defekte in der Herzleitung und ausgedehnte Herzfibrose sowie einen vorzeitigen Tod im Alter von 5 bis 8 Wochen (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Mausmodelle, denen nur Lamin A (Fong et al., 2006) oder Lamin C (Coffinier et al., 2010) fehlt, zeigen jedoch keine Herzfehler und haben eine normale Lebensdauer.

References:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT & Marian, AJ (2018). Die Unterdrückung aktivierter FOXO-Transkriptionsfaktoren im Herzen verlängert das Überleben in einem Mausmodell für Laminopathien. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG & Young, SG (2010). Die direkte Synthese von Lamin A unter Umgehung der Prelamin-A-Verarbeitung führt bei Fibroblasten zu unförmigen Kernen, bei Mäusen jedoch zu keiner nachweisbaren Pathologie. Journal of Biological Chemistry, 285(27), 20818-20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang , SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO & Young, SG (2006). Prelamin A und Lamin A scheinen in der Kernschicht entbehrlich zu sein. Das Journal der klinischen Untersuchung, 116(3), 743-752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS & Kennedy, BK (2012). Die kardiomyozytenspezifische Expression von Lamin A verbessert die Herzfunktion bei Lmna - / - Mäusen. PLoS ONE, 7(8), 1-9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). Der Verlust der Lamin-Expression vom A-Typ beeinträchtigt die Integrität der Kernhülle und führt zu Muskeldystrophie. Das Journal of Cell Biology, 147(5), 913-920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Frage: Von Tom Misteli: Wie lange dauerte die Behandlung mit Lonafarnib + Tokilizumab bei Tieren?
Antworten: Wir haben ein vorläufiges Experiment an heterozygoten Tieren von Woche 22 bis Woche 30 durchgeführt. Wir möchten uns auf diesen Zeitrahmen konzentrieren, um den Effekt auf die Gewichtszunahme zu bewerten, der zuvor mit Tocilizumab beobachtet wurde.

Frage: Von Sgonzalo: Schöne Geschichte Giovanna und Sammy !!! Haben Sie Nebenwirkungen der Behandlung mit Tocilizumab gesehen? Oder irgendwelche Phänotypen, die bei Progeria-Mäusen nicht verbessert wurden? An Dr. Giovanna Lattanzi: Frage: Von Tom Misteli: Wie lange dauerte die Behandlung mit Lonafarnib + Tokilizumab bei Tieren?
Antworten: Danke Susana. Nein, wir haben keine Nebenwirkungen von Tocilizumab gesehen. Unter den untersuchten Phänotypen (Kyphose, Fettgewebedystrophie, Haar- und Hautdefekte, Bewegungsaktivität, Aortenläsionen und Myokardhyperthrophie) waren verzögert / verbessert.

Kommentar: Von MARIE GERHARD-HERMAN: Wird auch in den USA bei Rheumatologen und Vaskulitis eingesetzt
Antworten: Vielen Dank, Marie, für diese interessanten Informationen zur Anwendung bei Vaskulitis.

Kommentar: Von PC Stefano: Tocilizumab ist auch in Japan zur Behandlung der Castleman-Krankheit ohne immunsuppressive Wirkung zugelassen
Antworten: Danke Stefano für diese Infos.

Frage: Von Delphine Larrieu: Sehen Sie eine Abnahme des DNA-Schadens bei Progerinin-Behandlung in HGPS-Zellen / HGPS-Mausmodellen?
Antworten: Wir beobachteten, dass DNA-Reparatur-verwandte Gene (BRCA1, Rad51 usw.) nach Behandlung mit Progerinin verändert wurden.

Frage: Von Delphine Larrieu: Wie wirkt Progerinin in Werner?
Syndrom, das - soweit ich weiß - kein Progerin ausdrückt? Hat das Molekül andere Ziele?
Antworten: WS-Zellen können auch eine kleine Menge Progerin produzieren, wie im normalen Alter
Zellen. Wir beobachteten die Progerinexpression in WS-Zellen auf mRNA-Ebene.
Wir glauben, dass das WRN-Protein Progerin hemmen kann. In der
Bei WS-Patienten ist die Progerinexpression, da kein WRN-Protein vorhanden ist
Es wird angenommen, dass es in den 20er und 30er Jahren auftritt, so wie es im normalen Alter zu sehen ist
Menschen.

Frage: Von Bob Bishop: Ist die Progerinin-Bindungsstelle biochemisch definiert oder
strukturell? Gibt es einen biochemischen Test, um zusätzliche Verbindungen zu finden?
mit diesem Mechanismus?
Antworten: Wir führten einen Biotin-Avidin-Perlen-Pulldown-Assay durch und beobachteten den
spezifische Wechselwirkung von Perogerinin mit Progerin, jedoch nicht mit Lamin A, Lamin
B, p53 oder Emerin.
Wir haben auch den Elisa-Assay durchgeführt, um zusätzliche Verbindungen zu finden, die dies könnten
mutmaßliche Progerin / Lamin A-Bindungsinhibitoren sein. Rekombinantes Progerin-Protein wurde nacheinander mit einer chemischen Bibliothek und Lamin A inkubiert.
Progerinin war jedoch die wirksamste Chemikalie in der Chemikalie
Bibliothek.

Frage: Von John Cooke: Großer Fortschritt, Dr. Kim. Reduziert Progerinin die
Sekretion von SASP-Zytokinen?
Antworten: Wir beobachteten, dass Progerinin die Expression von IL6 und IL8 in reduzieren könnte
HGPS-Zellen.

Frage: Von Susan Michaelis: Steht Progerinin Forschern zur Verfügung?
Antworten: Natürlich ist es auf Anfrage erhältlich.

Frage: Von Thomas W Glover: Ich habe es vielleicht verpasst, aber was denkst du ist das?
Mechanismus, der für die vorteilhaften Wirkungen beim Werner-Syndrom verantwortlich ist?
Antworten: Von WS-Patienten stammende Zellen produzieren auch eine kleine Menge Progerin
ähnlich wie normale Zellen von älteren Menschen. Progerinin kann auch sein
wirksam in WS-Zellen durch Verringerung der Progerinexpression.

Antworten: Danke für die Frage: Nein, keine Entzündung an sich. Teilweise im Zusammenhang mit Entzündungen haben wir in diesem Projekt Makrophagen untersucht und festgestellt, dass Knockout von Icmt erhöht den Cholesterinausfluss von Makrophagen, sowohl basal als auch ApoAI- und HDL-stimuliert. Da dieser Effekt manchmal mit einem erhöhten umgekehrten Cholesterintransport in vivo verbunden ist, möchten wir feststellen, ob Icmt Eine Hemmung würde die Entwicklung von Atherosklerose verringern.

Frage: Von vandres: Haben Sie versucht, DNA in menschlichen HGPS-Fibroblasten unterschiedlichen Alters (in vitro) zu korrigieren, und die Normalisierung ihres Phänotyps getestet, um festzustellen, ob er mit zunehmendem Alter der Zellen abnimmt?
Antworten: Nein, wir haben keine Korrektur bei Fibroblasten von Patienten unterschiedlichen Alters versucht - nur von zwei verschiedenen Patienten, was zu ähnlichen Ergebnissen führte.

Frage: Von Delphine Larrieu: Erstaunliche Effekte! Würden Sie bei heterozygoten Mäusen einen vollständigen Progerin-KO erwarten?
Antworten: Bei der Einzelkopie-Maus würde ich nicht unbedingt viel andere Bearbeitungseffizienzen erwarten als derzeit beobachtet, da für jedes Progerin bereits ein Überschuss an Bearbeitungsmitteln vorhanden sein sollte.

Frage: Von Andre Monteiro Da Rocha: Glauben Sie, dass eine Neuprogrammierung eines geringen Prozentsatzes der Zellen die Stammzellenfunktion reparieren kann, aber zu einer Erschöpfung der adulten Stammzellen führen könnte?
Antworten: Wir haben keine Daten, die eine Antwort auf diese Frage liefern könnten.

Frage: Von Mei: Sieht aus wie Kardiomyozyten, schöne Färbung!
Von Abby Buchwalter: Stört die dominante negative Sun1-Expression alle LINC-Komplexe, einschließlich der durch Sun2 vermittelten?
Antworten: Ja, es gibt Hinweise dafür in vitro, dass alle Nesprine im NE durch DNSUN1 verdrängt werden können

Frage: Von Suet Nee Chen: Wie und welchen Mechanismus kann der AAV9-SunDn langfristig wirken? In welchem ​​Alter haben Sie den mutierten LMNA-Mäusen AAV9-Sun1DN injiziert?
Antworten: Wir injizierten das DNSUN1 AAV einen Tag, nachdem wir die Cre-Rekombinase induziert hatten, um laminA zu löschen. Wir haben Daten, dass das von AAV gelieferte DNSUN1 ein Jahr nach der Injektion weiterhin in den Kardiomyozyten exprimiert wird. Wir führen jetzt, da wir wieder im Labor sind, Dosis- / Timing- / Reaktionsexperimente durch und können unser eigenes AAV in ausreichenden Mengen herstellen

Frage: Von Martin Bergö, Viceordförande Kommittén för forskning: Was ist Ihrer Meinung nach der relative Beitrag von fehlendem Lamin A zu Lamin C in Ihren Lmna-Knockout-Experimenten?
Antworten: Ich bin mir nicht sicher, aber Sun1 interagiert mit LaminA und bei den HGPS-Mäusen muss der Beitrag ausschließlich LaminA sein (von dem Progerin abgeleitet ist).

Frage: Von jcampisi: Was ist die Todesursache bei SUN1 KO oder hets?
Antworten: Gute Frage, die wir noch nicht kennen, aber derzeit eine Skelettmuskelgruppe vermuten. Wir brauchen keine anständige Histo-Patho-Analyse der sterbenden Mäuse

Frage: Von Tom Misteli: Colin: Haben Sie Veränderungen in den zellulären Stressreaktionswegen bei den Lmna / Sun-Tieren gesehen?
Antworten: Wir haben noch keine Stressantwortgene / -marker in diesen Mäusen gemessen

Frage: Von Delphine Larrieu: Würden Sie sich vorstellen, bei HGPS-Patienten nur das Herz mit DNSUN1 anzusprechen?
Antworten: Dies ist angesichts des Serotyps und der Verwendung eines Kardiomyozyten-spezifischen Promotors möglich. Diese Experimente sind derzeit im Gange

Frage:Von Yuexia Wang: Warum hat KO SUN1 bei homozygoten G609G-Mäusen weniger Nutzen?
Antworten: Vermutlich, weil die homozygoten Mäuse mehr Progerin exprimieren. Wir sehen in unseren genetischen Experimenten einen Do-Response-Effekt von Heterozygoten gegen Homozygoten

Frage:Von Roland Foisner: Hallo Colin, nettes Gespräch. Was ist der negative Effekt von hochreguliertem SUN1 in HGPS? Roland
Antworten: Vermutlich erhöhte Assoziation des MT-Netzwerks mit dem LINC-Komplex. Eine erhöhte Sun / Nesprin-Expression in Kulturzellen beeinflusst die Kernpositionierung und die Zellmigration

Eine Ehre, die Familie Basso und Peraut kennenzulernen. Vielen Dank für Ihre Reise. Du bist wirklich und Inspiration!

Vielen Dank an Sami und Alexandras Familie, dass sie Teil des Workshops sind und Ihre inspirierende Reise mit Progeria teilen!

Fantastischer Fortschritt Eiger mit Zustimmung am Horizont.

Können wir diese Sitzung bis zum Ende der Woche verlängern und die Diskussion fortsetzen? (DANKE euch allen!) 

Dieser Workshop war unglaublich. Ich gratuliere dem PRF zu seiner Verpflichtung, diese großartige Aktivität durchzuführen. Dieser Workshop hat mich ohne Zweifel mit viel Wissen für meine Zukunft gefüllt. Es war wundervoll. Gemeinsam werden wir das Heilmittel finden!

Immer beeindruckt von der spannenden Wissenschaft bei den PRF-Treffen. Ein großes Lob an die Organisatoren für die Erhaltung der Community-Workshop-Erfahrung auch in diesem virtuellen Format!

Sie alle ROCK !!! Vielen Dank für diese großartige Gelegenheit, an die wir vor vielen Jahren gedacht haben. Jetzt ist es wie in der Zukunft zu leben! Freut mich, ein Teil davon zu sein

Ich vermisse Dr. Collins Gitarre. Gut gemacht!

Vielen Dank, dass Sie dies organisiert haben, wirklich der Höhepunkt meiner Woche!

Vielen Dank an alle und bis zum nächsten Jahr in Cambridge!

 Vielen Dank, dass Sie sich uns angeschlossen haben!